Molecular study of sticky platelet syndrome using exorne sequencing / Estudio molecular del síndrome de plaqueta pegajosa mediante secuenciación del exoma

Abstract Introduction: Sticky platelet syndrome (SPS) is a prothrombotic condition characterized by increased platelet aggregation that causes arterial and venous thrombosis. Its diagnosis is reached by identifying increased aggregation using low concentrations of adenosine diphosphate and epinephrine in platelet aggregation tests. Objectives: To identify common mutations through exome sequencing in two patients from the same family diagnosed with SPS and, thus, contribute to the molecular study of this disease. Materials and methods: Descriptive study. In January 2018, exome sequencing was performed in a 10-year-old patient treated at Fundación HOMI (Bogotá D.C., Colombia), index case, and in one of his adult first-degree relatives, both with a history of thrombotic disease and diagnosed with SPS. Exome sequencing was performed at the Complexo Hospitalario Universitario de Santiago de Compostela (Spain) using the SureSelect Clinical Research Exome V2 software by Agilent. Results: Exome sequencing led to detect genetic variants in both cases when compared with the reference sequence. The following variant was identified in the two samples: a cytosine to thymine transition at position c.236 (NM_000174.4) of the glycoprotein (GP)Ib-IX-V complex platelet membrane receptor, which causes a heterozygous transition of the amino acid threonine to isoleucine (i.e., a transition from hydrophilic amino acid to a hydrophobic amino acid) at position p. 79 of the extracellular leucine-rich repeat domain of GPIba subunit of the (GP)Ib-IX complex, involving a conformational change of the main receptor of ligands IB alpha, which might result in platelet hyperaggregation and thrombosis. This variant has not been described in patients with SPS to date. Conclusion: The mutation identified in both samples could be related to SPS considering the importance of glycoprotein IX in platelet function.

Resumen Introducción. El síndrome de plaqueta pegajosa (SPP) es una condición protrombótica caracterizada por un incremento de la agregabilidad plaquetaria que causa trombosis arterial y venosa. Su diagnóstico se realiza al identificar el aumento de la agregabilidad utilizando bajas concentraciones de adenosín difosfato y epinefrina en pruebas de agregación plaquetaria. Objetivos. Identificar mutaciones comunes mediante secuenciación del exoma en dos pacientes de una misma familia con diagnóstico de SPP y, de esta forma, contribuir al estudio molecular de esta enfermedad. Materiales y métodos. Estudio descriptivo en el que se realizó secuenciación del exoma en un paciente de 10 años atendido en la Fundación HOMI (Bogotá, Colombia), caso índice, y en uno de sus familiares adultos en primer grado, ambos con antecedente de enfermedad trombótica y diagnosticados con SPP. La secuenciación del exoma se realizó en el Complexo Hospitalario Universitario de Santiago de Compostela (España) con el programa SureSelect Clinical Research Exome V2 de Agilent. Resultados. En la secuenciación del exoma se detectaron variantes genéticas en ambos casos en comparación con la secuencia de referencia. En las muestras de ambos pacientes se identificó una variante heterocigota consistente en una transición de citosina a timina en la posición c.236 (NM_000174.4) que provoca el cambio del aminoácido treonina por isoleucina en la posición p.79 del dominio extracelular repetitivo rico en leucina (subunidad GPIba del complejo de la glicoproteína Ib-IX-V) y que podría provocar el cambio conformacional del receptor principal del ligando Ib alfa, así como hiperagregación plaquetaria y trombosis. Esta variante no ha sido descrita previamente en pacientes con SPP. Conclusión. La mutación identificada en las muestras estudiadas podría estar relacionada con el SPP considerando la importancia de la glicoproteína IX en las funciones plaquetarias.

