APPLICATION OF 6-NITROCOUMARIN AS A SUBSTRATE FOR THE FLUORESCENT DETECTION OF NITROREDUCTASE ACTIVITY IN Sporothrix schenckii / Aplicação de 6-nitrocumarina como substrato fluorescente para detecção de atividade nitroredutásica em Sporothrix schenckii

Introduction Sporothrix schenckii is a thermal dimorphic pathogenic fungus causing a subcutaneous mycosis, sporotrichosis. Nitrocoumarin represents a fluorogenic substrate class where the microbial nitroreductase activity produces several derivatives, already used in several other enzyme assays. The objective of this study was the analysis of 6-nitrocoumarin (6-NC) as a substrate to study the nitroreductase activity in Sporothrix schenckii. Methods Thirty-five samples of S. schenckii were cultivated for seven, 14 and 21 days at 35 °C in a microculture containing 6-nitrocoumarin or 6-aminocoumarin (6-AC) dissolved in dimethyl sulfoxide or dimethyl sulfoxide as a negative control, for posterior examination under an epifluorescence microscope. The organic layer of the seven, 14 and 21-day cultures was analyzed by means of direct illumination with 365 nm UV light and by means of elution on G silica gel plate with hexane:ethyl acetate 1:4 unveiled with UV light. Results All of the strains showed the presence of 6-AC (yellow fluorescence) and 6-hydroxylaminocoumarin (blue fluorescence) in thin layer chromatography, which explains the green fluorescence observed in the fungus structure. Conclusion The nitroreductase activity is widely distributed in the S. schenckii complex and 6-NC is a fluorogenic substrate of easy access and applicability for the nitroreductase activity detection. .

Introdução Sporothrix schenckii é um fungo dimórfico térmico, agente etiológico de micose subcutânea, a esporotricose. Nitrocumarina representa classe de substratos fluorogênicos em que a atividade nitroredutásica microbiana produz vários derivados, já utilizados em vários outros ensaios enzimáticos. O objetivo deste estudo foi analisar 6-nitrocumarina (6-NC) como substrato para estudo da atividade nitroredutásica em Sporothrix schenckii. Métodos Trinta e cinco isolados de S. schenckii foram cultivados por sete, 14 e 21 dias a 35 °C em um microcultivo contendo 6-nitrocumarina ou 6-aminocumarina (6-AC) solubilizada em dimetilsulfóxido ou dimetilsulfóxido como controle negativo, para posterior análise em microscópio de epifluorescência. A fase orgânica da cultura de sete, 14 e 21 dias foi analisada por meio de iluminação direta com luz UV de 365 nm e por eluição em placas de sílica gel G com hexano:acetato de etila 1:4 e revelada com luz UV. Resultados Todos os isolados mostraram a presença de 6-AC (fluorescência amarela) e 6-hidroxilaminocumarina (fluorescência azul) em cromatografia em camada delgada, que explica a fluorescência verde observada na estrutura dos fungos. Conclusão A atividade nitroredutásica é amplamente distribuída no complexo S. schenckii e 6-NC é um substrato fluorogênico de fácil obtenção e aplicabilidade para detecção da atividade nitroredutásica. .

Microbiological evaluation of peracetic acid for disinfection of acrylic resins / Avaliação microbiológica de ácido peracético na desinfecção de resinas acrílicas

PURPOSE: The aim of this study was to assess the efficacy of peracetic acid (PAA) for the disinfection of dental acrylic resins experimentally contaminated with Candida albicans, Escherichia coli, Staphylococcus aureus and Pseudomonas aeruginosa. METHODS: Fifteen materials were used for each type of resin (thermosetting, self-curing and microwave-curing). Each material was placed in a test tube containing culture medium with a suspension of each microorganism and then incubated. The materials were rinsed and transferred to other tubes containing 50 mL of water for 5 min, 0.2 percent peracetic acid for 5 min or glutaraldehyde for 30 min. The materials were placed in the culture agar and incubated. Microbial growth was determined by colony counting after plating. RESULTS: Candida albicans growth was inhibited by peracetic acid and glutaraldehyde treatments. The number of colonies on resins treated with saline was greater than 10(5) CFU/mL. In resins infected with E. coli, S. aureus and P. aeruginosa the colony growth was not inhibited by saline and peracetic acid, but it was totally inhibited by glutaraldehyde. CONCLUSION: Surface disinfection using peracetic acid effectively inhibited C. albicans growth on all acrylic resins.

OBJETIVO: O objetivo deste estudo foi avaliar a eficácia do ácido peracético (PAA) na desinfecção de resinas acrílicas dentais experimentalmente contaminadas com Candida albicans, Escherichia coli, Staphylococcus aureus e Pseudomonas aeruginosa. METODOLOGIA: Quinze corpos de prova (CP) foram utilizados para cada tipo de resina (termopolimerizáveis, autopolimerizáveis e ativados por energia de micro-ondas). Cada CP foi colocado em um tubo teste com meio de cultura contendo uma suspensão de cada microrganismo e incubado. Posteriormente, os CP foram lavados e transferidos para outros tubos contendo 50 mL de água por 5 minutos, em 0,2 por cento de ácido peracético por 5 min ou em glutaraldeído por 30 minutos, plaqueados em ágar de cultura e incubados. O crescimento microbiano foi determinado por contagem de colônias após o plaqueamento. RESULTADO: O crescimento de Candida albicans foi inibido nos tratamentos com ácido peracético e glutaraldeído. O número de colônias nas resinas tratadas com solução salina foi superior a 10(5) UFC/mL. Nas resinas infectadas com E. coli, S. aureus e P. aeruginosa, o crescimento das colônias não foi inibido nas resinas tratadas com salina e ácido peracético, mas foi totalmente inibida pelo glutaraldeído. CONCLUSÃO: A desinfecção com ácido peracético inibiu efetivamente o crescimento de C. albicans em todas as resinas acrílicas.

Secretion of five extracellular enzymes by strains of chromoblastomycosis agents / Secreção de cinco enzimas extracelulares por amostras de agentes da cromoblastomicose

The gelatinase, urease, lipase, phospholipase and DNase activities of 11 chromoblastomycosis agents constituted by strains of Fonsecaea pedrosoi, F. compacta, Phialophora verrucosa, Cladosporium carrionii, Cladophialophora bantiana and Exophiala jeanselmei were analyzed and compared. All strains presented urease, gelatinase and lipase activity. Phospholipase activity was detected only on five of six strains of F. pedrosoi. DNase activity was not detected on the strains studied. Our results indicate that only phospholipase production, induced by egg yolk substrate, was useful for the differentiation of the taxonomically related species studied, based on their enzymatic profile.

As atividades gelatinase, urease, lipase, fosfolipase e DNase de 11 agentes da cromoblastomicose constituídos por amostras de Fonsecaea pedrosoi, F. compacta, Phialophora verrucosa, Cladosporium carrionii, Cladophialophora bantiana e Exophiala jeanselmei foram analisadas e comparadas. Todas as amostras apresentaram atividade urease, gelatinase e lipase. A atividade fosfolipase foi detectada apenas em cinco das seis amostras de F. pedrosoi. A atividade DNase não foi detectada nas amostras estudadas. Os resultados indicam que para a diferenciação entre espécies taxonomicamente relacionadas estudadas, baseado no seu perfil enzimático, apenas a produção de fosfolipase, induzida pelo substrato com gema de ovo, foi útil.