Distribución de los genotipos del virus papiloma humano en infecciones cervicales en mujeres de La Plata, Argentina / Genotype distribution of human papillomavirus in cervical infection of women in La Plata, Argentina

La infección genital por el virus papiloma humano (VPH) es la enfermedad de transmisión sexual de tipo viral más común en el mundo. Loas tipos virales de alto riesgo son considerados los agentes etiológicos del cáncer de cuello uterino. El objetivo de este estudio fue analizar los genotipos del VPH en un grupo de mujeres de la ciudad de La Plata, Argentina. Se estudiaron 718 hisopados y/o biopsias cervicales correspondientes a 152 muestras normales (Pap I/II), 84 muestras clasificadas como con atipías de significado incierto (ASCUS), 100 condilomas, 279 lesiones intraepiteliales de bajo grado (LGSIL), 82 lesiones intraepiteliales de alto grado (HGSIL) y 21 carcinomas de células escamosas (SCC). La detección del genoma viral se realizó por medio de la reacción en cadena de la polimerasa (PCR), utilizando un protocolo anidado con los cebadores My 09/11 y Gp 05/06. La genotipificación del VPH se realizó por medio de la técnica de análisis de polimorfismos en la conformación de cadenas simples, utilizando solución de siembra de baja fuerza iónica (LIS-SSCP). La prevalencia general de la infección fue 75 por ciento, con 46 por ciento de muestras ADN-VPH positivas para el grupo Pap I/II, 69 por ciento para las clasificadas como ASCUS, 86 por ciento para los condilomas, 80 por ciento para los LGSIL, 98 por ciento para los HGSIL y 100 por ciento para los carcinomas de células escamosas. Los tipos virales más prevalentes fueron VPH 16 (35 por ciento), VPH 6/11 (27 por ciento cada uno), VPH 33 (6 por ciento) y VPH 18 (5 por ciento). En el grupo de mujeres con LGSIL, HGSIL y SCC el tipo viral más prevalente fue VPH 16, representando el 33 por ciento, 50 por ciento y 67 por ciento de las infecciones, respectivamente. En las mujeres con Pap I/II, ASCUS y condilomas los tipos virales más frecuentes fueron VPH 6 y 11. El grupo etario con mayor prevalencia de VPH fue el comprendido por mujeres de 21 a 30 años, acumulando el 32,2 por ciento de las infecciones totales.

Utilización de la reacción en cadena de la polimerasa para le detección y genotificación de Helicobacter pylori gástricas incluidas en parafina: un estudio retrospectivo / Utilization of polymerase chain reaction for detection and genotyping of Helicobacter pylori in gastric biopsy using paraffin: a retrospective study

BACKGROUND: Helicobacter pylori infection is presumed to be the major causal agent of chronic active gastritis in humans. The persistent infection with this pathogen would be an important factor in the pathogenesis of peptic ulcer and also gastric cancer. METHODS: We investigated relationship between H. pylori characteristics in 42 patients with normal mucosa or gastritis with minor changes and 40 patients with mild and severe gastritis. Detection and typing of vacA and cagA genes were performed using a polymerase chain reaction method. RESULTS: The analysis of vacA prevalence and the type (S1 or S2) showed non-significant differences between the two groups studied (p > 0.05). However, cagA analysis showed highly significant differences between the groups classified as normal tissue-weak gastritis and mild-severe gastritis (p < 0.0001; OR = 8.4; CI = 3.1-22.8). CONCLUSIONS: cagA status is associated to the grade of gastritis, finding higher frequencies of H. pylori cagA+ in the moderate-severe gastritis group. These highly significant differences could make cagA status a genetic marker for disease progress.

