Magnetic bead technology for viral RNA extraction from serum in blood bank screening

Nucleic acid amplification testing (NAT) was recently recommended by Brazilian legislation and has been implemented at some blood banks in the city of São Paulo, Brazil, in an attempt to reduce blood-born transmission of human immunodeficiency virus (HIV) and hepatitis C virus. OBJECTIVE: Manual magnetic particle-based extraction methods for HIV and HCV viral nucleic acids were evaluated in combination with detection by reverse transcriptase - polymerase chain reaction (RT-PCR) one-step. METHODS: Blood donor samples were collected from January 2010 to September 2010, and minipools of them were submitted to testing. ELISA was used for the analysis of anti-HCV/HIV antibodies. Detection and amplification of viral RNA was performed using real-time PCR. RESULTS: Out of 20.808 samples screened, 53 samples (29 for HCV and 24 for HIV) were confirmed as positive by serological and NAT methods. CONCLUSION: The manual magnetic bead-based extraction in combination with real-time PCR detection can be used to routinely screen blood donation for viremic donors to further increase the safety of blood products.

Alta eficiência diagnóstica do teste IgM-ELISA utilizando múltiplos antígenos peptídicos (MAPs) de T. gondii (ESA SAG-1, GRA-1 e GRA-7) na diferenciação de formas clínicas da toxoplasmose / High diagnostic efficiency of IgM-ELISA with the use of multiple antigen peptides (MAPS) from T. gondii ESA (SAG-1, GRA-1 AND GRA-7 in acute toxoplasmosis

Os principais marcadores sorológicos para o diagnóstico da toxoplasmose aguda ou recente são os anticorpos IgM específicos e anticorpos IgG de baixa avidez. Entretanto em alguns pacientes, anticorpos IgM e baixa avidez de anticorpos IgG podem persistir, ultrapassando o período da fase recente aguda contribuindo para erros de interpretação diagnóstica. No presente estudo, a eficiência diagnóstica do ensaio imunoenzimático foi avaliada, com o uso de frações antigênicas ou peptídeos sintéticos originados do antígeno ESA de T.gondii, denominados de SAG-1, GRA-1 e GRA-7. Foram estudadas frações isoladas e combinadas em múltiplos peptídeos antigênicos (MAP), visando estabelecer um perfil confiável para definição sorológica de toxoplasmose recente aguda em amostra única de soro. A melhor eficiência diagnóstica do ensaio foi encontrada com o uso da combinação de peptídeos SAG- 1,GRA-1 e GRA-7, denominada MAP1. A detecção de anticorpos IgG e IgM anti- MAP1 apresentou a melhor definição entre a fase recente aguda da fase recente não aguda na toxoplasmose. Nossos resultados mostraram que IgM anti-MAP1 poderá se constituir um marcador sorológico importante no aumento da eficiência diagnóstica da toxoplasmose recente aguda.

The main serological marker for the diagnosis of recent toxoplasmosis is the specific IgM antibody, along with IgG antibodies of low avidity. However, in some patients these antibodies may persist long after the acute/recent phase, contributing to misdiagnosis in suspected cases of toxoplasmosis. In the present study, the diagnostic efficiency of ELISA was evaluated, with the use of peptides derived from T. gondii ESA antigens, named SAG-1, GRA-1 and GRA-7. In the assay referred to, we studied each of these peptides individually, as well as in four different combinations, as Multiple Antigen Peptides (MAP), aiming to establish a reliable profile for the acute/recent toxoplasmosis with only one patient serum sample. The diagnostic performance of the assay using MAP1, with the combination of SAG-1, GRA-1 and GRA-7 peptides, demonstrated better discrimination of the acute/recent phase from non acute/recent phase of toxoplasmosis. Our results show that IgM antibodies to MAP1 may be useful as a serological marker, enhancing the diagnostic efficiency of the assay for acute/recent phase of toxoplasmosis.

High diagnostic efficiency of IgM-ELISA with the use of multiple antigen peptides (MAP1) from T. gondii ESA (SAG-1, GRA-1 and GRA-7), in acute toxoplasmosis / Alta eficiência diagnóstica do IgM ELISA com o uso de múltiplos antígenos peptídicos (MAP1) de T. gondii ESA (SAG-1, GRA-1 e GRA-7) na toxoplasmose aguda

The main serological marker for the diagnosis of recent toxoplasmosis is the specific IgM antibody, along with IgG antibodies of low avidity. However, in some patients these antibodies may persist long after the acute/recent phase, contributing to misdiagnosis in suspected cases of toxoplasmosis. In the present study, the diagnostic efficiency of ELISA was evaluated, with the use of peptides derived from T. gondii ESA antigens, named SAG-1, GRA-1 and GRA-7. In the assay referred to, we studied each of these peptides individually, as well as in four different combinations, as Multiple Antigen Peptides (MAP), aiming to establish a reliable profile for the acute/recent toxoplasmosis with only one patient serum sample. The diagnostic performance of the assay using MAP1, with the combination of SAG-1, GRA-1 and GRA-7 peptides, demonstrated better discrimination of the acute/recent phase from non acute/recent phase of toxoplasmosis. Our results show that IgM antibodies to MAP1 may be useful as a serological marker, enhancing the diagnostic efficiency of the assay for acute/recent phase of toxoplasmosis.

