Resistência aos antimicrobianos e diversidade genética de variantes fenotípicas de Pseudomonas aeruginosa não sensíveis aos carbapenêmicos recuperadas de pacientes com fibrose cística com infecção pulmonar crônica: uma análise temporal / Antimicrobial resistance and genetic diversity of phenotypic variants of carbapenem non susceptible Pseudomonas aeruginosa recovered from patients with cystic fibrosis with chronic lung infection: a temporal analysis

Pseudomonas aeruginosa, bactéria ubíqua e versátil, pode se comportar como um patógeno oportunista, com ampla capacidade adaptativa, por múltiplos fatores de virulência e resistência. Como agente patogênico nas infecções pulmonares em pacientes com fibrose cística (FC), é motivo de prognóstico ruim, aumento de hospitalizações e altas taxas de morbimortalidade, sendo quase impossível a sua erradicação, ao evoluírem para a cronicidade. Globalmente, é notável o aumento nos índices de amostras não sensíveis aos carbapenêmicos e a múltiplos antimicrobianos, essenciais à terapêutica. Assim, avaliamos temporalmente a susceptibilidade aos antimicrobianos e a presença de amostras hipermutáveis (HPM) em P. aeruginosa de diferentes morfotipos, não sensíveis aos carbapenêmicos (PANSC), obtidas de pacientes FC com infecção pulmonar crônica, acompanhados em dois centros de referência no Rio de Janeiro. De 2007 a 2016, a análise retrospectiva, através dos resultados obtidos no teste de disco-difusão (TDD), permitiu selecionar amostras de PANSC incluídas neste trabalho. Usando os resultados obtidos no TDD, foi definida a susceptibilidade a outros antimicrobianos, bem como os fenótipos de resistência, multi-(MDR), extensivo-(XDR) e pandroga resistentes (PDR). Adicionalmente, determinou-se a concentração inibitória mínima (CIM) para imipenem (IPM), meropenem (MEM), doripenem (DOR) e polimixina (POL). Através de teste fenotípico, foi calculada a frequência de mutação espontânea e as amostras hipermutáveis foram caracterizadas. O sequenciamento de genoma total (SGT) foi realizado em seis amostras de diferentes morfotipos, incluindo uma variante fenotípica rara, a small colony variant (SCV). Essas amostras foram recuperadas em dois episódios de exacerbação do paciente. Foram investigadas a clonalidade, resistência a antimicrobianos e virulência. Das 143 amostras, de 18 pacientes (9 pediátricos e 9 adultos), os resultados do TDD apontaram taxas de não susceptibilidade superiores a 44% para gentamicina, amicacina, tobramicina e ciprofloxacina, e maiores de 30 % para POL. Pela determinação da CIM, quase a totalidade (96%) das amostras foram não sensíveis a IMP, seguidos de 56% para MEM e 44% para DOR. Analisando-se a distribuição dos valores da CIM50 e CIM90 nos dois grupos de pacientes, os valores para IMP foram maiores entre as amostras dos pacientes pediátricos, equivalendo a 32 µg/mL e 64 µg/mL, respectivamente. Cerca de 25%, 37% e 6% eram MDR, XDR e PDR, respectivamente. Aproximadamente 12% eram HPM, e mais da metade destas foram XDR. Após o SGT, as seis amostras, recuperadas do caso clínico foram classificadas em um novo sequence type (ST2744), com a presença de genes de resistência adquiridos blaPAO, blaOXA-50, aph(3')-Iib, fosA, catB7 e crpP, apresentando mutações em genes codificadores de porinas e bombas de efluxo. Entretanto, não foram observados marcadores genéticos clássicos exclusivos para os fenótipos SCV e HPM. Este é o primeiro relato de P. aeruginosa SCV na FC, no Brasil. A vigilância epidemiológica de P. aeruginosa é crucial para a conduta terapêutica, bem como para o sucesso da resposta do paciente e erradicação da infecção pulmonar, justificando o uso de técnicas fenotípicas e moleculares na detecção dos mecanismos de resistência e virulência desse microrganismo na FC.

