Phlebotomine (Diptera: Psychodidae) species and their blood meal sources in a new leishmaniasis focus in Los Montes de María, Bolívar, in northern Colombia / Especies de flebotomíneos y sus fuentes de ingesta sanguínea en un nuevo foco de leishmaniasis en Los Montes de María (Bolívar) al norte de Colombia

Abstract Introduction. El Alférez, a village in Los Montes de María (Bolívar, Colombia) and a macro-focus of leishmaniasis, recorded its first case in 2018, evidencing changes in the distribution and eco-epidemiology of the disease, although interactions between vectors and local fauna remain unknown. Objective. To evaluate the diversity of sandflies and their blood meal sources in the community of El Alférez in the municipality of El Carmen de Bolívar (Bolívar, Colombia). Materials and methods. In 2018, sandflies were collected using LED-based light traps in domestic, peridomestic, and sylvatic ecotopes and identified at the species level. Multiplex polymerase chain reaction targeting the mitochondrial cytochrome B gene was used to analyze blood from the digestive tract. Results. Lutzomyia evansi was the most abundant species (71.85%; n = 485/675), followed by Lu. panamensis, Lu. gomezi, Lu. trinidadensis, Lu. dubitans, Lu. abonnenci, and Lu.aclydifera. Twenty-five percent of the species had blood meals from Canis familiaris (36.00%; n = 9/25), Ovis aries (36.00%; n=9:/25), Bos taurus (24.00%; n = 6/25), Sus scrofa (20.00%; n = 5/25), and Homo sapiens (8.00%; n = 2/25). Lutzomyia evansi registered the highest feeding frequency (68.00%; n = 17/25), predominantly on a single (44.00%; n = 11/25) or multiple species (24.00%; n = 6/25). Conclusion. Results indicate a eclectic feeding behavior in Lu. evansi, implying potential reservoir hosts for Leishmania spp. and increasing transmission risk. This study is a first step towards understanding the diversity of mammalian blood sources used by sandflies, that may be crucial for vector identification and formulation of effective control measures.

Resumen Introducción. En 2018, en la vereda El Alférez de Los Montes de María (Bolívar, Colombia), un macrofoco de leishmaniasis, se reportó el primer caso y se evidenciaron cambios en la distribución y ecoepidemiología de la enfermedad. No obstante, las interacciones entre vectores y fauna local aún son desconocidas. Objetivo. Evaluar la diversidad de flebotomíneos y sus fuentes de alimentación sanguínea en la comunidad de El Alférez del municipio de El Carmen de Bolívar (Bolívar, Colombia). Materiales y métodos. En el 2018, se recolectaron flebotomíneos mediante trampas de luz led ubicadas en el domicilio, el peridomicilio y en el área silvestre, y se identificaron a nivel de especie. Se utilizó la reacción en cadena de la polimerasa múltiple dirigida al gen mitocondrial citocromo B para analizar la sangre del aparato digestivo. Resultados. Lutzomyia evansi fue la especie más abundante (71,85 %; n = 485/675), seguida por Lu. panamensis, Lu. gomezi, Lu. trinidadensis, Lu. dubitans, Lu. abonnenci y Lu. aclydifera. El 25 % (n = 25/100) de las especies analizadas tuvieron como fuentes de ingesta sanguínea a Canis familiaris (36 %; n = 9/25), Ovis aries (36 %; n = 9/25), Bos taurus (24 %; n = 6/25), Sus scrofa (20 %; n = 5/25) y Homo sapiens (8 %; n = 2/25). Lutzomyia evansi fue la especie con la mayor frecuencia de alimentación (68 %; n = 17/25), predominantemente de una sola especie (44 %; n = 11/25) o de varias (24 %; n = 6/25). Conclusiones. Los hallazgos indican un comportamiento alimenticio ecléctico en Lu. evansi que implica potenciales reservorios para Leishmania spp. y eleva el riesgo de transmisión. Este estudio es un primer paso para comprender la diversidad de fuentes sanguíneas de mamíferos, utilizadas por los flebotomíneos, y que pueden ser cruciales para identificación de vectores y la formulación de medidas de control eficaces.