Effect of neural therapy on NGF and BDNF serum levels in patients with chronic pain. A pilot study / Efecto de la terapia neural sobre los niveles séricos del NGF y el BDNF en pacientes con dolor crónico. Estudio piloto

Abstract Introduction: Neurotrophins (NT) are a family of proteins consisting of the nerve growth factor (NGF), the brain-derived neurotrophic factor (BDNF) and NT-3 and NT-4/5. These proteins play an essential role in neuronal survival, differentiation, and proliferation. Objectives: To analyze the variations of NGF and BDNF serum levels in patients with chronic pain after undergoing neural therapy and to establish the effects of this type of intervention on their quality of life. Materials and methods: Prospective pilot study conducted in 10 patients with chronic pain treated with neural therapy between July 2017 and April 2018 in Bogotá D.C., Colombia. Three consultations were performed (one in which the intervention was initiated, and two follow-up visits every three weeks). During each consultation, the patients' quality of life was assessed using the SF-12 scale and their NGF and BDNF serum levels were measured. Data were analyzed by means of descriptive statistics, using medians and interquartile ranges for quantitative variables, and absolute frequencies and percentages for qualitative variables. Results: The median score on the SF-12 scale tended to improve in the first and second follow-up visits compared with the baseline score (pre-intervention), particularly during the first follow-up visit (consultation No. 1: 34.5; follow-up No. 1: 39.5, and follow-up No. 2: 38). Median NGF serum levels had a downward trend after the intervention, particularly in the first follow-up visit (157.6, 42.95, and 237.8, respectively), and in the case of BNDF, an overall downward trend was also found (29.96, 19.24 and 20.43, respectively). An improvement in quality of life related to the decrease in the serum levels of both neurotrophins was observed. Conclusion: Neural therapy intervention reduced NGF and BDNF serum levels and improved the quality of life of the participants. Therefore, the behavior of these neurotrophins could become a biomarker for the diagnosis, treatment, and follow-up of patients with chronic pain.

Resumen Introducción. Las neurotrofinas (NT) son una familia de proteínas conformada por el factor de crecimiento nervioso (NGF), el factor neurotrófico derivado del cerebro (BDNF) y las neurotrofinas NT-3 y NT-4/5; estas proteínas tienen un papel esencial en la supervivencia, diferenciación y proliferación neuronal. Objetivos. Analizar las variaciones de los niveles séricos del NGF y el BDNF en pacientes con dolor crónico luego de recibir terapia neural y establecer los efectos de este tipo de intervención en su calidad de vida. Materiales y métodos. Estudio piloto prospectivo realizado en 10 pacientes con dolor crónico tratados con terapia neural entre julio de 2017 y abril de 2018 en Bogotá D.C., Colombia. Se realizaron 3 consultas (una en la que se inició la intervención y dos de control cada tres semanas) y en cada una se evaluó la calidad de vida mediante el cuestionario de salud SF-12 y se midieron los niveles séricos del NGF y el BDNF. Los datos se analizaron mediante estadística descriptiva, utilizando medianas y rangos intercuartiles para las variables cuantitativas, y frecuencias absolutas y porcentajes para las cualitativas. Resultados. La mediana de puntaje del cuestionario SF-12 tendió a mejorar en el primer y segundo control comparada con la puntuación inicial (antes de la intervención), en particular en el primer control (consulta 1: 34.5; control 1: 39.5, y control 2: 38). La mediana de los niveles séricos del NGF tendió a disminuir luego de la intervención, en particular en el primer control (157.6, 42.95 y 62.2, respectivamente), y en el caso del BNDF, la tendencia global también fue hacia la disminución (29.96, 19.24 y 20.43, respectivamente). Se observó una mejora en la calidad de vida relacionada con la disminución de los niveles séricos de ambas neurotrofinas. Conclusión. La intervención de terapia neural produjo una reducción en los niveles séricos del NGF y el BDNF y mejoró la calidad de vida de los participantes; por tanto, el comportamiento de estas neurotro-finas podría convertirse en un biomarcador para el diagnóstico, tratamiento y seguimiento de pacientes con dolor crónico.

