The effects of riboflavin and ultraviolet light on keratocytes cultured in vitro / Avaliação do efeito da riboflavina e luz ultravioleta sobre os ceratócitos in vitro

ABSTRACT Purpose: To culture quiescent human keratocytes and evaluate the effects of ultraviolet light and riboflavin on human corneal keratocytes in vitro. Methods: Keratocytes were obtained from remaining corneoscleral ring donor corneas previously used in corneal transplant surgeries and cultured in DMEM/F12 with 2% FBS until confluence. Characterization of cultured cells was performed by immunofluorescence analysis for anti-cytokeratin-3, anti-Thy-1, anti-α-smooth muscle actin, and anti-lumican. Immunofluorescence was performed before and after treatment of cultured cells with either ultraviolet light or riboflavin. Corneal stromal cells were covered with collagen (200 µL or 500 µL) and 0.1% riboflavin, and then exposed to ultraviolet light at 370 nm for 30 minutes. After 24 hours, cytotoxicity was determined using MTT colorimetric assays, whereas cell viability was assessed using Hoechst 33342 and propidium iodide. Results: Cell cultures achieved confluence in approximately 20 days. Expression of the lumican was high, whereas no expression of CK3, Thy-1, and α-SMA was observed. After crosslinking, MTT colorimetric assays demonstrated a low toxicity rate, whereas Hoechst 33342/propidium iodide staining demonstrated a low rate of apoptosis and necrosis, respectively, in all collagen-treatment groups. Conclusion: Keratocytes can be successfully cultured in vitro and characterized by immunofluorescence using lumican. MTT colorimetric assays, and Hoechst 33342, and propidium iodide staining demonstrated a higher rate of cell death in cells cultured without collagen, indicating collagen protects keratocytes from the cytotoxic effects of ultraviolet light.

RESUMO Objetivo: Avaliar o efeito da aplicação da luz ultravioleta e riboflavina sobre ceratócitos da córnea humana in vitro. Métodos: Os ceratócitos foram obtidos a partir das rimas corneoesclerais remanescentes da trepanação de córneas previamente utilizadas em cirurgias de transplante de córnea e cultivadas em meio DMEM/F12 com 2% de FBS até atingir confluência. As culturas de células foram caracterizadas por imunofluorescência com os anticorpos K3 (marcador de células epiteliais), Thy-1 (marcador de fibroblasto) SMA (marcador de miofibroblasto) e Lumican (marcador de ceratócitos). Imunofluorescência também foi feita após o tratamento. As células do estroma da córnea foram cobertas com colágeno (200 µL e 500 µL) e 0,1% de riboflavina e exposta a luz UVA a 370 nm por 30 minutos. Após 24 horas, citotoxicidade foi determinada por ensaio de MTT e a viabilidade celular foi feita por Hoechst 33342/Iodeto de propideo. Resultados: As culturas de células atingiram confluência em aproximadamente 20 dias. Imunofluorescência apontou alta expressão para o marcador de ceratócitos (Lumican) e expressão negativa par os marcadores de células epiteliais (K3), fibroblasto (Thy-1) e miofibroblasto (α-SMA). Após o cross linking a análise de MTT mostrou baixa taxa de toxicidade e com a coloração de Hoechst 33342/Iodeto de propideo baixa taxa de apoptose e necrose respectivamente em todos os grupos que continham colágeno. Conclusão: As culturas de ceratócitos foram obtidas e caracterizadas por imunofluorescência através do marcador Lumican com sucesso. O ensaio de MTT e a coloração por Hoechst 33342 e iodeto de propídio, apresentaram maior índice de morte celular nos grupos que não continham colágeno, provando que protege as células contra os efeitos da luz UVA.

Intrastromal injection of bevacizumab in patients with corneal neovascularization / Injeção intraestromal de bevacizumabe em pacientes com neovascularização corneana

Corneal neovascularization (NV) not only reduces visual acuity, but it also causes loss of the cornea's immune privilege, strongly contributing to a worse prognosis in penetrating keratoplasty. Several mediators participate in corneal angiogenesis, and the role of vascular endothelial growth factor (VEGF) has been extensively proven. Anti-VEGF agents have been shown to be effective in slowing the growth of corneal neovessels. Bevacizumab, an anti-VEGF agent, has been successfully used in the treatment of corneal neovascularization. In this paper, we report a series of patients who underwent intracorneal bevacizumab injections to treat corneal vascularization.

Além de causar redução da acuidade visual, a neovascularização corneana leva à perda do privilégio imunológico da córnea, contribuindo para um pior prognóstico em casos de ceratoplastia penetrante. Diversos mediadores participam da angiogênese corneana. O papel do fator de crescimento endothelial vascular (VEGF) já foi amplamente descrito. Agentes inibidores do VEGF são eficazes na redução do crescimento de neovasos corneanos. Bevacizumabe, um agente anti-VEGF, tem sido utilizado com sucesso no tratamento de neovascularização corneana. Neste artigo, relatamos uma série de pacientes que foram submetidos à injeção intraestromal de bevacizumabe para o tratamento de vascularização corneana.

Qualidade de vida dos pacientes portadores de síndrome de Stevens-Johnson / Quality of life in patients with Stevens-Johnson syndrome

Objetivo: Avaliar a qualidade de vida dos pacientes portadores de síndrome de Stevens-Johnson. Métodos: Foram avaliados 14 pacientes com SSJ no período de 1998 e 19999 no setor de Córnea do Departamento de Oftalmologia da UNIFESP. Empregou-se o questionáro S.F.36 - pesquisa em saúde. A pontuação indica melhor condição de saúde. A mesma avaliação foi repetida quatro vezes em intervalo de três meses. Resultados: As médias das médias das 4 avaliações dos 14 pacientes apresentaram bastante redução dos seus valores em todos os subitens. do S.F.36 (41,04 +/- 22,38 para aspectos físicos, 53,82 +/- 22,82 para aspectos sociais, 26.24 +/- 22,46 para aspectos emocionais, 34,95 +/- 25,45 para capacidade funcional, 42,03 +/- 31,85 para dor, 46,33 +/- 18,37 para vitalidade, 46,18 +/- 24,83 para saúde mental 50, 26 +/- 16,29 para saúde geral). Conclusão: O questionário S.F.36 representa método adequado de avaliação de aspectos físicos e emocionais em pacientes com baixa de acuidade visual, que nos permitiu detectar comprometimento importante nas funções básicas dos pacientes com SSJ. Mais pacientes com maior tempo de seguimento são necessários para aprimorar a análise de qualidade de vida nesses pacientes e avaliar os efeitos do acompanhamento psicológico.

Deficiencia de vitamina A: relato de um caso / Vitamin A deficiency: case report

Relatamos um caso de defiiência primária de vitamina A om apresentaçäo inicial ocular tratado tópica e sistemicamente com vitamina A 100.000UI po dia via oral e colírio de 5.000UI/ml, quatro vezes ao dia. Com o tratamento houve total resoluçäo das manifestaçöes oftalmológicas