Pseudomonas aeruginosa, a ubiquitous and versatile bacterium, can behave as an opportunistic pathogen, with strong adaptive capacity, due to multiple virulence and resistance factors. As a pulmonary infection pathogen in patients with cystic fibrosis (CF), it is related with poor prognosis, increased hospitalizations and high rates of morbidity and mortality, and the eradication is almost impossible, especially after chronicity. The increase rates of isolates non-susceptible to carbapenem and multiple antimicrobials, essentials to therapy, have been observed worldwide. Therefore, we assessed the antimicrobial susceptibility and the presence of hypermutability (HPM) in non-susceptible to carbapenem P. aeruginosa (PANSC) isolates from different morphotypes, obtained from CF patients with chronic pulmonary infection, followed at two reference centers in Rio de Janeiro. Using the results obtained by disk-diffusion test (DDT) between 2007 to 2016, we select 143 PANSC and susceptibility to other antimicrobials was defined, as well as the resistance phenotypes, multi- (MDR), extensive- (XDR) and pandrug resistant (PDR). Additionally, the minimum inhibitory concentration (MIC) for imipenem (IPM), meropenem (MEM), doripenem (DOR) and polymyxin (POL) was determined. Hypermutable isolates were characterized by determination of mutation frequency. Whole genome sequencing (WGS) was performed in six morphotypes isolates, including the small colony variant (SCV), a rare variant phenotype. These isolates were recovered in two exacerbation episodes. Clonality, antimicrobial resistance and virulence were investigated. Of the total (143 isolates) isolated from 18 patients (9 pediatric and 9 adults), non-susceptibility rates above than 44% for gentamicin, amikacin, tobramycin and ciprofloxacin, and more than 30% for POL were observed. Almost all (96%) of the isolates were non-susceptible to IPM by MIC determination, followed by 56% for MEM and 44% for DOR. MIC50 (32 µg/mL) and MIC90 (64 µg/mL) rates for IPM were higher among pediatric patient isolates and 25%, 37% and 6% were MDR, XDR and PDR, respectively. 12% of all isolates were classified as HPM and more than half were categorized as XDR. Using WGS, the six isolates recovered from the clinical case, were identified as a new sequence type (ST2744). Acquired resistance genes blaPAO, blaOXA-50, aph (3')-Iib, fosA, catB7 and crpP and mutations in encoding genes for porins and efflux pumps, was annotated. None exclusive classic genetic markers related to SCV and HPM phenotypes were not observed. This is the first Brazilian report of P. aeruginosa SCV in CF. Our results highlight the importance of epidemiological surveillance in P. aeruginosa. The application of phenotypic and molecular techniques to investigate resistance and virulence mechanisms, can contribute to therapeutic success in CF.

In-Vitro Efficacy of Synergistic Antibiotic Combinations in Multidrug Resistant Pseudomonas Aeruginosa Strains

PURPOSE: Combination antibiotic treatment is preferred in nosocomial infections caused by Pseudomonas aeruginosa (P. aeruginosa). In vitro synergism tests were used to choose the combinations which might be used in clinic. The aim of this study was to investigate the synergistic efficacy of synergistic antibiotic combinations in multidrug resistant P. aeruginosa strains. MATERIALS AND METHODS: Synergistic efficacies of ceftazidime-tobramycin, piperacillin/tazobactam-tobramycin, imipenem-tobramycin, imipenem-isepamycin, imipenem-ciprofloxacin and ciprofloxacin-tobramycin combinations were investigated by checkerboard technique in 12 multiple-resistant and 13 susceptible P. aeruginosa strains. RESULTS: The ratios of synergy were observed in ceftazidime-tobramycin and piperacillin/tazobactam-tobramycin combinations as 67%, and 50%, respectively, in resistant strains, whereas synergy was not detected in other combinations. The ratios of synergy were observed in ceftazidime-tobramycin, piperacillin/tazobactam-tobramycin, imipenem-tobramycin, imipenem-ciprofloxacin and imipenem-isepamycin combinations as 31%, 46%, 15%, 8%, 8%, and respectively, in susceptible strains, whereas synergy was not detected in ciprofloxacin-tobramycin combination. Antagonism was not observed in any of the combinations. CONCLUSION: Although the synergistic ratios were high in combinations with ceftazidime or piperacillin/tazobactam and tobramycin, the concentrations in these combinations could not usually reach clinically available levels. Thus, the solution of the problems caused by multiple resistant P. aeruginosa should be based on the prevention of the development of resistance and spread of the causative agent between patients.

