Desarrollo de una técnica de inmunoelectrotransferencia westernblot para la detección de anticuerpos contra componentes proteínicos de Salmonella typhi / Development of an immunoelectrotransference Western blotting technic for detection of antibodies Salmonella typhi proteic particles antibodies

Desde su desarrollo la inmunoelectrotransferencia (INMET) ha sido una herramienta útil en biología molecuar así como también en el diagnóstico de diferentes enfermedades infecciosas. Tradicionalmente la demostración de anticuerpos contra Salmonella typhi, se ha enfocado hacia la detección de aquellos, que se producen contra lipopolisacáridos especialmente los que se relacionan con el antígeno somático O. Pero pocos trabajos, se han realizado para la detección de anticuerpos contra otros antígenos tales como proteínas protoplasmáticas. Este trabajo intenta demostrar si tales anticuerpos se producen en conejos inmunizados experimentalmente, así como también en voluntarios vacunados contra la fiebre tifoidea con la vacuna oral (cepa T y 21a). El antígeno preparado y purificado a partir de una cepa de Salmonella typhi, fue suspendido en una solución tampón y sonificado para obtener sus productos celulares; de esta manera y con la adecuada concentración de proteínas fue separado en gel de poliacrilamida en sus diferentes fracciones antigénicas y luego transferidos a membranas de nitrocelulosa en donde por medio de reacción inmunoenzimática, se visualizó la banda característica, al poner en contacto la membrana con el antisuero hiperinmune obtenido en conejos (Modelo Experimental) y el suero de voluntarios antes y después de la inmunización (Modelo Humano). La banda visualizada correspondió a un peso aproximado de 38.000 kd. Trece de los voluntarios (32.5 por ciento), presentaron esta misma banda antes de la inmunización, la cual, aunque más tenue, representó un complejo antígeno- anticuerpo, lo cual, induce a pensar en un posible contacto con el microorganismo en el pasado. La posibilidad de la reacción cruzada se descartó realizando el mismo procedimiento con lisados de Escherichia coli

Obtención de anticuerpos monoclonales dirigidos contra antígenos solubles de P. falciparum / Obtainment of monoclonal antibodies directed against soluble P. falciparum antigens

En este trabajo, se describe la producción de los anticuerpos monoclonales dirigidos contra proteínas solubles de P. falciparum (FCB-1). Uno de los anticuerpos identificados como M-45 detectó una proteína de 72 Kd y dos más de menor peso molecular de 30 y 26 Kd, y el otro, identificado como G-172, detectó una proteína de 120 kd, cuando se enfrentaron a un extracto de esquizontes por inmunoelectrotransferencia. Estos anticuerpos monoclonares mostraron patrones de fluorescencia diferente en eritrocitos infectados con esquizontes; M-45 (isotipo M) produjo una fluorescencia uniforme y generalizada, mientras que el G-172 (isotipo G2a) mostró regiones con parches de mayor intensidad. Posteriormente, los monoclonales se utilizaron en una prueba de Elisa sandwich, como anticuerpos de captura para antígenos solubles de P. falciparum, en sobrenadantes de cultivo y en cinco sueros de pacientes con infección malárica aguda. Los resultados mostraron un 100 por ciento de sensibilidad y especificidad para la dilución 1/20 de los sueros y un 80 por ciento de sensibilidad para la dilución 1/40. Teniendo en cuenta estos resultados preliminares se abre la posibilidad de utilizar estos monoclonales en una prueba de Elisa que permita el seguimiento de una infección malárica

ELISA ureasa para selección primaria y monitoreo de anticuerpos monoclonales / ELISA urease for primary selection and monitoring of monoclonals antibodies

Se empleó el método de ELISA Ureasa indirecto para detectar anticuerpos monoclonares obtenidos a partir de ratones inmunizados con merozoitos libres de Plasmodium falciparum. Se seleccionaron los anticuerpos monoclonales que mostraron ser muy estables en posteriores ensayos de caracterización. Los anticuerpos obtenidos no fueron específicos contra antígeno de Plasmodium falciparum pero permitieron identificar la proteína espectrina del citoesqueleto de eritrocito humano. En el ensayo fue empleado un antígeno de esquizontes concentrados y solubilizados. Se obtuvo la determinación del punto final de la reacción a través de lectura visual semicuantitativa. A partir de la enzima Ureasa de alta pureza que se encuentra disponible comercialmente y, empleando métodos muy sencillos se prepararon los reactivos utilizados en el ensayo

Aislamiento y purificación de desoxirribonucleasa B de streptococcus pyogenes / Isolation and purification of streptococcal deoxyribonuclease

La nucleasa B es un producto extracelular de una gran variedad de cepas de Streptococcus pyogenes que estimula la producción de anticuerpos los cuales son útiles como una confirmación de infección estreptocócica. La cuantificación de antiestreptolisinas y comprobación de un diagnóstico de infección estreptocócica. Una limitante para su utilización la constituyó en el pasado la obtención de la nucleasa B de actividad homogénea. El trabajo aquí presentado describe la producción y purificación simplificada de la nucleasa B mediante cromatografía de intercambio iónico de DEAE-SEPHAROSA-CL6B