Estudio molecular de la inversión de los intrones 1 y 22 del factor VIII de la coagulación en niños con hemofilia A severa utilizando técnica de PCR de larga distancia / Molecular study in children with hemophilia A in Colombia: analysis of Intron 1 and 22 inversion using long-distance PCR technique

Resumen Introducción. La hemofilia A es una enfermedad recesiva ligada al cromosoma X, con una incidencia de 1 en 5 000 a 10 000 varones y es el trastorno hemostático congénito más frecuente en varones. En pacientes con fenotipo severo, las inversiones de los intrones 22 y 1 son las mutaciones más comunes con una prevalencia del 45% a 50% y del 1% al 5% de los pacientes, respectivamente. Objetivo. Determinar la frecuencia de la inversión de los intrones 1 y 22 del gen del factor VIII de la coagulación en menores de 18 años con hemofilia A severa en Bogotá D.C. Materiales y métodos. Estudio descriptivo y transversal. La identificación de la inversión de los intrones 1 y 22 del gen del factor VIII se realizó mediante técnicas de reacción en cadena de polimerasa de larga distancia. Resultados. Se estudiaron 30 pacientes y se encontró inversión del intrón 22 en 12 pacientes (40%) e inversión 1 en 3 pacientes, cifras similares a las observadas en otros estudios. Conclusiones. Se encontraron las inversiones de los intrones 1 y 22 en la mitad de los pacientes evaluados. Los resultados son reproducibles, por lo que constituyen una herramienta útil para la identificación de las dos mutaciones más frecuentes en hemofilia A severa.

Abstract Introduction: Hemophilia A is an X-linked recessive disease with an incidence of 1 in 5 000 to 10 000 males. It is the most common congenital hemostatic disorder in men. The inversion of introns 1 and 22 in patients with a severe phenotype is considered the most frequent abnormality, with a prevalence of 1 to 5% and 45 to 50%, respectively. Objective: To determine the frequency of introns 1 and 22 inversions in factor VIII gene in children under 18 years with severe hemophilia A in Bogotá. Materials and methods: This is a non-experimental, descriptive, transverse study. The inversions of introns 1 and 22 for factor VIII gene were identified using long-distance polymerase chain reaction techniques in pediatric patients with severe Hemophilia A treated in different centers of Bogotá, Colombia. Results: Thirty patients were analyzed. Inversion of intron 22 was found in 12 patients (40%), while inversion of intron 1 was observed in 3 patients. These findings are similar to other studies. Conclusions: Inversions of intron 22 and 1 were found in half of this group of patients. These results are reproducible and useful to identify the two most frequent mutations in severe hemophilia A patients.

Cáncer gástrico en pacientes jóvenes en Colombia / Gastric cancer in young patients in Colombia

El cáncer gástrico es la primera causa de muerte por cáncer en Colombia, y aunque en el mundo se ha visto una disminución del cáncer en personas mayores, en los últimos años se ha observado un aumento en los pacientes jóvenes (< 40 años) lo cual se ha relaciona­do con un peor pronóstico, debido en parte a un retraso en el diagnóstico y a un cur­so más agresivo de la enfermedad. Por ello, el objetivo de este trabajo es evaluar los factores clínicos, endoscópicos e histológicos en pa­cientes menores de 40 años con cáncer gástrico y compararlo con los rasgos que se presentan en pacientes mayores para intentar establecer diferencias que nos permitan una caracterización de este grupo de pacientes. Materiales y métodos: Se trata de un estudio retrospectivo y descriptivo en el cual se incluyó a los pacientes diagnosticados con adenocarcinoma, en el Hospital el Tunal durante el periodo comprendido entre enero de 2005 y diciembre de 2010. En el periodo de estudio se realizaron 15.550 endoscopias digestivas altas en el Servicio de Gastroenterología, encontrándose 226 pacientes con diagnóstico de adenocarcinoma gástrico, confirmado histológicamente. De estos, 20 (8,8%) tenían 40 años o menos y fueron comparados con los 206 pacientes mayores de 40 años. Conclusión: El cáncer gástrico en pacientes jóvenes tiene una prevalencia en nuestro medio ligeramente mayor a la informada, los pacientes se presentan con un estadio más avanzado que los pacientes mayores y la mayoría es de tipo difuso (90%) lo cual les genera una alta mortalidad. Esto obligaría a la realización de la endoscopia más temprana en los pacientes jóvenes y a la implementación de medidas preventivas como los estudios genéticos que busque a los portadores del gen CDH1 para prevenir en sus familiares la aparición de esta terrible enfermedad.

