Proteolytic action of the crude extract of Duddingtonia flagrans on cyathostomins (Nematoda: Cyathostominae) in coprocultures / Ação proteolítica do extrato bruto de Duddingtonia flagrans sobre ciatostomíneos (Nematoda: Cyathostominae) em coproculturas

The objective of this study was to examine the action of the crude extract of Duddingtonia flagrans (isolates AC001 and CG722) on infective larvae (L3) of cyathostomins in coprocultures and to confirm its proteolytic activity by means of a zymogram. The following groups were formed in coprocultures: Group 1: 10 mL of crude extract of D. flagrans (AC001); group 2: 10 mL of crude extract of AC001 with 10 mM of Ca2+; group 3: 10 mL of crude extract of D. flagrans (CG722); group 4: 10 mL of crude extract of CG722 with 10 mM of Ca2+; and group 5: control group (distilled water). The third-stage larvae (L3) were obtained after eight days. The crude extract of D. flagrans was effective in reducing the number of L3, with the following percentage reductions: group 1, 49.5%; group 2, 52.5%; group 3, 36.8%; and group 4, 57.7%; in relation to the control group (p > 0.05). The proteolytic activity of the crude extract was confirmed through the zymogram. The results from this study confirmed that the crude extract of the fungus D. flagrans could be used for controlling cyathostomin L3, and suggested that at least one protease of approximately 38 kDa was present.

O objetivo deste trabalho foi estudar a ação do extrato bruto de Duddingtonia flagrans (isolados AC001 e CG722) sobre larvas infectantes (L3) de ciatostomíneos em coproculturas e confirmar a sua atividade proteolítica por meio de um zimograma. Foram formados os seguintes grupos em coproculturas: grupo 1: 10 mL de extrato bruto de D. flagrans (AC001); grupo 2: 10 mL de extrato bruto de AC001 com íons Ca2+ 10 Mm; grupo 3: 10 mL de extrato bruto de D. flagrans (CG722); grupo 4: 10 mL de extrato bruto de CG722 com íons Ca2+ 10 Mm; e grupo 5 como controle (água destilada), obtendo-se as L3 ao final de 8 dias. O extrato bruto de D. flagrans foi eficiente na redução do número de L3 com os seguintes percentuais de redução: grupo 1 (49,5%); grupo 2 (52,5%); grupo 3 (36,8%) e grupo 4 (57,7%) em relação ao grupo controle (p > 0,05). Confirmou-se a atividade proteolítica por meio do zimograma. Os resultados do presente trabalho confirmam a utilização do extrato bruto do fungo D. flagrans no controle de L3 de ciatostomíneos e sugere a presença de pelo menos uma protease de aproximadamente 38 kDa.

Predatory activity of chlamydospores of the fungus Pochonia chlamydosporia on Toxocara canis eggs under laboratory conditions / Atividade predatória de clamidósporos do fungo Pochonia chlamydosporia sobre ovos de Toxocara canis em condições laboratoriais

The objective of this study was to use chlamydospores of the fungus Pochonia chlamydosporia (isolates VC1 and VC4) against Toxocara canis eggs in a 15-day in vitro assay. One thousand T. canis eggs were placed in Petri dishes containing 2% water agar medium with different concentrations of chlamydospores (1,000, 10,000 or 100,000) of each fungal isolate of P. chlamydosporia (treated groups) and 1,000 eggs in Petri dishes without fungus (control group). Egg counts were performed to determine the ovicidal activity, which was classified as three effect levels: type 1, type 2 and type 3. Significant differences (P < 0.01) in egg destruction were found in comparison with the control group. The highest percentage of egg destruction was found in plates containing 100,000 chlamydospores (68.5% for VC1 and 70.5% for VC4). Chlamydospores of P. chlamydosporia were effective in destroying T. canis eggs and may contribute in the future towards combating the eggs of this parasite.

