Marcación de un anticuerpo monoclonal con 99mTc por medio del grupo 99cTcN: evaluación de un modelo biológico / 99mTC labeling of a monoclonal antibody via a 99mTcN group: a biological model evaluation

El anticuerpo monoclonal (AcMo) anti-CEA B2C114 fue marcado con 99mTc utilizando uno de los métodos directos de marcación, en el cual la proteína (AcMo IgG1) se reuce utilizando una solución de Ditiotreitol (DTT) para generar grupos sulfhidrilos, uniendo el 99mTc a los mismos a través del anión [99mTcNCl4]- preparado por calentamiento a reflujo de pertecneciato en presencia de azida sódica y HCl conc. El exceso de DTT se eliminó pasando el AcMo reducido por Sephadex G-25 y del mismo modo se realizó la purificación del anticuerpo marcado. Las cromatografías en TLC y Whatman Nº1 usando Metanol 85 por ciento y solución fisiológica como solventes, mostraron una actividad unida a proteínas entre 55-60 por ciento, obteniéndose luego de la purificación por Sephadex G-25 un producto con 90-95 por ciento de pureza radioquímica. Se realizó la biodistribución en ratones Balb/c a las 21 h post inyección obteniéndose una relación de 2:1 de la dosis inyectada por gramo de tejido, con respecto al tumor reactivo:no reactivo. El ensayo de unión realizado demostró que el AcMo conservó su actividad biológica después de marcado

Marcación del anticuerpo monoclonal B2C114 con 111In usando un quelante funcional / 111In labelling of B2C114 monoclonal antibody with a bifunctional chelating agent

El anticuerpo monoclonal (AcMo) B2C114, dirigido contra el antígeno carcinoembrionario (CEA) fue conjugado con el anhídrido bicíclico del DTPA (CA-DTPA) usando diferentes relaciones molares CA-DTPA: AcMo desde 1:1 hasta 30:1. Se determinó para cada caso la eficiencia de acoplamiento y el número de moléculas de DTPA por molécula de AcMo. Se realizó la marcación con 111In para todas las relaciones molares CA-DTPA: AcMo y se determinó la pureza radioquímica por cromatografía instantánea en placa delgada (ITLC Gelman SG) y cromatografía en gel (Sephadex G-25). La biodistribución del AcMo marcado en ratones normales Balb/c y en portadores de tumor reactivo (M3), a diferentes horas post-inyección, mostró una acumulación creciente en el tumor al cabo de 72 h, con captación en hígado y riñón. Se observó también que al aumentar la relación molar CA-DTPA se incrementó el porcentaje de radiactividad asociada al riñón, lo cual indicaría una mayor inestabilidad del radiofármaco

Diseño y evaluación de un modelo para la radioinmunolocalización e inmunoterapia del cáncer / Design and evolution of a model for the radioimmunotargetting and immunotherapy of cancer

El anticuerpo mionoclonal B2C114 producido contra el antígeno carcinoembrionario reconoce un carbohidrato del antígeno A de grupo sanguineo humano. La expresión de este determinante antigénico se investigó en estirpes celulares del adenocarcinoma mamario espontáneo M3 y su derivada experimental MM3 de mayor capacidad metastatizante. La reactividad específica in vitro de B2C114 marcado con I a la 125 permitió determinar el número de epitopes antigénicos por celula M3 y la constante de asociación. La biodistribución del anticuerpo monoclonal mostró que I a la 125-B2C114 discriminó, con alta sensibilidad, entre el tumor M3, la variante MM3 y tejidos normales, confirmado por la obtención de imágenes positivas de M3 en cámara gamma. Estos estudios han permitido la obtención de un modelo que facilita el desarrollo de diferentes tecnologías aplicadas al diagnóstico y a la terapéutica del cáncer

Producción de un anticuerpo monoclonal para la detección de antígeno A del sistema ABO de grupos sanguíneos / Production of a monoclonal antibodies for the detection of antibody A of the ABO blood group system

Se demuestra en el presente trabajo la utilidad de anticuerpos monoclonales anti-grupo sanguíneo. A obtenidos a partir de un híbrido generado por fusión entre linfocitos de bazo de ratón inmunizado y células de mieloma. El clon productor del anticuerpo monoclonal, denominado B2/C114, fue propagado como tumor ascítico en ratones, lo que permitió su conservación y producción en gran escala. El reactivo obtenido es útil para la evaluación rutinaria de grupos sanguíneos, presentando gran avidez, estabilidad superior a 12 meses y alto título, condiciones que satisfacen ampliamente los requerimientos de seguridad diagnóstica y costo efectivo

Monoclonal antibodies specific for carcinoembryonic antigen produced by hybridoma technology

El objetivo del presente trabajo fue la producción, caracterización y aplicación de anticuerpos monoclonales anti-antígeno carcinoembrionario. Ratones Balb/c fueron inmunizados con 2 dosis ip de 5 y 10 microng de antígeno carcinoembrionario en adyuvante completo de Freund cada 30 días, y 3 dosis de refuerzo durante días consecutivos. Las células esplénicas fueron fusionadas con células de mieloma X63/Ag8.653 en presencia de polietilenglicol, y los híbridos rescatados en medio selectivo conteniendo hipoxantina-methotrexate-timidina. La detección de híbridos productores de anticuerpos monoclonales dirigidos contra el antígeno se realizó por radioinmunoanálisis en fase sólida, utilizando como trazador imunoglobulina de conejo anti-ratón marcada con 125I. Se obtuvo una eficiencia del 65% en crescimiento y del 13% en positividad. Los híbridos fueron clonados y estabilizados por miniclonado repetitivo, con un 65% de crecimiento y 40% de positividad. De 11 hibridomas productores se seleccionaron 3 que fueron inyectados en ratones BALB/c para la obtención de tumores ascíticos. La inmuno-especificidad de los anticuerpos monoclonales A4, A15 y A19 fue determinada por inmunoelectroforesis crozada, detectándose la formación de inmunoprecipitados específicos entre los anticuerpos monoclonales y el antígeno carcinoembrionario marcado con 125I. El anticuerpo monoclonal A4, de altas afinidad (K=1,60x10*10 litros/mol) fue activo en el radioinmunoensayo hasta la dilución 1: 10 000 testada, permitiendo detectar valores de aproximadamente 0,5ng/ml. En ensayos de competición contra el anticuerpo policlonal, el rango de inhibición obtenido fue del 28 al 35% utilizando antígeno purificado, y del 10 al 15% con sueros de pacientes afectados por cáncer de colon...