HLA-DQA1 allele typing by nonisotopic PCR-LIS-SSCP

In the present study we used a simple and reliable method for HLA-DQA1 allele typing based on the single-stranded conformation polymorphism (SSCP) properties of DNA molecules obtained by PCR. The technique consists of PCR amplification of a DNA fragment comprising the second exon of the HLA-DQA1 gene, amplicon denaturation using a low ionic strength solution (LIS), and electrophoresis on a small native polyacrylamide gel, followed by a rapid silver staining procedure. In order to validate the technique and to obtain the allele patterns for the DQA1 gene, 50 cervical samples were typed using this methodology and the commercial Amplitype® HLA DQA1 Amplification and Typing kit. All the alleles detected with the kit were characterized by the LIS-SSCP approach. This procedure proved to be useful for population screening and typing of the DQA1 gene as well as for detecting new alleles or mutations in the donor-recipient molecular matching of HLA class II genes

Detección y genotipificación del papillomavirus humano (HPV) por PCR-LIS-SSCP / Detection and genotyping of human papillomavirus (HPV) using PCR-LIS-SSCP

This study describes a fast and simple method for human papillomavirus (HPV) typing based on the polymerase chain reaction (PCR) amplification of a portion of the viral genome and single strand conformation polymorphism using low ionic strength solutions (LIS-SSCP). PCR products were obtained using My09/My11 and Gp5/Gp6 primers in a nested reaction. The band patterns corresponded to the plasmid HPV clones from HPV-6, -11, -16, -18, -31, -33 and -34. The SSCP minigels were stained with SYBR-Green II. In order to determine diagnostic applicability, 100 cervical samples were studied comprising liquid cytology and paraffin embedded biopsies from patients showing squamous intraepithelial lesions (SILs). The SSCP patterns obtained from the clinical samples and the HPV clones were similar when the same type was present. Therefore, the methodology proved to be efficient and with high reproducibility for the detection and typing of HPV in clinical samples.

Activación de los protooncogenes K-ras y c-erbB-2 en adenocarcinomas colónicos humanos / Activation of K-ras and c-erbB-2 protooncogenes in human colonic adenocarcinomas

Aunque los datos de las alteraciones genéticas que conducen al desarrollo de cáncer colorectal son abundantes, las alteraciones genéticas específicas para cada clase de tumor no han sido demostradas. El fenotipo cáncer colorectal es originado por la acumulación de diferentes alteraciones genéticas. La naturaleza de esas alteraciones, su orden de aparición y sus asociaciones, varian ampliamente de un tumor a otro, sugiriendo que el concepto de un modelo único de carcinogénesis no es aplicable a estos tumores. El objetivo del presente trabajo fue estudiar la asociación entre las mutaciones en los protooncogenes K-ras y c-erbB-2 con diferentes variables clinicopatológicas en 54 muestras de adenocarcinomas de colon. La detección de la activación de K-ras en 16 casos fue hecha mediante PCR alelo específica. Para la detección de la amplificación genética en c-erbB-2 se empleó un método de coamplificación por PCR con gen de copia única como referencia. Fueron detectadas mutaciones en K-ras en 16 casos (29,63 por ciento) y amplificación en c-erbB-2 en una muestra (1,85 por ciento). El análisis estadístico mostró una asociación significativa entre frecuencia de mutaciones en el codón 12 de K-ras y el estadio B de Dukes (p<0.005). Por otra parte, no se encontró asociación alguna con los otros parámetros estudiados. Estos resultados indicarian que la activación del protooncogén K-ras podría ocurrir en estadíos tempranos de la enfermedad.

Genetic variability and population structure in loci related to milk production traits in native Argentine Creole and commercial Argentine Holstein cattle

Muitas raças de gado foram submetidas a alta pressäo de seleçäo para caracteres de produçäo. Conseqüentemente, a estrutura genética e a distribuiçäo alélica da populaçäo poderiam diferir em raças sob alta pressäo de seleçäo, quando comparadas a raças näo selecionadas. Foi feita a análise das freqüências dos genes de K-caseína, aS1-caseína e prolactina em rebanhos de gado Creole argentino (AC) e Holstein argentino (AH). Os valores de FST calculados mediram o grau de diferenciaçäo genética de subpopulaçöes, dependendo de variaçöes na freqüência dos genes. A raça AC apresentou variaçäo consideravelmente maior entre os rebanhos nos loci de aS1-caseína e K-caseína. Estratégias de conservaçäo devem considerar a populaçäo inteira de AC de forma a manter a variabilidade genética encontrada nesta raça nativa.