O objetivo do trabalho foi utilizar clamidósporos do fungo Pochonia chlamydosporia (isolados VC1 e VC4) na destruição de ovos de Toxocara canis, num ensaio in vitro, realizado no intervalo de 15 dias. Em cada placa de Petri com ágar-água 2% foram vertidos 1.000 ovos de T. canis em 1.000, 10.000 ou 100.000 clamidósporos de cada isolado do fungo (grupos tratados). Foram realizadas as contagens para verificar a atividade ovicida, classificada em três níveis de efeito: tipo 1, tipo 2 e tipo 3. Os resultados demonstraram que houve diferença significativa (P < 0,01) na destruição dos ovos em relação aos ovos observados nas placas do grupo controle. O maior percentual de ovos destruídos foi observado nas placas contendo 100.000 clamidósporos (68,5% para VC1 e 70,5% para VC4). Clamidósporos do fungo P. chlamydosporia foram efetivos na destruição dos ovos de T. canis podendo contribuir no futuro para o combate aos ovos deste parasito.

In vitro biological control of infective larvae of Ancylostoma ceylanicum / Controle biológico in vitro de larvas infectantes de Ancylostoma ceylanicum

The aim of this study was to evaluate the predatory activity of the fungus Duddingtonia flagrans (AC001) on infective larvae of Ancylostoma ceylanicum after gastrointestinal transit in hamsters. Twenty animals were used in the experiment, divided into two groups: a treated group (10 animals) and a control group (10 animals). In the group treated with D. flagrans, each animal received mycelium from the AC001 isolate, at an oral dose of 5 mg/25 g of live weight. To evaluate the predatory activity of the fungus, fecal samples were collected from the animals in both groups, at the times of 6, 8, 12, 24 and 36 hours after the treatment. Then, subsamples of 2 g of feces were placed in Petri dishes containing 2% water-agar (2% WA) culture medium and 1000 L3 of A. ceylanicum. Over the study period, the following percentage reductions were observed: 43.2% (6 hours), 30.8% (8 hours), 25.8% (12 hours), 30% (24 hours) and 11% (36 hours). The fungus D. flagrans presented predatory activity on the L3 of A. ceylanicum, after passing through the hamsters' gastrointestinal tract. It was therefore concluded that the fungus D. flagrans may be an alternative for biological control of the L3 of A. ceylanicum.

O objetivo deste trabalho foi avaliar a atividade predatória do fungo Duddingtonia flagrans (AC001) sobre larvas infectantes de Ancylostoma ceylanicum após o trânsito gastrintestinal em hamsters. Foram utilizados vinte animais no experimento, divididos em dois grupos: um grupo tratado (10 animais) e um grupo controle (10 animais). No grupo tratado com D. flagrans, cada animal recebeu 5mg/25g de peso vivo de micélio do isolado AC001, por via oral. Para avaliar a atividade predatória do fungo, amostras fecais foram coletadas de ambos os grupos de animais nos horários de: 6, 8, 12, 24 e 36 após o tratamento. A seguir, 2g de fezes foram colocadas em placas de Petri contendo o meio de cultura ágar-água 2% (AA2%) e 1000 L3 de A. ceylanicum. Ao longo dos horários estudados os seguintes percentuais de redução foram observados: 43,2% (6 horas); 30,8% (8 horas); 25,8% (12 horas); 30% (24 horas) e 11% (36 horas). O fungo D. flagrans (AC001) apresentou atividade predatória sobre as L3 de A. ceylanicum após o trânsito pelo trato gastrintestinal de hamsters. Além disso, foi observada uma diferença significativa nos percentuais obtidos de cada horário em relação ao numero de L3 recuperadas (P < 0,01). Conclui-se, portanto, que o fungo D. flagrans pode ser uma alternativa de controle biológico das L3 de A. ceylanicum.

Control of Strongyloides westeri by nematophagous fungi after passage through the gastrointestinal tract of donkeys / Controle de Strongyloides westeri por fungos nematófagos após trânsito gastrintestinal em jumentas

Strongyloides westeri is the most prevalent nematode among equines aged up to four months and causes gastrointestinal disorders. The objective of this study was to observe the control of infective S. westeri larvae (L3) by the nematophagous fungi Duddingtonia flagrans (AC001) and Monacrosporium thaumasium (NF34) after passage through the gastrointestinal tract of female donkeys. Twelve dewormed female donkeys that were kept in stables were used. Two treatment groups each comprising four animals received orally 100 g of pellets made of sodium alginate matrix containing a mycelial mass of either D. flagrans (AC001) or M. thaumasium (NF34). The control group consisted of four animals that received pellets without fungus. Feces samples were then collected from the animal groups at different times (after 12, 24, 48 and 72 hours). These feces were placed in Petri dishes containing 2% water-agar medium and 1000 L3 of S. westeri. AC001 and NF34 isolates showed the ability to destroy the L3, after gastrointestinal transit, thus demonstrating their viability and predatory activity.