Infección por Trypanosoma spp. en murciélagos capturados en ecótopos urbanos y silvestres de la región Caribe en Colombia / Trypanosoma spp. infection in bats captured in urban and wild ecotopes of the Caribbean region in Colombia

R ESUMEN: Se evaluó la frecuencia de infección por Trypanosoma spp. en murciélagos capturados en ecótopos sil-vestres y urbanos del Departamento del Atlántico, en la región Caribe de Colombia, entre marzo de 2021 y mayo de 2022. Se identificaron taxonómicamente los murciélagos y se determinó sexo, edad relativa y condiciones reproductivas. Se utilizó una muestra de sangre para análisis parasitológico y extracción de ADN para la amplificar una región del ARNr 18S. Se capturaron 125 murciélagos, siendo las familias más abundantes Molossidae (62/125; 49,6%) y Phyllostomidae (43/125; 34,4%). Molossus molossus capturado en ecótopos silvestres mostró una frecuencia de infección del 8,1% (5/61) y 4,1% (3/61) mediante análisis parasitológico y molecular, respectivamente. En comparación, Noctilio albiventris capturado en ecótopos urbanos mostró una frecuencia de infección del 16,6% (2/12) para ambos análisis. Estos hallazgos re-presentan los primeros registros de M. molossus albergando Trypanosoma spp. para el Departamento del Atlántico y de N. albiventris albergando Trypanosoma spp. en Colombia.

Detección molecular de la infección natural por parásitos tripanosomátidos en Didelphis marsupialis de una zona rural del norte de Colombia / Molecular detection of the natural infection by trypanosomatid parasites in Didelphis marsupialis from a rural area in northern Colombia

Se evaluó la prevalencia de infección por parásitos tripanosomátidos en Didelphis marsupialis y su relación con los aspectos morfológicos/etarios en una zona rural de El Carmen de Bolívar, Colombia. En cinco visitas (2018-2019) se instalaron trampas Tomahawk® en los ecótopos peridoméstico y silvestre en la Vereda El Alférez, durante tres noches consecutivas/visita. A los animales recolectados, se les determinaron medidas corporales, sexo y edad; y se les extrajo sangre por cardiopuntura, previa sedación, para extracción del ácido desoxirribonucleico (ADN) total y amplificación de la región conservada del ADN de minicírculos de kinetoplasto (ADNk) de parásitos tripanosomátidos. La asociación entre parámetros morfológicos de los didélfidos y su frecuencia de infección por parásitos tripanosomátidos fue determinada mediante una regresión binomial. Se recolectaron 30 individuos de D. marsupialis (60,0% hembras y 40,0% machos/66,7% adultos y 33,3% juveniles). El diagnóstico molecular reveló una frecuencia de infección por parásitos tripanosomátidos del 46,7%. El estadio (p=0,024) fue determinante para la infección. Se discute el papel de D. marsupialis como potencial reservorio de parásitos tripanosomátidos en la zona evaluada.

We studied the prevalence of infection by trypanosomatid parasites in Didelphis marsupialis and its relationship with morphological/age aspects in a rural area of El Carmen de Bolivar, Colombia. Five visits were made to the Vereda El Alférez; each of which lasted three consecutive nights. During these visits, Tomahawk® traps were installed in the peridomestic and wild ecotopes of the Vereda El Alférez. Body measurements, sex and age were determined from the collected animals. Blood was extracted by cardiopuncture, after sedation, in order to obtain total deoxyribonucleic acid (DNA) and amplify the conserved region of the kinetoplast minicircle DNA (kDNA) of parasitic trypanosomatids. The association between morphological parameters of didelphids and their frequency of infection by parasitic trypanosomatids was determined by binomial regression. Thirty D. marsupialis specimens (60.0% females and 40.0% males/66.7% adults and 33.3% juveniles) were collected. Molecular diagnosis revealed a frequency of trypanosomatid parasite infection of 46.7%. Stage (p=0.024) was a determinant for infection. We discuss the role of D. marsupialis as a potential reservoir of parasitic trypanosomatids in the Vereda El Alférez.