Gastric cancer is the leading cause of death among cancers in Colombia. Although its incidence has fallen among older people throughout the world, in recent years it has been increasing among patients under 40 years old. Poor prognoses for these patients is due in part to late diagnoses and in part to the aggresivity of the disease. For these reasons the objectives of this study were to evaluate clinical, endoscopic and histological factors in gastric cancer patients under 40 years of age and compare those factors with findings from older patients in order to establish differences which might allow characterization of this group of patients. Materials and Methods. This is a retrospective, descriptive study of patients diagnosed with adenocarcinoma in the Hospital el Tunal between December 2005 and December 2010. During this period cancer patients under 40 years of age were compared with those over 40 years of age. Information collected on forms included patients’ ages and sex and tumor, classification, type of and location. Of the 15,550 upper endoscopies performed during the study period, 226 patients were diagnosed with gastric adenocarcinoma and had their diagnoses confirmed histologically. 20 patients (8.8%) were under 40 years old and 206 were over 40 years old. Conclusion. Gastric cancer is slightly more prevalent among young patients in our study than the prevalence that has been reported elsewhere. These patients presented more advanced stages of cancer than did older patients, and the majority of their cancers were diffuse types (90%) which resulted in a high mortality rate. Early performance of endoscopy is mandatory for young patients. In addition preventative measures such as genetic studies for CDH1 carriers to protect family members from this terrible disease should also be mandatory.

Medicina personalizada: farmacogenómica y farmacoepigenética: [editoriales] / Tailored medicine: pharmogenomics and pharmacogenetics: [editorial]

El proyecto genoma humano, los avances y los desarrollos de las diferentes “omicas”, apoyados en la medicina traslacional, han permitido el conocimiento y avance en muchos de los mecanismos moleculares de la fisiología y la patología en el humano. Basado enestos conocimientos se tienen muchas evidencias de que la mayor parte de la terapia con medicamentos puede ser individualizada sobre los estudios de variación del genoma humano, ya que solo entre el 30 % y 60 % de los pacientes tienen una respuesta común a dichas terapias...

Análisis proteóiico de cultivos primarios de tiroides / Proteomic nalysiis of primary cultures from thyroid / Análiseproteómicco de culturas preliminares do thyroid

En el presente estudio se identificaron proteínas de expresión constitutiva, como vimentina, actina, tubulina, proteína de choque térmico de 60 kDa, peroxirredoxina y la ATP sintasa mitocondrial, en cultivos primarios de tiroides normales y de carcinoma papilar de tiroides. Se establecieron las condiciones de extracción, solubilización, análisis cuantitativo y cualitativo de dichas proteínas, y se buscaron las mejores condiciones de isoelectroenfoque (IEF) en la electroforesis en dos dimensiones (2D). En la extracción y solubilización de las proteínas se evaluó la presencia o ausencia de anfolitos y sales, se obtuvo un mejor resultado empleando en el amortiguador de extracción sales como Tris-HCl y acetato de magnesio que incrementan la solubilidad de las proteínas. Para la cuantificación se recomienda el uso conjunto de técnicas colorimétricas con la electroforesis SDS-PAGE tiñendo con azul de Coomassie y corroborando los resultados mediante western blot, lo cual permite, además, verificar la integridad de las proteínas. Respecto a la electroforesis en dos dimensiones, se obtuvieron geles con un mayor número de manchas (spots),resueltos, enfocados y reproducibles empleando en el IEF gradientes inmovilizados de pH de 4-7 y voltaje final de 8.000 V. Las proteínas se identificaron mediante el análisis bioinformático de los geles 2D con el programa PDQuest (PDQuest 7.2, Bio-Rad®) y MALDI-TOF.

In this paper, proteins of constitutive expression such as vimentin, actin, tubulin, heat shock protein of 60 kDa, peroxiredoxin and the mitochondrial ATP sintase were identified in primary cultures of normal thyroid and papillary carcinoma. The extraction conditions, solubilization, quantitative and qualitative analysis of such proteins were established. In addition, the best conditions for isoelectrofocusing (IEF) in the two-dimensional electrophoresis (2D) were founded. In the extraction and solubilization of proteins, the presence or absence ofampholytes or salts was evaluated. The best result in the extraction was obtained using buffer salts such as Tris-HCl and magnesium acetate, which increase the solubility of these proteins. For quantification, the recommendation is to combine colorimetric techniques with SDS-PAGE electrophoresis stained with Coomasie blue and Western blot to confirm the results, which allows verifying the integrity of these proteins. In the two-dimensional electrophoresis, resolved, focused and reproducible gels with greater number of spots were obtained using in the IEF immobilized pH gradients of 4-7 and final voltage of 8000 V. The proteins were identified by the bioinformatic analysis of the 2DE gels with the PDQuest program (PDQuest 7.2 (BioRad®) and MALDI-TOF.