O Strongyloides westeri é o nematóide de maior prevalência entre equídeos com idade até quatro meses, causando distúrbios gastrintestinais. O objetivo do presente trabalho foi observar o controle de larvas infectantes (L3) de Strongyloides westeri pelos fungos nematófagos Duddingtonia flagrans (AC001) e Monacrosporium thaumasium (NF34) após trânsito gastrintestinal em jumentas. Foram utilizadas 12 jumentas, estabuladas e previamente vermifugadas. A seguir, dois grupos tratados, contendo cada um 4 animais receberam por via oral 100 g de péletes em matriz de alginato de sódio, contendo massa miceliana dos fungos D. flagrans (AC001) ou M. thaumasium (NF34). O grupo controle foi constituído de 4 animais que receberam péletes sem fungo. A seguir, amostras de fezes dos grupos de animais foram coletadas em distintos intervalos de horas (12, 24, 48 e 72). Essas fezes foram vertidas em placas de Petri contendo meio sólido ágar-água 2% e 1000 L3 de S. westeri. Os isolados AC001 e NF34 apresentaram capacidade de destruir as L3 após o trânsito, demonstrando sua viabilidade e atividade predatória.

Destruição de ovos de Toxocara canis pelo fungo nematófago Pochonia chlamydosporia / Destruction of Toxocara canis eggs by the nematophagous fungus Pochonia chlamydosporia

INTRODUÇÃO: Toxocara canis é um ascarídeo parasita do intestino delgado de cães, causador da larva migrans visceral em seres humanos. MÉTODOS: Com o objetivo de demonstrar a eficácia do fungo Pochonia chlamydosporia sobre ovos de Toxocara canis em condições laboratoriais, foi montado ensaio experimental em placas de Petri com ágar-água 2 por cento. RESULTADOS: Houve atividade ovicida de 43,8 por cento (p<0,01) do grupo tratado em relação ao grupo controle durante os intervalos estudados. CONCLUSÕES: Os resultados demonstrados no presente trabalho sugerem a empregabilidade de Pochonia chlamydosporia como uma alternativa de controle biológico dos ovos embrionados de Toxocara canis.

INTRODUCTION: Toxocara canis is an ascarid parasite of the small intestine of dogs that causes visceral larva migrans in humans. METHODS: With the aim of demonstrating the effectiveness of the fungus Pochonia chlamydosporia on Toxocara canis eggs under laboratory conditions, a trial was set up in Petri dishes with 2 percent agar-water. RESULTS: There was ovicidal activity of 43.8 percent (p < 0.01) in the treated group in relation to the control group over the periods studied. CONCLUSIONS: The results from the present study suggest that Pochonia chlamydosporia can potentially be used as an alternative biological control for embryonated Toxocara canis eggs.

Ação ovicida do fungo Pochonia chlamydosporia sobre ovos de Enterobius vermicularis / Ovicidal activity of Pochonia chlamydosporia fungus on Enterobius vermicularis eggs

A capacidade ovicida de dois isolados do fungo nematófago Pochonia chlamydosporia (VC1 e VC4) sobre ovos de Enterobius vermicularis foram analisadas e comparadas em meio agar–água 2% (AA2%). Os ovos de E.vermicularis foram vertidos para placas de Petri com AA2% contendo os isolados fúngicos crescidos, e em placas de Petri sem fungo como controle. Ao completarem 5 e 10 dias de incubação, cem ovos foram removidos e classificados de acordo com os seguintes parâmetros: efeito do tipo 1, efeito fisiológico e bioquímico sem prejuízo morfológico à casca do ovo; efeito do tipo 2, efeito lítico com alteração morfológicada casca e embrião; e efeito do tipo 3, efeito lítico com alteração morfológica do embrião e da casca, além de penetração de hifas e colonização interna do ovo. Os isolados fúngicos eficientes na destruição de ovos de E. vermicularis, apresentando o efeito do tipo 3 nos 5 e 10 dias de interação (p>0,01). Foi demonstrada a propriedade dos isolados de P. chlamydosporia (VC1 e VC4) em atuar de forma negativa sobre os ovos de E. vermicularis e, portanto, ser considerado um potencial candidato como produto a ser utilizado no controle biológico desse nematóide.