FLEBOTOMINOFAUNA Y PRIMER REGISTRO DE Lutzomyia aclydifera (DIPTERA: PSYCHODIDAE) EN EL CARIBE COLOMBIANO / Phlebotomine fauna and the first record of Lutzomyia aclydifera (Díptera: Psychodidae) in the Colombian Caribbean

RESUMEN Uno de los focos de leishmaniasis más importante de Colombia está en Los Montes de María, Departamento de Bolívar, específicamente en El Carmen de Bolívar. A la fecha están registradas 19 especies del género Lutzomyia, en este departamento, algunas con antecedentes como vectores de Leishmania spp. La presente nota informa la abundancia y la diversidad de la flebotominofauna en la zona rural de El Carmen de Bolívar. Mediante el uso de trampas CDC, se colectaron 1327 hembras del género Lutzomyia entre enero a noviembre de 2018: Lu. evansi (81 %), Lu. panamensis (15,5 %), Lu. gomezi (2,9 %), Lu. dubitans (0,15 %), Lu. aclydifera (0,07 %), Lu. c. cayennensis (0,07 %), Lu. rangeliana (0,07 %) y Lu. serrana (0,07 %). La mayor abundancia de flebotomíneos se presentó en noviembre y la menor en abril, coincidiendo con los meses de lluvia y sequía, respectivamente; mientras que en enero se presentó la mayor diversidad. En esta investigación sobresalen Lu. evansi, Lu. panamensis y Lu. gomezi por sus antecedentes como vectores de Leishmania en el Departamento de Bolívar y otras regiones del país. Se reporta por primera vez para el Caribe Colombiano la especie Lu. aclydifera, la cual deberá ser vigilada en cuanto a su capacidad vectorial para Leishmania.

ABSTRACT One of the most important leishmaniasis foci in Colombia is Los Montes de María, Department of Bolívar, specifically in El Carmen de Bolívar. To date, 19 species of Lutzomyia have been recognized in this department, some with antecedents as vectors of Leishmania spp. This note reports the abundance and diversity of the phlebotomine sandflies fauna in the rural area of El Carmen de Bolívar. Through the use of CDC traps, 1327 females of the genus Lutzomyia were collected between January to November 2018: Lu. evansi (81 %), Lu. panamensis (15.5 %), Lu. gomezi (2.9 %), Lu. dubitans (0.15 %), Lu. aclydifera (0.07 %), Lu. c. cayennensis (0.07 %), Lu. rangeliana (0.07 %) and Lu. serrana (0.07 %). The highest abundance of sandflies occurred in November and the lowest in April, which is consistent with the rainy and dry months, respectively; while in January there was the greatest diversity. In this research, stands out Lu. evansi, Lu. panamensis and Lu. gomezi for their antecedents as vectors of Leishmania in the Department of Bolívar and other regions of the country. We reported the species Lu. aclydifera for the first time for the Caribbean region, hence, this species should be monitored given its vector capacity for Leishmania.

Diversidad genética de aedes aegypti en el eje transfronterizo Central-Alto Paraná en Paraguay / Genetic diversity of Aedes aegypti in the central-upper Paraná Cross-Border axis in Paraguay

RESUMEN Objetivos: Conocer la diversidad genética de Aedes aegypti en el corredor vial transfronterizo Central-Alto Paraná de Paraguay, con registros de casos de dengue. Materiales y métodos: Se seleccionaron veinte hembras adultas de la eclosión de huevos de Ae. aegypti procedentes de casas geolocalizadas en los departamentos de Alto Paraná, Caaguazú, Cordillera y Central, entre el 2018 y 2019. Se extrajo ADN del tejido de las hembras para amplificación aleatoria de sus patrones polimórficos mediante amplificación aleatoria del ADN polimórfico por PCR (RAPD-PCR), usando cebadores H3 y B03 a fin de conocer parámetros genéticos de diversidad poblacional. Las relaciones entre las poblaciones de mosquitos según la localidad fueron visualizadas mediante análisis no apareado de la media aritmética. Las áreas idóneas de distribución geográfica real y potencial de estas poblaciones de Ae. aegypti fueron analizadas mediante DIVA-GIS 7.3.0 y MAXENT. Resultados: Se identificaron 40 loci mediante perfiles RAPD-PCR, con diferenciación génica moderada (Gst = 0,12). El corredor transfronterizo presentó condiciones bioclimáticas para la presencia de poblaciones variantes de Ae. aegypti, siendo determinantes en la distribución la precipitación del trimestre más cálido y la temperatura media del trimestre más seco. Conclusiones: Se evidencia que existe diversidad genética moderada en las poblaciones de Ae. aegypti procedentes de zonas con registros de casos de dengue ubicadas en el corredor vial transfronterizo que une los departamentos Central y Alto Paraná de Paraguay. El estudio de variabilidad genética de Ae. aegypti es de gran utilidad para la vigilancia entomoepidemiológica y evaluación de posibles eventos de resistencia al control químico.