Neste estudo, se identificaram proteínas da expressão constitutiva, como vimentina, actina, tubulina, proteína de choque do calor do kDa 60, peroxiredoxinaeasintase mitocondrial do ATP, em cultivos primários de tireóide normal e de carcinoma papilar de tireóide. Se estabeleceram as condições de extração e de solubilization, assim como a análise quantitativaeaqualitativa de tais proteínas, e procuraram-se asmelhores condições para isoeletroenfoque (IEF) na eletroforese bidimensional (2D). Na extração e no solubilization das proteínas, se avaliou a presença ou a ausência de anfolitos ou de sais. O melhor resultado foi obtido usando sais como Tris-HCl e acetato do magnésio no amortecedor da extração, as quais aumentam a solubilida-de das proteínas. Na quantificação, se recomenda o uso de técnicas colorimétricas com eletroforese SDS-PAGE, tingindo com azul de Coomasie. Os resultados se confirmam com Western blot, o qual permite também verificar a integridade das proteínas. Quanto à eletroforese bidimensional, se obtiveram géis com um maior número de pontos (spots) determinados, enfocados e reprodutíveis no IEF usando gradientes imobilizados de pH 4-7 e tensão final de 8000 V. As proteínas foram identificadas por análise bioinformática de géis 2D com o programa PDQuest (PDQuest 7.2 (Bio-Rad®) e MALDITOF.

Enfermedad asociada a Clostridium difficile: nuevas amenazas de un viejo enemigo / Clostridium difficile associated disease: New threats of and old foe

La infección asociada a Clostridium difficile (EACD) es actualmente un importante problema de salud en el mundo con aumentada morbilidad y mortalidad en los adultos mayores. La EACD cada vez se está informando con mayor frecuencia en muchas partes del mundo. Desde 2002, se han informado brotes con una cepa de C. difficile resistente a fluoroquinolonas (BI/NAP1/027). Los cambios en la epidemiología incluyen la emergencia de una nueva población en riesgo, así como mayor incidencia de la enfermedad. La enfermedad se ha asociado con el uso de antibióticos, especialmente los de amplio espectro, por lo cual, éstos deben ser evitados. El tratamiento médico es con metronidazol o vancomicina y los casos severos pueden necesitar resección intestinal. Los casos recurrentes necesitan tratamiento prolongado con antibióticos, inmunoglobulinas y ocasionalmente enemas con materia fecal. Esta revisión es una actualización sobre la epidemiología, patogénesis y tratamiento de la infección por C. difficile.

Molecular Diagnostics of Porcine Stress Syndrome Susceptibility Associated with the Arg615Cys Mutation Using Real-Time PCR with Fluorescent Hybridization Probes / Molecular Diagnostics of Porcine Stress Syndrome Susceptibility Associated with the Arg615Cys Mutation Using Real-Time PCR with Fluorescent Hybridization Probes

Objective : The purpose of the presera study was to devélop a molecular genotyping method test by using a real time PCR hybridization probé and applying it to the analysis of C1843T mutations of the Sus scrofa RYR1 gene. Animáis population Three PSS-susceptible and PSS non-susceptible crossbred swine races were used for the experiments: Pietrain X Landrace Belga, Pietrain X Large White and Pietrain X Duroc. Methods: We have devéloped a genotyping method by using a hybridization probé and applied it to the analysis of C1843T mutations of the RYR1 gene, associated with PSS susceptibility. Genotyping results obtained by hybridization probé strategies were confirmed by restriction analysis and sequencing. In addi-tion, phenotype/genotype correlation analyses were devéloped by using the in vitro contracture test and confirmed the in vivo hálothane-succinylcholine challenge. Results: The real-time PCR with fluorescent hybridization probé methodology was designed to identify ho-mozygous PSS-resistant, PSS-susceptible animáis as well as heterozygous carriers. All cases genotyped by fluorescent hybridization probes were in agreement with PCR restriction enzyme digestión and sequencing and showed a 100% concordance between the in vivo and in vitro porcine stress syndrome (PSS) susceptibility results. Conclusions and clinical relevance: The real-time PCR with fluorescent hybridization probé method described here provides a rapid, easily interpretable and réliáble tool for genotyping the C1843T (Arg615-Cys) polymorphism of the RYR1 gene. This new methodology may be useful in the wide-scale genotyping of PSS-susceptibility and genetic selection.

