Determinación de un medio de cultivo apropiado para acelerar el crecimiento de paracoccidioides brasiliensis / Determination of an appropriate culture medium to accelerate the growth of paracoccidioides brasiliensis

A pesar de los avances de la tecnología en los últimos años, en una infección micótica la "prueba de oro" para realizar el diagnóstico definitivo, es el aislamiento del agente causal mediante la práctica del cultivo de una muestra clínica; por lo que a través de los años han sido elaborados numerosos medios de cultivo, en los cuales se han utilizado desde sustancias naturales, hasta otras artificiales de composición más compleja. El problema más importante al cual se enfrentan los laboratorios de micología médica, es que los hongos productores de micosis profundas en Venezuela, tienen la propiedad de ser de lento y difícil crecimiento, inclusive hasta 8 semanas son necesarias para poder visualizar estructuras características del agente investigado. Es por ello que es importante desarrollar un medio de cultivo que aumente la sensibilidad de recuperación de hongos dimorfos, como el P. brasiliensis, a partir de muestras clínicas y provenientes de la micoteca; y que a su vez pueda ser utilizado para la obtención de la fase de levadura en forma eficaz. Se procesaron dos muestras clínicas y dos cepas provenientes de la Micoteca de la Sección de Micología Médica del Instituto de Medicina Tropical, los cuales fueron sembrados en: Sabouraud, agar cerebro corazón (brain heat), agar Kelley y agar Kelley Modificado a temperatura ambiente para obtener la fase micelial y a 37° C para incluir la transformación térmica y así recuperar la fase de levadura. En relación al crecimiento a temperatura ambiente, de las muestras clínicas se observó el crecimiento de una colonia característica de P. brasiliensis entre el séptimo día y la sexta semana en el siguiente orden: agar Kelley, agar Kelley modificado, agar brain heart y Sabouraud. En el caso de dos cepas provenientes de la micoteca a su desarrollo fue casi similar en Agar Kelley y Brain heart. Para la transformación a fase de levadura ésta se obtuvo antes de los 7 días con el agar Kelley Modificado y el agar Kelley.

Trypanosoma cruzi: solubilización y caracterización parcial de componentes antigénicos con Triton X-100 / Trypanosoma cruzi: solubilization and parcial characterization of antigenic components with Triton X-100

Con el objeto de aislar una fracción antigénica de Trypanosoma cruzi, más sensible para el diagnóstico de la enfermedad de chagas que las utilizadas tradicionalmente, los parásitos fueron sometidos a un proceso de solubilización parcial con Tritón X-100. La metodología involucró: 1) Recolección de epimastites cultivados en LIT modificado al comienzo de la fase estacionaria (aproximadamente 200 x 10**6 células/ml, pH 7). 2) Lavado y posterior resuspensión de las células e un medio salino libre de proteínas, 470 mOsmolar (osmolaridad 25% menor que la del medio de cultivo). 3) Acción del Tritón X-100 sobre las células a muy baja concentración (162 micronM), durante 1 h, a 4-C. Previa determinación de la relación óptima de las concentraciones de células (300 X 10**6 cél/ml) y de Tritón X-100, se constató que los parásitos liberaban al medio una cantidad aproximadamente constante de proteínas (0,42 a 0,44 mg/ml), conservando, durante todo el proceso de extracción, su movilidad y viabilidad. El método resultó sencillo, rápido y reproducible. La fracción extraída por este método (F1) fue evaluada frente a suero de 17 pacientes infectados con T. cruzi mediante las técnicas de fijación de complemento (FC'H 50) y hemaglutinación indirecta (HAI). El antígeno preparado en el Instituto de Medicina Tropical, M(PM), fue utilizado como referencia. F1 resultó ser entre cuatro y ocho veces más sensible que M(PM) por la técnica de FC'H 50; utilizando la HAI, su sensibilidad fue ocho veces mayor que la de la fracción antigénica patrón. Su análisis inmunoelectroforético evidenció que por lo menos posee cinco componentes proteicos