Pore-linked filaments in anura spermatocyte nuclei

Pore-linked filaments were visualized in spreads of anuran spermatocyte nuclei using transmission electron microscope. We used Odontophrynus diplo and tetraploid species having the tetraploid frogs reduced metabolic activities. The filaments with 20-40 nm width are connected to a ring component of the nuclear pore complex with 90-120 nm and extend up to 1æm (or more) into the nucleus. The filaments are curved and connect single or neighboring pores. The intranuclear filaments are associated with chromatin fibers and related to RNP particles of 20-25 nm and spheroidal structures of 0.5æm, with variations. The aggregates of several neighboring pores with the filaments are more commonly observed in 4n nuclei. We concluded that the intranuclear filaments may correspond to the fibrillar network described in Xenopus oocyte nucleus being probably related to RNA transport. The molecular basis of this RNA remains elusive. Nevertheless, the morphological aspects of the spheroidal structures indicate they could correspond to nucleolar chromatin or to nucleolus-derived structures. We also speculate whether the complex aggregates of neighboring pores with intranuclear filaments may correspond to pore clustering previously described in these tetraploid animals using freeze-etching experiments.

Filamentos ligados a poros foram visualizados em núcleos de espermatócitos de anuros através da técnica de espalhamento para microscopia eletrônica de transmissão. Os animais usados pertencem ao gênero Odontophrynus com espécies cripticas diplo e tetraplóides naturais, tendo os tetraplóides atividade metabólica reduzida. Os filamentos com 20-40 nm de largura são ligados a um anel componente do complexo poro nuclear de 90-120 nm e estendem-se até 1 æm (ou mais) para dentro do núcleo. Os filamentos são curvos e ligam poros simples ou poros vizinhos. Os filamentos intranucleares são associados a fibras de cromatina e relacionados a partículas de RNP de 20-25 nm e a estruturas esféricas de 0.5æm, com variações. Os agregados de poros vizinhos com os filamentos longos são mais freqüentemente observados em núcleos 4n. Concluímos que os filamentos intranucleares podem corresponder aos emaranhados fibrilares descritos em núcleos de oócitos de Xenopus e possivelmente relacion ados ao transporte de RNA. A base molecular desse RNA não é conhecida. Contudo, os aspectos morfológicos das estruturas esféricas parecem indicar que elas podem corresponder à cromatina nucleolar ou a estruturas derivadas do nucléolo. Também, especulamos se os agregados complexos de poros vizinhos com os filamentos intranucleares podem corresponder aos aglomerados de poros previamente descritos nesses animais tetraplóides através da técnica "freeze-etching".

Extrachromosomal circular DNA-containing structures in lymphocytes of normal and x-fragile individuals: electron microscopy

Por microscopia eletrônica, evidenciou-se seqüências de ADN ricas em CG, ativas na transcriçäo de ARN em "spreads" de linfócitos in-vitro, de indivíduos normais e com fra-X. Esta classe de DNA ocorre em dois estados dentro dos núcleos. Apresenta-se como círculos extracromossômicos ou em associaçäo com alças cromatínicas "multiforked". Assumiu-se que os círculos säo formados pelo anelamento de segmentos excisos, neosintetizados nas alças cromatínicas complexas. As configuraçöes encontradas levaram à discussäo sobre a ocorrência eventual da amplificaçäo gênica ou de elementos similares a transposons em células humanas somáticas

Active genes visualized in pachytene and lymphocyte nuclei from normal and affected individuals: Ag-As-staining, light and electron microscopy and high-resolution autoradiography

Aglomerados de genes nucleolares transcritos foram evidenciados por microscopia óptica e eletrônica como grânulos de 0.1 a 1.0 micron m, corados com prata e ácido fosfotungstico alcoólico (PTA), em espermatócitos e linfócitos humanos. Os grânulos encontrados nos núcleos paquitênicos acham-se aglomerados numa regiäo nuclear distinta, contendo bivalentes autossômicos associados e o par sexual XY. Um grânulo corado pela prata foi encontrado estreitamente relacionado com o bivalente sexual XY. Esta específica regiäo nuclear foi designada "corpo cromatínico" (c cr), neste trabalho. Os grânulos, encontrados nos nucléolos de linfócitos, correspondem a aglomerados de sítios ativos em transcriçäo, tendo fibrilas enroladas de ribonucleoproteínas (RNP), as quais incorporam uridina [3H], em experimentos de marcaçäo de pulso. Os genes ativos foram encontrados nos componentes fibrilares do nucléolo e seus níveis de transcriçäo, estimados pela quantidade de grânulos corados, variaram em indíviduos normais e afetados e durante o tratamento com ácido fólico

Circular Chromatin complexes in human lymphocytes: high-resolution autoradiography

Fibras de cromatina ativas em transcriçäo foram observadas em cromossomos humanos. Esses cromossomos mostram configuraçöes do tipo "loops/scaffold". As fibras ativas têm nucleossomos alterados e apresentam aspectos "multi-forked" os quais levam à formaçäo de anéis. Os transcritos de Ribonucleoproteína (RNP) aparecem como emaranhados de 0,1 micronm ou múltiplos dispostos em série ao longo de fibra. Sugere-se que os complexos circulares de cromatina pertencem ao genoma humano. A possibilidade de que os anéis provêm de procariotos é também discutida

Aspects of active chromatin in chromosomes displaying loops/scaffold configuration: high-resolution autoradiography

Cromossomos profásicos apresentando a configuraçäo "loops/scaffold" foram obtidos em espalhamentos de células do sangue periférico humano de indivíduos normais e afetados. Observou-se uma distinta classe de alças condensadas formando um corpo cromatínico de diâmetro variável. Essas alças säo intensamente dobradas, têm nucleossomos alterados, apresentam fibrilas laterais e fragmentam-se formando anéis. Estas fibrilas incorporam 5 3H uridina, como demonstrado por autoradiografia de alta resoluçäo. As alteraçöes dos nucleossomos foram explicadas pela remoçäo de histonas sendo os anéis indicativos de seqüências repetitivas do DNA