Sobrepeso y expresión de receptores de adiponectina en monocitos de sangre periférica / Overweight and adiponectin receptors expression in peripheral blood monocytes

Antecedentes. Estudios anteriores han demostrado la asociación entre aumento del tejido adiposo e incremento de ateroesclerosis y han evidenciado la expresión de receptores de adiponectina en la placa ateroesclerótica. A su vez, trabajos previos han permitido concluir que los macrófagos del ateroma provienen de los monocitos circulantes. Objetivo. Determinar la expresión relativa de los receptores 1 y 2 de adiponectina (AdipoR1 y AdipoR2) en monocitos circulantes de sujetos con sobrepeso y con peso normal. Material y métodos. Mediante reacción en cadena de la polimerasa en tiempo real se determinó la expresión relativa (mRNA) de AdipoR1 y AdipoR2 en monocitos de sangre periférica aislados con técnica de inmunoafinidad, en un grupo de estudiantes de 18 a 25 años (n=48); además se midieron parámetros antropométricos y bioquímicos (resistencia a la insulina con modelo homeostático, colesterol total, colesterol-HDL y triglicéridos). Resultados. Se encontró que los niveles de expresión de AdipoR1 en monocitos eran mayores que los de AdipoR2 (p < 0,001). No se observaron diferencias en la expresión de AdipoR1 o AdipoR2 en monocitos de acuerdo al género, índice de masa corporal, porcentaje de masa grasa, resistencia a la insulina o perfil lipídico. Conclusión. El hallazgo de una mayor expresión de AdipoR1 en comparación a AdipoR2 en monocitos circulantes corrobora los resultados de otros autores. Los datos obtenidos sugieren que la expresión de AdipoR1 y AdipoR2 en monocitos de sujetos normales y con sobrepeso no se relaciona con la sensibilidad a la insulina. Se recomienda realizar otros estudios, que además de involucrar población con índice de masa corporal superior a 30 kg/m2 e individuos con obesidad abdominal, determinen posibles efectos de factores relacionados con el estilo de vida sobre la regulación de la expresión de estos receptores en monocitos circulantes.

Niveles séricos de zinc, hierro y cobre en tres grupos de escolares colombianos: relación con algunos parámetros antropométricos

La deficiencia de micronutrientes es frecuente en países en desarrollo. El objetivo del estudio fué comparar los niveles séricos de zinc, hierro y cobre en tres grupos de escolares (8 a 9 años) y correlacionarlos con algunas medidas antropométricas. El grupo 1 estuvo constituido por 26 escolares de un colegio privado de Santafé de Bogotá, el 2 por 21 niños de instituciones públicas de una zona rural, cercana a esta ciudad y el 3 por 28 sujetos de una escuela pública de la capital. Los micronutrientes se midieron por espectrometria de emisión atómica con plasma acoplado por inducción. El grupo 1 presentó talla (126.2+/-3.6) mayor al 2 (122.6+/-4.8 cm) y al 3 (122.1 +/-5.0 cm). Las concentraciones de zinc del grupo 1 (67+/-9 ug/dl) fueron mayores al 2 (59+/-11 ug/dl) y al 3 (50+/-13ug/dl). El grupo 3 presentó sidermia menor (71+/-21ug/dl) al 1 (90+/-30ug/dl). El grupo 1 evidenció niveles de cobre (100+/-19Ug/dl) mayores al 2 (77+/-13ug/dl) y al 3 (82+/-20ug/dl). Los resultados suguieren que los niños de los grupos 2 y 3 están expuestos a posibles condicienes medioambientales que inciden desfavorablemente en su crecimiento corporal y que son los niños del grupo 2 los que presntan el menor acceso a los micronutrientes zinc y hierro.