O principal marcador sorológico para o diagnóstico da toxoplasmose aguda ou recente são os anticorpos IgM específicos, a par de anticorpos IgG de baixa avidez. Entretanto em alguns pacientes, estes anticorpos podem persistir, ultrapassando o período da fase aguda/recente, contribuindo para erro diagnóstico em casos suspeitos de toxoplasmose. No presente estudo, a eficiência diagnóstica de ELISA foi avaliada, com o uso de frações ou peptídeos originados dos antígenos ESA de T. gondii, denominados de SAG-1, GRA-1 e GRA-7. No referido ensaio, estudamos cada uma destas frações isoladamente, como também em quatro diferentes combinações, ou múltiplos peptídeos antigênicos (MAP), visando estabelecer um perfil confiável para a toxoplasmose aguda/recente em amostra única de soro. A melhor eficiência diagnóstica do ensaio foi encontrada com o uso da combinação de peptídeos SAG-1, GRA-1 e GRA-7, denominada MAP1. A detecção de anticorpos IgG e IgM anti-MAP-1 apresentou melhores características diagnósticas para a diferenciação entre a fase aguda/recente da fase não aguda/recente na toxoplasmose. Nossos resultados mostram que anticorpos IgM anti-MAP-1 poderão prestar auxílio como um marcador sorológico, aumentando a eficiência diagnóstica do ensaio para a fase aguda/recente da toxoplasmose.

Avidity of IgG antibodies against excreted/secreted antigens of Toxoplasma gondii: immunological marker for acute recent toxoplasmosis / Avidez de anticorpos IgG anti-antígeno de secreção e excreção de Toxoplasma gondii: marcador imunológico de toxoplasmose aguda recente

Detection of anti-toxoplasma IgM antibodies has frequently been used as a serological marker for diagnosing recently acquired toxoplasmosis. However, the persistence of these antibodies in some patients has complicated the interpretation of serological results when toxoplasmosis is suspected. The purpose of the present study was to evaluate the avidity of IgG antibodies against excreted/secreted antigens of Toxoplasma gondii by means of immunoblot, to establish a profile for acute recent infection in a single serum sample and confirm the presence of residual IgM antibodies obtained in automated assays. When we evaluated the avidity of IgG antibodies against excreted/secreted antigens of Toxoplasma gondii by means of immunoblot, we observed phase-specific reactivity, i.e. cases of acute recent toxoplasmosis presented low avidity and cases of non-acute recent toxoplasmosis presented high avidity towards the 30kDa protein fraction, which probably corresponds to the SAG-1 surface antigen. Our results suggest that the avidity of IgG antibodies against excreted/secreted antigens of Toxoplasma gondii is an important immunological marker for distinguishing between recent infections and for determining the presence of residual IgM antibodies obtained from automated assays.

A detecção de anticorpos IgM antitoxoplasma tem sido freqüentemente utilizada como marcador sorológico para o diagnóstico de toxoplasmose de aquisição recente. Entretanto, a persistência destes anticorpos em alguns pacientes tem complicado a interpretação dos resultados sorológicos quando a toxoplasmose é suspeitada. A proposta deste trabalho foi avaliar a avidez de anticorpos IgG contra antígenos de secreção e excreção de Toxoplasma gondii por immunoblot, para estabelecer um perfil de infecção recente aguda em uma única amostra de soro e confirmar a presença de anticorpos IgM residuais obtidos nos testes automatizados. Quando a avidez de anticorpos IgG contra antígenos de secreção e excreção Toxoplasma gondii, por immunoblot, foi avaliada, observou-se reatividade estágio específica, ou seja, casos de toxoplasmose aguda recente apresentaram baixa avidez e os casos de infecção recente não aguda apresentaram alta avidez para a fração protéica de 30kDa, que corresponde provavelmente ao antígeno de superfície- SAG-1. Nossos resultados sugerem que a avidez dos anticorpos IgG contra antígenos de secreção e excreção Toxoplasma gondii é um importante marcador imunológico para distinguir doença recente de infecção e determinar a presença de anticorpos IgM residuais detectados nos testes automatizados.