Résumé
This study investigated the genetic features of T. gondii isolated directly in autopsies of HIV-infected patients who died with severe disseminated toxoplasmosis. This retrospective analysis was conducted in a cohort of 15 HIV-infected patients with clinical and laboratory data. They had previous cerebral toxoplasmosis at least 6 months before the disseminated toxoplasmosis episode. The hypothesis was that they were infected with highly virulent parasites due to the condition in which they died. T. gondii genotyping was done directly in DNA extracted from 30 autopsy brain and lung samples (2 per patient) and mutilocus PCR-RFLP genotyping was done using 12 molecular markers. The 30 clinical samples were genotyped successfully in 8 or more loci and six suggestive genotypes were identified. One of them was Toxo DB #11, previously identified in different domestic animals and virulent in experimental animals. The other five suggestive genotypes...(AU)
Sujets)
Toxoplasma , Syndrome d'immunodéficience acquise , Forme A de l'ADNRésumé
Este estudo investigou as características genéticas de amostras de Toxoplasma gondii provenientes de 62 pacientes com toxoplasmose no estado de São Paulo, Brasil. Amostras de DNA foram isoladas de sangue, líquido cefalorraquidiano e líquido amniótico de 25 pacientes com toxoplasmose cerebral e AIDS, 2 pacientes com toxoplasmose aguda, 12 pacientes com toxoplasmose ocular, 6 recém-nascidos com toxoplasmose congênita e 17 mulheres grávidas com infecção aguda. O diagnóstico da toxoplasmose foi baseado em características clínicas, radiológicas e laboratoriais. A genotipagem foi realizada por multilocus PCR-RFLP incluindo os marcadores SAG1, SAG2 (5'- SAG2 e 3'-SAG2, alt.SAG2) SAG3, BTUB, GRA6, C22-8, C29-2, L358, PK1 e APICO. Entre as 62 amostras clínicas, 20 (32%) foram genotipadas com sucesso em 8 ou mais loci gênicos, e somente estas comparadas com exames clínicos e laboratoriais. As outras 42 amostras (68%) obtiveram resultado em até 7 loci gênicos. Dentre as 20 amostras, três genótipos foram identificados e comparados aos listados no ToxoDB. Dezoito (90%) amostras pertencem ao genótipo ToxoDB # 65 e as outras duas amostras foram identificadas com os genótipos ToxoDB # 6 e # 71, respectivamente (http://toxodb.org/toxo/). Os pacientes portadores de genótipos # 6 e # 71 tiveram toxoplasmose cerebral atípica e severa caracterizada por encefalite difusa sem lesões cerebrais expansivas. Estes resultados indicam que o genótipo # 65 de T. gondii podem ter uma alta frequência na toxoplasmose humana no Estado de São Paulo, Brasil. Este achado incomum destaca a necessidade de investigar a possível associação dos genótipos do parasita com toxoplasmose humana.
Sujets)
Humains , Mâle , Femelle , Génotype , Polymorphisme de restriction , Réaction de polymérisation en chaîne , ToxoplasmoseRésumé
Este estudo investigou as características genotípicas de isolados de 87 pacientes com toxoplasmose cerebral e AIDS tratados no Instituto de Infectologia Emílio Ribas -São Paulo. O diagnóstico laboratorial da toxoplasmose cerebral foi baseado na sorologia e PCR positivas realizadas em amostras de sangue e/ou líquido cefalorraquidiano. As genotipagens foram realizadas utilizando-se quatro marcadores (5- SAG2, 3- SAG2,SAG3 e GRA6). Cada um dos marcadores distingue as três linhagens clonais de Toxoplasma gondii designadas como tipos I, II e III, tratando-se os produtos de PCR amplificados com enzimas de restrição (PCR-RFLP). Foram obtidos os seguintes resultados: 40 pacientes (46%) foram infectados com cepas do tipo I; 4 (4%) com as do tipo III; 13 (15%), com cepas polimórficas (genótipos incomuns); 6 pacientes com cepas do tipo I ou II; e 15 (17%) dos pacientes foram infectados com cepas incapazes de serem genotipadas pelos marcadores utilizados. A PCR-RFLP também identificou 9 (11%) isolados clínicos como sendo do tipo II, genótipo ainda não descrito na América do Sul. Contudo, o sequênciamento dos produtos gerados na nested-PCR de uma amostra classificada como tipo II (marcador SAG3) e de isolados polimórficos (marcadores 5-SAG2, SAG3 e GRA6) mostrou diferenças nucleotídicas quando comparadas com as cepas clonais dos tipos I, II e III. Estes dados confirmam estudos prévios realizados na América do Sul demonstrando que cepas de T.gondii prevalentes no Brasil são altamente polimórficas.
Sujets)
Génotype , Polymorphisme de restriction , Réaction de polymérisation en chaîne , Syndrome d'immunodéficience acquise , Toxoplasma , Toxoplasmose cérébraleRésumé
Este estudo investigou as características genotípicas de isolados de 87 pacientes com toxoplasmose cerebral e AIDS tratados no Instituto de Infectologia Emílio Ribas -São Paulo. O diagnóstico laboratorial da toxoplasmose cerebral foi baseado na sorologia e PCR positivas realizadas em amostras de sangue e/ou líquido cefalorraquidiano. As genotipagens foram realizadas utilizando-se quatro marcadores (5- SAG2, 3- SAG2,SAG3 e GRA6). Cada um dos marcadores distingue as três linhagens clonais de Toxoplasma gondii designadas como tipos I, II e III, tratando-se os produtos de PCR amplificados com enzimas de restrição (PCR-RFLP). Foram obtidos os seguintes resultados: 40 pacientes (46%) foram infectados com cepas do tipo I; 4 (4%) com as do tipo III; 13 (15%), com cepas polimórficas (genótipos incomuns); 6 pacientes com cepas do tipo I ou II; e 15 (17%) dos pacientes foram infectados com cepas incapazes de serem genotipadas pelos marcadores utilizados. A PCR-RFLP também identificou 9 (11%) isolados clínicos como sendo do tipo II, genótipo ainda não descrito na América do Sul. Contudo, o sequênciamento dos produtos gerados na nested-PCR de uma amostra classificada como tipo II (marcador SAG3) e de isolados polimórficos (marcadores 5-SAG2, SAG3 e GRA6) mostrou diferenças nucleotídicas quando comparadas com as cepas clonais dos tipos I, II e III. Estes dados confirmam estudos prévios realizados na América do Sul demonstrando que cepas de T.gondii prevalentes no Brasil são altamente polimórficas.