Flora conjuntival y sensibilidad antibiótica en pacientes a ser sometidos a cirugía de catarata y LASIK / Antibiotic susceptibility of bacterial conjunctival flora isolated from patients undergoing LASIK and cataract surgery

Objetivo: Conocer y proveer de evidencia acerca de la sensibilidad de la flora bacteriana normal de la superficie ocular aislada en dos diferentes grupos sociales y etáreos de pacientes prontos a someterse a cirugía de Catarata y LASIK en nuestro país. Materiales y Métodos: Se cultivaron muestran conjuntivales de 221 pacientes previo a LASIK y de 180 pacientes de un grupo de Cataratas. De haber un cultivo positivo se realizó aislamiento e identificación bacteriana utilizando la técnica de difusión en disco de Kirby-Bauer para doce antibióticos. El análisis estadístico se hizo con chi-cuadrado y el test exacto de Fisher. Resultados: Hubo 66,8 por ciento de cultivos positivos, más frecuentemente gran positivos. SCN fue el aislado en mayor porcentaje (92,2 por ciento) y mostró una alta sensibilidad a Cloramfenicol, Tobramicina, Moxifloxacino y Gatifloxacino, intermedia para Levofloxacino, Gentamicina y Ciprofloxacino y menor para Eritromicina, Oxacilina, Cefalotina y Ceftriaxona (p<0,01). Todos los cultivos fueron sensibles a Vancomicina. No hubo diferencia estadísticamente significativa entre ambos grupos. Conclusiones: 1. Por primera vez nuestros resultados muestran que la flora y sensibilidad antibiótica son similares en pacientes a ser sometidos a LASIK y Catarata, siendo los SCN los más frecuentemente encontrados en ambos grupos de pacientes. 2. Las bacterias más comúnmente aisladas permanecen altamente sensibles a Cloramfenicol, Tobramicina, Moxifloxacino y Gatifloxacino.

Purpose: To know and provide a background on antibiotic susceptibility of normal ocular surface bacterial flora isolated from two different social and age groups of patients undergoing LASIK and cataract surgery in our country. Material and Methods: Conjunctival samples of 221 patients in a LASIK group and 180 patients in a cataract surgery group were cultivated. When there were a positive cultures, isolation and identification of the bacteria were made and antibiotic susceptibility tests were carried out, using the Kirby-Bauer disc diffusion technique for twelve antibiotics. Statistical analysis was performed using chi-square and exact Fisher test. Results: There were 66.8 percent of positive cultures, most of them gram positives. The most frequently isolated bacteria were the CNS (92,2 percent) that showed high sensitivity for Chloramphenicol, Tobramycin, Moxifloxacin and Gatifloxacin, intermedia for Levofloxacin, Gentamicin and Ciprofloxacin and lowest for Erytomycin, Oxacillin, Cefalotin and Ceftriaxone (p<0,01). All the cultures were susceptible to Vancomycin. There was not statistically difference between LASIK and cataract group. Conclusions: 1. For the first time, our results have shown that the conjunctival flora and its sensitivity to antibiotics are similar in the conjunctival flora of the patients undergoing LASIK surgery and Cataract, being CNS the bacterium most frequently found in both different groups of patients. 2. The most frequently isolated conjunctival bacteria remained highly sensitive to Chloramphenicol, Tobramycin, Moxifloxacin and Gatifloxacin.

