Growth hormone response to growth hormone-releasing peptide-2 in growth hormone-deficient Little mice

OBJECTIVE: To investigate a possible direct, growth hormone-releasing, hormone-independent action of a growth hormone secretagogue, GHRP-2, in pituitary somatotroph cells in the presence of inactive growth hormonereleasing hormone receptors. MATERIALS AND METHODS: The responses of serum growth hormone to acutely injected growth hormone-releasing P-2 in lit/litmice, which represent a model of GH deficiency arising frommutated growth hormone-releasing hormonereceptors, were compared to those observed in the heterozygous (lit/+) littermates and wild-type (+/+) C57BL/6J mice. RESULTS: After the administration of 10 mcg of growth hormone-releasing P-2 to lit/lit mice, a growth hormone release of 9.3±1.5 ng/ml was observed compared with 1.04±1.15 ng/ml in controls (p<0.001). In comparison, an intermediate growth hormone release of 34.5±9.7 ng/ml and a higher growth hormone release of 163±46 ng/ml were induced in the lit/+ mice and wild-type mice, respectively. Thus, GHRP-2 stimulated growth hormone in the lit/lit mice, and the release of growth hormone in vivo may be only partially dependent on growth hormone-releasing hormone. Additionally, the plasma leptin and ghrelin levels were evaluated in the lit/lit mice under basal and stimulated conditions. CONCLUSIONS: Here, we have demonstrated that lit/lit mice, which harbor a germline mutation in the Growth hormone-releasing hormone gene, maintain a limited but statistically significant growth hormone elevation after exogenous stimulation with GHRP-2. The present data probably reflect a direct, growth hormone-independent effect on Growth hormone S (ghrelin) stimulation in the remaining pituitary somatotrophs of little mice that is mediated by growth hormone S-R 1a.

Improvement of reproductibility and quality control of human growth hormone radioiodination

A reaçäo de marcaçäo do hormônio de crescimento humano (hGH) com 125I e sua purificaçäo cromatográfica foram estudadas focalizando-se especialmente a reprodutividade dos rendimentos, as recuperaçöes quantitativas e as atividades específicas obtidas. Através da rigorosa padronizaçäo de uma técnica de monitoraçäo foi confirmado que näo há perdas significativas de radioatividade ou proteína durante o processo de marcaçäo ou purificaçäo. Controlando rigorosamente as condiçöes de reaçäo foi obtida uma reprodutibilidade satisfatória na marcaçäo de varios extrados de hGH usando diferentes embarques de 125I após curtos ou longos períodos de estocagem deste radioisótopo. Finalmente a atividade específica (ou massa absoluta) da proteína radioiodada foi determinada mediante a análise da mistura de reaçäo, sendo comparada àquela obtida pelo método radioimunológico (self-displacement) mais universalmente usado. Para poder expressar as atividades específicas diretamente em microcuries por micrograma, uma técnica simples de contagem em coincidência, que permite a determinaçäo da atividade absoluta de fontes de 125I, foi adaptada às nossas condiçöes laboratoriais. A purificaçäo e os controles de qualidade descritos permitem a obtençäo de produtos marcados de boa reprodutibilidade, o que é indispensável para alcançar uma maior precisäo inter-ensaio e inter-laboratorial

Bioensaio de hormônio de crescimento humano por incremento de peso de ratos hipofisectomizados: análise computadorizada de esquemas fatoriais 2x2 / Bioassay of human growth hormone by the increase of body weight of hypophysectomized rats: computerized analysis of factorial 2x2 schedules

O bioensaio de hormônio de crescimento humano por incremento de peso corpóreo de ratos hipofisectomizados tem sido estudado com enfoque especial na economia de tempo e material, além de melhorar ou ao menos manter a qualidade dos parâmetros estatísticos do ensaio fatorial 2x2 clássico, que usa doses de 20 e 100microng/rato/dia. A determinaçäo da atividade biológica e dos parâmetros estatísticos relativos foi obtida através de um programa de computaçäo BASSY, em linguagem FORTRAN IV, descrito para a análise de ensaio fatorial 2x2. Com uma sensibilidade calculada da ordem de 2migrong/rato/dia, o ensaio pode ainda ser realizado em condiçöes de maior economia usando-se apenas um total de 0,6mg de hGH, com índice de precisäo inferior a 0,3. O presente estudo também mostra a excelente estabilidade das preparaçöes padräo (WHO) e Ipen ampolizadas e a precisäo interensaio relativamente alta deste bioensaio in vivo: CV = 8,7 e 18,9% respectivamente, usando-se o mesmo (n = 3) e diferentes (n = 6) esquemas de ensaio em um período superior a um ano

Otimizaçäo da extraçäo de hormônio de crescimento humano a partir de hipófises congeladas / Improvements of the extraction of human growth hormone from frozen hypophysis

Descreve-se a otimizaçäo de um método de extraçäo de hormônio de crescimento humano (hGH) a partir de hipófises humanas congeladas. As alteraçöes introduzidas na metodologia permitiram aumentar o rendimento para 8,7 mg de hGH por glândula processada. O hormônio obtido possui 21.587 daltons de peso molecular e a forma íntegra (hGH-22k) constitui 68% da preparaçäo. O hormônio isolado mostrou-se ativo em radioimunoensaio