Evaluation of the disk diffusion method for testing fluconazole susceptibility of Cryptococcus laurentii

Cryptococcus laurentii é um patógeno humano raro, ubíquo na natureza. O objetivo deste estudo foi avaliar a aplicação do método de difusão do disco para determinar a sensibilidade ao fluconazol de isolados de C. laurentii e determinar a concentração fungicida mínima (CFM) do fluconazol. Foi determinada a sensibilidade ao fluconazol pelos métodos de difusão do disco e microdiluição em caldo de 11 isolados de C. laurentii, de acordo com CLSI (Clinical and Laboratory StandardsInstitute), e a CFM pelo método de microdiluição em caldo. O método de difusão do disco mostrou quatro isolados sensíveis, três sensíveis dose-dependentes e quatro resistentes, enquanto que pelo método de microdiluição, 10 isolados foram sensíveis e um sensível dose-dependente. A concordância entre os dois métodos foi de 36,4por cento. Um isolado apresentou CFM de 8 mi g/mL e dois de 64 mi g/mL. Embora o número de isolados estudados seja pequeno, os resultados sugeremque o método de difusão do disco não deve ser usado na determinação da sensibilidade in vitro dos isolados de C. laurentii ao fluconazol, e apesar de ser uma droga fungistática, o fluconazol pode apresentar atividade fungicida in vitro para alguns isolados do complexo C. laurentii.

Cryptococcus neoformans var. grubii - Pathogenicity of environmental isolates correlated to virulence factors, susceptibility to fluconazole and molecular profile

The pathogenicity of Cryptococcus neoformans is heterogeneous and is associated with the expression of virulence factors. This study aimed to correlate the pathogenicity of C. neoformans var. grubii in BALB/c mice with in vitro virulence factors, fluconazole minimal inhibitory concentrations (MICs) and molecular profiles, before and after animal passage. Ten environmental isolates and one ATCC strain of C. neoformans var. grubii mating type α were evaluated. Most isolates (91 percent) killed 50 percent or more of the infected animals by day 24 postinfection and were recovered from the lungs and brains of surviving animals on days 7 and 14 postinfection. The burden of yeast in the lungs was more variable than that in the brain. The differences in the expression of virulence factors (growth at 37ºC, presence and size of the capsule and production of melanin, urease, proteinase and phospholipase) by most isolates pre and postpassage in animals were not statistically significant. The fluconazole MICs in postpassaged lines differed by a one-dilution from the MIC of the corresponding prepassaged line for six isolates. Using molecular typing [polymerase chain reaction-fingerprinting with (GACA)4 and M13], eight isolates were identified as VNI and three as VNII. We concluded that different isolates with the same molecular and phenotypic profiles, including isolates that are markedly hypervirulent, span a wide range of virulence and there were no changes in virulence factors in the postpassaged lines when compared with the corresponding nonpassaged lines.

Comparative study of antibacterial and antifugal activity of callus culture and adult plants extracts from Alternanthera maritima (Amaranthaceae)

Neste estudo procedeu-se a avaliação da atividade antibacteriana e antifúngica dos extratos brutos de Alternanthera maritima (Amaranthaceae) planta in natura de duas coletas distintas e obtidos por cultura de células buscando-se averiguar a manutenção da atividade antimicrobiana dos extratos obtidos da planta in vivo e in vitro. A ação antibacteriana e antifúngica foi determinada pelo método de difusão em ágar (técnica do poço) utilizando-se trinta cepas de microrganismos indicadores (bactérias Gram-positivas e Gram-negativas, leveduras e dermatófitos). Todos os extratos obtidos com solventes orgânicos avaliados apresentaram-se bioativos com halos de inibição de 6 a 20 mm. Os extratos da planta in natura das duas coletas (Restinga de Marica (RJ), verão de 1995 e 1998) inibiram o desenvolvimento de diferentes microrganismos (bactérias, leveduras e dermatófitos). Os extratos obtidos da cultura de calos desenvolvidos em duas condições de cultivo diferentes, também se mantiveram bioativos. Assim, os resultados obtidos encorajam a realização de novos estudos com esta espécie vegetal para se determinar quais as substâncias presentes nos extratos e que contribuem para a atividade biológica, como também para entender seu mecanismo de ação e avaliar sua toxicidade, visando uma possível aplicação farmacêutica.

Leveduras do Gênero Candida na cavidade bucal com e sem lesäo: detecçäo de suscetibilidade a antifúngicos - técnica do Etest / Candida yeasts in oral cavity with and without lesions: detection of antifungal susceptibility - Etest technique

Foram avaliados 50 pacientes, de ambos os sexos e faixa etária média de 42,5 anos, objetivando-se detectar a sucetibilidade a antifúngicos de leveduras isoladas da boca com e sem lesäo. Amostras do dorso da lingua, de lesäo e saliva foram inoculadas no ágar Sabouraud-dextrose acrescido de cloranfenicol incubado a 37 graus celsius, durante três a cinco dias. Foi dectada sensibilidade aos antimicrobanos com a técnica do Etest (AB Biodisk-Solna, Suécia), com o ágar RPMI-1640 (Sigma), com L-glutamina e tampäo fosfato. A interpretaçäo da sensibilidade ou resistência in vitro das cepas foi feita de acordo com o documento M 27 A (NCCLS, 1997). Leveduras do gênero Candida foram isoladas em todos os tipos de amostras, sendo a C. albicans a espécie prevalente, detectada em 48 por cento salivas, 67,8 por cento lesöes e 14,3 por cento e 12,5 por cento linguaas, normal e fissurada e/ou saburrosa, respectivamente. Entre os pacientes com candidíase bucal isolaram-se C. tropicalis (4/8 por cento e 3/10,7 por cento), C. glabrata (2/4 por cento e 1/3,6 por cento) e C. parapsilosis (1/2 por cento e 1/3,6 por cento), respectivamente na saliva e lesäo. As 68 cepas submetidas ao Etest apresentaram 41/60,3 por cento cepas resistentes (R) a algum antifúngico. Todas as 68 amostras de Candida foram sensíveis à anfotericina B e ao fluconazol. Quanto ao cetoconazol, apenas duas C. albicans isoladas de lesäo foram resistentes. Em relaçäo ao itraconazol, 16 (55,2 por cento) e 25 (64,1 por cento) cepas, respectivamente, de lesäo e de outros nichos foram resistentes, dentre eleas, C. albicans (30), C. Tropicalis (7), Candida spp. (2), C. Krusei (1) e C. guilliermondi (1). Os testes de suscetibilidade em micologia devem ser realizados por métodos padronizados e eficientes e com maior freqüencia, para alertar os clínicos quanto à emergência de cepas resistentes in vitro aos antifúngicos