Efficacy of 0.3% topical ciprofloxacin and tobramycin ophthalmic solutions in the treatment of experimental Pseudomonas aeruginosa keratitis in rabbits

To compare the efficacy of topical ciprofloxacin 0.3% with tobramycin 0.3% ophthalmic solution for treating the Pseudomonas aeruginosa keratitis in the rabbits. P. aeruginosa was isolated from infected human eye of patients attending Akhtar Eye Hospital, Karachi. Rabbits were obtained from the animal house of Pakistan Council of Scientific and Industrial Research [PCSIR]. Experimental bacterial keratitis was induced in rabbits by corneal intrastromal injection. Infection proceeded for 24 hours; all eyes developed corneal ulcer without pretreatment with immunosuppressive agents. Topical ciprofloxacin 0.3% and tobramycin 0.3% ophthalmic solutions were applied in the eyes of test group rabbits and normal saline solutions 0.9% was applied in the eyes of control group rabbits for 72 hours respectively. Corneas were then removed and corneal homogenates were plated with serial dilutions for quantitative bacteriology. Culture results from 20 corneas of the test group rabbits and 6 of the control group were studied. In the test group that was treated with ciprofloxacin, 10 of 10 corneas were sterile while 5 of 10 corneas in the test group II that was treated with tobramycin were sterile after 72 hours of treatment. In control group 6 of 6 corneas were still positive. It is found that ciprofloxacin 0.3% is superior to tobramycin 0.3% solution in treating experimental P. aeruginosa keratitis in rabbit's model. It is concluded that ciprofloxacin 0.3% solution was superior for P. aeruginosa compared to tobramycin 0.3% solution in treating experimental keratitis in rabbit's model

Invitro comparative evaluation of aminoglycosides at a cancer centre.

A comparative study of in vitro activity of amikacin, gentamicin, netilmicin, tobramycin and isepamicin was done. A total of 200 clinical isolates of Gram negative organisms from various clinical sources were tested. E.Coli was the most frequently isolated organism followed by Pseudomonas spp., Klebsiella spp., Proteus spp., Acinetobacter spp. and Enterobacter spp. Of the 5 aminoglycosides tested, isepamicin showed the highest numbers of susceptible isolates followed by amikacin, netilmicin, gentamicin and tobramycin. MIC 90 value of isepamicin was lower as compared to amikacin.

Sensibilidade aos antimicrobianos de amostras Pseudomonas aeruginosa e acinetobacter spp: dados do programa de vigilância RESISTNET Brasil / Antimicrobial susceptibility of pseudomonas aeruginosa e acinetobacter spp: RESISTNET Brasil surveillance program

O programa RESISTNET é um estudo de vigilância de resistência bacteriana a diversos antimicrobianos. Trata-se de um projeto latino-americano iniciado em abril de 1998. No final de 1999, este programa no Brasil passou a denominar-se RESISTNET Brasil. Um dos principais objetivos deste estudo é gerar dados pontuais, atualizados e confiáveis da atual situaçäo da resistência bacteriana a diversos antimicrobianos. Neste trabalho, apresentamos os resultados obtidos durante 12 meses (janeiro a dezembro de 1999), num total de 705 amostras bacterianas, respectivamente 524 amostras de Pseudomonas aeruginosa e 181 amostras de Acinobacter spp, isoladas de diversos materiais clínicos provenientes de pacientes da comunidade (167 amostras) e hospitalizados (538 amostras) de 13 centros em seis cidades brasileiras (Säo Paulo, Porto Alegre, Curitiba, Brasília, Salvador e Fortaleza). Os isolados foram testados pelo método da difuçäo do disco, de acordo com as normas estipuladas pelo NCCLS (11), aos seguintes antimicrobianos: aztreonam, amicacina, cefepima, ceftazidima, cefoperazona, colistina, ciprofloxacina, gentamicina, imipenem, piperacilina,ticarcilina/ácido clavulânico, amplicilina/sulbactam e tobramicina, Em relaçäo a Pseudonomas aeruginosa, os antimicrobianos mais ativos foram, respectivamente: colistina, imipenem, ceftazidima, cefepima e ciprofloxacina (taxas de sensibilidade de 100 por cento, 78,6 por cento, 77 por cento, 67,6 por cento e 66 por cento). Para Acinobacter spp, os antimicrobianos mais ativos foram: colistina, imipenem, amplicilina/sulbactram e trobamicina (taxas de sensibilidade de 100 por cento, 98,9 por cento, 82,8 por cento e 55,6 por cento respectivamente). As amostras de origem hospitalar apresentaram índices maiores de resistência quando comparadas com as amostras provenientes da comunidade. Os resultados deste levantamento mostram a importância de estudos de resistência aos microbianos, pois estes bacilos Gram negativos näo fermentadores, além de serem responsáveis por diversas infecçöes humanas, mostram significativas taxas de resistência a diversos antimicrobianos

In vitro activity of netilmicin against clinical isolates of methicillin resistant and susceptible Staphylococcus aureus.

