RÉSUMÉ
RESUMEN El cultivo de Phaseolus vulgaris L. se realiza en varias partes del mundo. La transformación genética vía Agrobacterium tumefaciens constituye una alternativa para la obtención de cultivares con tolerancia o resistencia a condiciones ambientales desfavorables de esta especie. Sin embargo, la condición cultivar dependiente y la baja regeneración del tejido transformado en los protocolos establecidos para P. vulgaris, han limitado el empleo de esta tecnología a un grupo reducido de cultivares. El objetivo de este trabajo fue regenerar brotes a partir de tejido transformado de P. vulgaris cv. 'ICA Pijao' y 'BAT 93'. Se determinó el efecto de la concentración de la suspensión bacteriana, la infiltración por vacío, el periodo de co-cultivo sobre la regeneración de brotes. Además, se determinó la efectividad de la geneticina y el glufosinato de amonio durante la etapa de selección en la regeneración de brotes a partir de explantes inoculados con A. tumefaciens. Los explantes V NC-1 inoculados con una suspensión bacteriana ajustada a una densidad óptica de 0,1, sin infiltración con vacío y mantenidos por tres días en co-cultivo presentaron la mejor respuesta de regeneración. La geneticina y el glufosinato de amonio fueron efectivos para la selección de brotes. La regeneración de brotes a partir de tejido transformado vía A. tumefaciens en P. vulgaris cv. 'ICA Pijao' y 'BAT 93', no descrita en la literatura científica, resulta importante para su posterior aplicación en programas de mejoramiento genéticos de esta especie.
ABSTRACT The cultivation of Phaseolus vulgaris L. is widespread in the world. The genetic transformation via Agrobacterium tumefaciens, is an alternative to obtain cultivars with tolerance or resistance to adverse environmental conditions for this species. However, the cultivar-dependent condition and the low regeneration of the transformed tissue in the protocols established for P. vulgaris have limited the use of this technology to a small group of cultivars. The aim of this work was to regenerate shoots from transformed tissue in P. vulgaris cv. 'ICA Pijao' and 'BAT 93'. The effect of the concentration of the bacterial suspension, the infiltration by vacuum, the period of co-cultivation on the regeneration of shoots was determined. In addition, the effectiveness of geneticin and glufosinate-ammonium was determined during the selection stage in the regeneration of shoots from explants inoculated with A. tumefaciens. The explants V NC-1 inoculated with a bacterial suspension adjusted to an optical density of 0.1, without infiltration with vacuum and maintained for three days in co-culture presented the best regeneration response. Geneticin and glufosinate ammonium were effective in the selection of shoots. The regeneration of shoots from transformed tissue by A. tumefaciens in P. vulgaris cv. 'ICA Pijao' and 'BAT 93', not described in the scientific literature, is important for its subsequent application in breeding programs of this species.
RÉSUMÉ
RESUMEN El mejoramiento genético convencional en frijol común resulta difícil debido a que presenta una base genética estrecha y muy estable. En este sentido, la combinación de la mutagénesis y el cultivo de tejidos, es una alternativa para inducir variabilidad genética en la búsqueda de tolerancia a factores bióticos y abióticos. Es por ello, que el presente trabajo tuvo como objetivo determinar el efecto de diferentes explantes irradiados en la regeneración in vitro de frijol común (Phaseolus vulgaris L.) cultivar "ICA Pijao". Se aplicaron radiaciones gamma en callos, en el nudo cotiledonal con un cotiledón (NC-1) con dosis de 0, 10, 20, 30, 40, 50 y 60 Gy y semillas con 0, 100, 200, 300 y 400 Gy. Se evaluó el porcentaje de germinación, longitud de las raíces, porcentaje de explantes que formaron callos, masa fresca (g) de los callos, número de brotes por callo y el número de brotes con raíces. La radiación gamma provocó una disminución en la masa fresca del callo y NC-1. Los callos y el NC-1 solamente formaron brotes con las dosis de 10 y 20 Gy, pero estos fueron hiperhíricos. Los resultados demostraron que la semilla irradiada fue el explante con el que se logró la regeneración in vitro de plantas con hojas definidas, por lo que se recomienda como explante inicial para el uso combinado de mutagénesis y regeneración in vitro de plantas para el cultivar P. vulgaris "ICA Pijao" a través de la organogénesis indirecta.
ABSTRACT Conventional breeding in common bean is difficult because they have a close and very stable genetic base. In this connection the combination of mutagenesis and tissue culture is an alternative to induce genetic variability in the search for tolerance to biotic and abiotic factors. For this reason, the present study aimed to determine the effect of different irradiated explants in the in vitro regeneration of common bean (Phaseolus vulgaris L.) cultivar "ICA Pijao". To do this, were applied doses gamma radiation in callus, cotiledonary node with one cotyledon (NC-1) with doses of radiation 0, 10, 20, 30, 40, 50 and 60 Gy and seeds with 0, 100, 200, 300 and 400 Gy. The length of roots in the germinated seeds, fresh mass (g) of the callus and the number of shoots per callus were determined. The gamma radiation caused a decrease in the fresh weight of callus and NC-1. The callus and NC-1, irradiated with doses of 10 and 20 Gy they formed buds but these were hyperhydric. Results demonstrated that the irradiated seed was the explant with which it was achieved regeneration of shoots with leaves defined, so it is recommended as initial explant for combined use of mutagenesis and in vitro regeneration of plants for P. vulgaris cultivar "ICA Pijao" via organogenesis indirect.