Establecimiento de un cultivo discontinuo para la producción del factor de crecimiento epidérmico humano en levaduras: caracterización del producto / A bacth process for production of epidermal grow factor in yeast: product characterization

Se describe un proceso discontinuo para la producción del factor de crecimiento epidérmico humano (EGF-h) en Saccharomyces cerevisiae, con el promotor de la gliceraldehido 3-fosfato deshidrogensa (GAP) y el sistema de secreción del factor alfa. La proteina se excreta al medio de cultivo lo que facilita la purificación. Utilizando separaciones cromatográficas de intercambio iónico y exclusión molecular se obtuvo un producto de pureza superior al 95% según los análisis en cromtografía de fase inversa y electroforesis en geles SDF poliacrilamida. El proceso mostró un rendimiento de 36%. Se demostró que el producto obtenido fue biológicamente activo

Caracterización de la estructura primaria de la interleucina-2 humana recombinante / Characterization of the primary structure of the recombinant human interleukin-2

La interleucina-2 humana recombinante clonada y expresada en E. coli, y purificada mediante cromatografía líquida de alta eficacia (HPLC), fue analizada para verificar su estructura primaria. El análisis de aminoácidos de la proteína pura coincide con la composición teórica esperada. La proteína fue hidrolizada con bromuro de cianógeno, los péptidos separados por HPLC fueron secuenciados automáticamente y determinada su composición aminoacídica, confirmándose la estructura desde el extremo N-terminal hasta el residuo 56. Con el propósito de completar la secuencia de la proteína, esta fue reducida y carboximetilada. La proteína se sometió a digestión con endoproteinasa GLU-C (Staphyloccocus aureus V8) y una parte de esta digestión se incubó a continuación con tripsina. Los péptidos purificados mediante gel filtración (Biogel P-6) y HPLC en fase inversa, fueron secuenciados con la técnica manual de doble acoplamiento con dimetilaminoazobenzeno isotiocianato e isotiocianato de fenilo (DABITC/PITC). La purificación de la digestión tríptica de la proteína reducida y carboximetilada mediante fase inversa, suministró los péptidos para análisis en espectrometría de masas utilizando como fuente de ionización bombardeo con átomos rápidos (MS FAB). Tanto los resultados de la secuenciación como la espectrometría de masas confirman que la interleucina-2 obtenida en E. coli posee la estructura primaria reportada para esta proteína