BACKGROUND: The emergence of methicillin-resistant Staphylococcus aureus and its multidrug-resistant property has led to the search for an effective antibiotic to combat staphylococcal sepsis. At present, vancomycin remains the most effective antibiotic. This study evaluated the in vitro efficacy of netilmicin (an aminoglycoside) and compared its activity with 4 other antibiotics, viz. vancomycin, amikacin, tobramycin and ofloxacin. METHODS: The minimum inhibitory concentration of the antibiotics was determined by the agar dilution method. Thirty strains each of methicillin-resistant and -susceptible S. aureus isolated from pus and blood cultures were included. RESULTS: The susceptibility to netilmicin was found to be 100% and was the same as that observed for vancomycin. CONCLUSION: All the methicillin-resistant S. aureus strains tested showed 100% susceptibility to netilmicin, suggesting its use in patients with such infections as an alternative to vancomycin. However, this finding needs to be verified in the clinical setting.

Tratamiento de la blefaroconjuntivitis y queratoconjuntivitis con ciprofloxacina al 0.3 por ciento vs tobramicina al 0.3 por ciento en solucion oftálmica / Treatment of blepharoconjunctivitis and keratoconjunctivitis with ciprofloxinine 0.3 por ciento vs tobramicine 0.3 por ciento in ophtalmic solution

Se diseño un estudio doble ciego, prospectivo, longitudinal y experimental comparando la eficacia, tolerancia y toxicidad de la criprofloxacina y la tobramicina tópica al 0.3 por ciento en el tratamiento de las blefaroconjuntivitis y las queratoconjuntivitis. Se incluyeron 40 ojos en cada grupo, encontrando que ambos fármacos son igualmente efectivos para erradicar o reducir los gérmenes causantes de infección en un 95 por ciento. La ciprofloxacina dismuyó el lagrimeo y prurito en forma estadísticamente más importante (p<0.05) que la tombracina además de ser mejor tolerada y no haber provocado efectos tóxicos secundarios

Effect of subminimal inhibitory concentration of Aminoglycosides on some Gram-Negative Bacilli

The effect of pre-incubation of Ps. aeruginosa and E. coli with subminimal inhibitory concentrations [sub-MICs] of tobramycin and amikacin on the adherence of these organisms was studied. Pre-incubation with sub-MICs of tobramycin or amikacin significantly enhanced the adherence for Ps. aeruginosa and decreased adherence for E. coli. Furthermore, the effect of pre-incubation with sub-MICs of tobramycin or amikacin on polymorphonuclear leukocyte [PMNLs] function against these organism was determined. Filtrates of E. coli pre-incubated with sub-MICs of tobramycin or amikacin promoted PMNL chemotaxis. No effect on chemotaxis was noted with the filtrates of Ps. aeruginosa pre-incubated with tobramycin or amikacin. Phagocytosis and intracellular killing for both organisms were increased after they were pre-incubated with sub-MICs of tobramycin or amikacin

Sensibilidade de Streptococcus agalactiae aos agentes antimicrobianos / Susceptibility of Streptococcus agalactiae to antimicrobial agents

