Padronização da técnica de extração de DNA de células de mucosa oral com NaCl: aplicação no estudo do gene PROP1 / Standardization of DNA extraction with NaCl from oral mucosa cells: application in PROP1 gene study

A extração de DNA de leucócitos periféricos é o meio de obtenção de DNA mais amplamente utilizado. Entretanto, a coleta de células a partir de swab oral, geralmente utilizada em medicina forense, é útil para obtenção de amostras de DNA de recém-nascidos, crianças e de pacientes que vivem em locais onde a coleta e o envio da amostra de sangue não é factível. Nosso objetivo foi padronizar a técnica de extração de DNA a partir de swab de células de mucosa oral utilizando NaCl, comparando-a com a extração pelo kit comercial. Para testar a qualidade do DNA, amplificamos os 3 éxons do gene PROP1 de 12 pacientes com hipopituitarismo hipofisário em DNA extraído simultaneamente de células da mucosa oral e de sangue periférico. A amplificação de fragmentos maiores foi testada em DNA de mucosa oral de indivíduos normais utilizando-se primers do éxon 10 do gene do FSHR (1000pb) e do gene CYP21A2 (1200pb). Ambos os métodos resultaram em DNA de boa qualidade, permitindo o estudo molecular. O método por NaCl mostrou-se mais rápido e barato, resultando em maior quantidade de DNA quando comparado ao kit comercial. Nos pacientes com hipopituitarismo, identificamos a mutação delAG301-302 em 6 pacientes, 4 em homozigose (33 por cento) e 2 em heterozigose (16 por cento), e a mutação G51A em heterozigose em uma paciente. Em conclusão, padronizamos a técnica de extração de DNA de células de swab oral com NaCl que, quando comparada à extração com kit comercial, apresentou menor custo e maior rapidez, indicando ser esta uma forma confiável de obtenção de DNA para estudos genéticos.

Análise do gene PROP1 em pacientes com hipopituitarismo: estudo em DNA de células de mucosa oral e sangue periférico extraído com NaCI / Analysis of PROP1 gene in patients with hypopituitarism: study in DNA from blood and oral cells extracted with NaCI

O objetivo foi estudar as mutações no PROP1 e padronizar a extração de DNA de células de swab oral, com NaCl e comparar com um kit comercial. Identificamos a mutação 301-302delAG em 6 pacientes e a mutação G51A em em um paciente. A deleção completa do PROP1 foi encontrada em dois irmãos, filhos de pais consangüíneos. Para confirmar a deleção do PROP1, o Southern blotting foi realizado usando como sonda o produto de PCR do exon 2 do PROP1 e um fragmento do CYP21A2 como sonda controle. A banda referente ao CYP21A2 estava presente nos pacientes e controles e a banda referente ao PROP1 estava ausente nos irmãos e presente na mãe e nos controles / Our objective was to study PROP1 mutations and standardize DNA extraction from an oral swab, with NaCl method, comparing it with a commercial kit. We identified the delAG301-302 mutation in 6 patients and G51A mutation in a single patient. We report here a complete deletion of PROP1 found in two siblings, born to consanguineous parents. To confirm the hypothesis of PROP1 gene deletion, Southern blotting was performed using PROP1 exon 2 gene PCR product as a probe and a fragment of CYP21A2 gene as a control probe. The CYP21A2 band was present in patients and controls whereas PROP1 band was absent in both siblings and present in their mother and in controls. To define the extension of this deletion a number of PCRs covering this region. This allowed us determine the deleted region from 9.6 kb upstream to 11 kb downstream of PROP with a maximum deletion size of 18.4 kb. Both methods yielded good quality DNA, allowing the amplification of 3 exons of PROP1 gene...

Coexistence of antibodies to tick-borne agents of babesiosis and Lyme borreliosis in patients from Cotia county, State of São Paulo, Brazil

This paper reports a case of coinfection caused by pathogens of Lyme disease and babesiosis in brothers. This was the first case of borreliosis in Brazil, acquired in Cotia County, State of São Paulo, Brazil. Both children had tick bite history, presented erythema migrans, fever, arthralgia, mialgia, and developed positive serology (ELISA and Western-blotting) directed to Borrelia burgdorferi G 39/40 and Babesia bovis antigens, mainly of IgM class antibodies, suggestive of acute disease. Also, high frequencies of antibodies to B. bovis was observed in a group of 59 Brazilian patients with Lyme borreliosis (25.4 percent), when compared with that obtained in a normal control group (10.2 percent) (chi-square = 5.6; p < 0.05). Interestingly, both children presented the highest titers for IgM antibodies directed to both infective diseases, among all patients with Lyme borreliosis