A sensibilidade de Streptococcus agalactiae frente a 13 antimicrobianos foi verificada pelo teste da difusäo em ágar. As amostras testadas foram sensíveis a ampicilina, cefalotina, cefoxitina, clindamicina, cloranfenicol, eritromicina, lincomicina, penicilina, rifampicina e vancomicina, apresentando sensibilidade variável para a tetra ciclina e resistência a canamicina e tobramicina. Foram também determinadas, para as estirpes, as concentraçöes mínimas inibitórias (CMIs) pelo teste da diluiçäo em ágar para 6 antimicrobianos. Para a ampicilina, cefalotina, clindamicina, lincomicina e penicilina, as CMI50 e CMI90 apresentaram valores similares aos encontrados para a CMI. Para a eritromicina, a CMI90 (0,12 microng/ml) foi duas vezes maior que a CMI50

Control de la resistencia de bacilos gram negativos a aminoglicosidos: resultados de un estudio prospectivo a 3 años con el uso exclusivo de Amikacina / Control of the resistance of Gram-negative bacilli to aminoglycosides

Se presentan los resultados de un estudio a 3 años con el uso de amikacina como aminoglucósido de uso exclusivo en el Instituto Nacional de la Nutrición Salvador Zubirán. En el Período Basal (3 meses) se midió la resistencia de 870 cepas de bacterias gram negativas para amikacina, gentamicina y 233 cepas para tobramicina que en total fue del 3.2%, 17.4% y 11,2% respectivamente. En ese período el consumo proporcional de aminoglucósidios fue de 69% para gentamicina, 30.5% para amikacina y de 0.5% para tobramicina. En el siguiente período, de uso exclusivo de amikacina, se estudió el patrón de sensibilidad de 9,344 cepas de gram negativos a lo largo de 3 años; en este lapso el consumo de amikacina fue del 99.3%de gentamicina del 0.62%, y de tobramicina del 0.08%. Al comparar los dos períodos se muestra que la proporción de cepas resistentes a gentamicina disminuyó al 7.4% (P < 0.0001 mientras que el nivel de resistencia para amikacina no se incrementó significativamente. El análisis de la pediente de la curva que resultó de los porcentajes de cepas resistentes reportados trimestralmente, nuevamente evidenció una significativa disminución de la resistencia a gentamicina (P < 0.005) y globalmente no hubo un aumento de la resistencia a amikacina. Por lo anterior se puede concluir en términos generales que el uso exclusivo de amikacina no se acompaño de un incremento significativo en la aparición de resistencia durante un período de 3 años y, en cambio, la restricción del uso de gentamicina y tobramicina se acompaño de una importante disminución en el nivel de resistencia a estos antibióticos

Patrones de susceptibilidad a 19 antimicrobianos de germenes aislados de hemocultivos en un hospital de referencia de la ciudad de México / Sensitivity patterns to 19 antimicrobial agents of bacterial strains isolated from blood cultures in a referencie hospital of Mexico city

Se midió la sensiblidad a 19 antimicrobianos de 598 cepas bacterianas obtenidas de cultivos sanguíneos durante un lapso de 23 meses (diciembre de 1982-octubre de 1984), correspondiendo cada una de estas cepas a diferentes pacientes vistos en el Instituto Nacional de la Nutrición Salvador Zubirán. Mediante la determinación de las concentraciones mínimas inhibitorias, efectuadas por el método de icrominación el placa, se reportan los patrones de resistencia en los años de 1983 y 1984 de los gérmenes estudiados. Los aminoglucósidos (amikacina, gentamicina y tobramicina) mostraron tener buena actividad bacteriostática sobre la mayoría de las cepas probadas. En contraste, los porcentajes de cepas sensibles a la mayoría de los ß-lactámicos probados fueron menores, sobre todo los de Pseudomonas aeruginosa y Serratia-sp. La cefalotina y la dicloxacilina mostraron buena actividad sobre los cocos gram positivos. El aztreonam y la norfloxacina inhibieron casi todas las cepas probadas. Comparando los porcentajes de cepas resistentes en el período de 1983 con el de 1984, no hubo cambios estadísticamente significativos, excepto para un incremento de 100% de cepas resistentes de Pseudomonas a la carbenicilina y de un aumento de cepas resistentes de Klebsiella a la tobramicina. Es necesario continuar esta vigilancia epidemiológica de los patrones de resistencia de las cepas aisladas de hemocultivos por tratarse de una información indispensable para el manejo empírico de antibióticos en los pacientes con bacteremia