ABSTRACT Objective: To determine the genetic diversity of Aedes aegypti in the Central-Alto Paraná cross-border road corridor of Paraguay, an area that has reports of dengue cases. Materials and methods: Twenty adult females were selected from hatching Ae. aegypti eggs from households geolocated in the departments of Alto Paraná, Caaguazú, Cordillera and Central, between 2018 and 2019. DNA was extracted from the tissue of females for amplifying their polymorphic patterns by random amplification of polymorphic DNA by PCR (RAPD-PCR), using primers H3 and B03 in order to identify genetic parameters of population diversity. The relationships between mosquito populations according to locality were observed by unpaired arithmetic mean analysis. We used DIVA-GIS 7.3.0 and MAXENT to analyze the suitable areas of actual and potential geographic distribution of these Ae. aegypti populations. Results: Forty loci were identified by RAPD-PCR profiling, with moderate gene differentiation (Gst = 0.12). The cross-border corridor presented bioclimatic conditions for the presence of variant populations of Ae. aegypti, with precipitation in the warmest quarter and mean temperature in the driest quarter being determinant in the distribution. Conclusions: There is evidence of moderate genetic diversity in Ae. aegypti populations from areas that have reported dengue cases in the cross-border road corridor linking the Central and Alto Paraná departments of Paraguay. The study of genetic variability of Ae. aegypti is very useful for entomo-epidemiological surveillance and evaluation of possible resistance to chemical control.

Manifestaciones oculares de la toxocariasis en escolares del estado Anzoátegui en Venezuela / Ocular manifestations of toxocariasis in schoolchildren from the state from the Anzoátegui state in Venezuela

RESUMEN El objetivo de este estudio fue determinar manifestaciones oculares de la toxocariasis en escolares. Se realizó un estudio en dos escuelas del estado Anzoátegui en Venezuela en el 2019. Se empleó la prueba de ELISA para determinar los anticuerpos IgG contra Toxocara spp. Las familias completaron un cuestionario y los niños fueron evaluados clínicamente por pediatras y oftalmólogos. Participaron 118 niños, el 18,6% presentó anticuerpos anti-Toxocara spp. Las manifestaciones clínicas con asociación estadísticamente significativa fueron las reacciones alérgicas, epífora y disminución de la agudeza visual. En la evaluación oftalmológica se encontró queratitis, uveítis, iritis, granuloma retiniano, endoftalmitis, amaurosis, leucocoria, desprendimiento de retina y endotropía. Los hallazgos muestran una alta frecuencia de enfermedad ocular en niños con toxocariasis de un estado de Venezuela.

ABSTRACT The objective of this study was to determine ocular manifestations of toxocariasis in schoolchildren. A study was conducted in two schools in the Anzoátegui state in Venezuela in 2019. The ELISA test was used to determine IgG antibodies against Toxocara spp. The families completed a questionnaire, and the children were clinically evaluated by pediatricians and ophthalmologists. 118 children participated, 18.6% presented anti-Toxocara spp. The clinical manifestations with a statistically significant association were allergic reactions, epiphora, and decreased visual acuity. The ophthalmological evaluation found keratitis, uveitis, iritis, retinal granuloma, endophthalmitis, amaurosis, leukocoria, retinal detachment and endotropia. The findings show a high frequency of eye disease in children with toxocariasis from a state of Venezuela.

Infección natural por Trypanosoma cruzi en triatominos que habitan en la palma corozo ( Acrocomia aculeta ) en regiones del oriente de Venezuela / Triatominae in Palm Trees and Their Natural Infection by Trypanosoma cruzi in Regions of Eastern Venezuela

RESUMEN Objetivos Conocer la infestación natural por triatominos y su infección por Trypanosoma cruzi (T. cruzi) en Acrocomia aculeata (A. aculeata) o palma corozo en el estado Anzoátegui, Venezuela. Materiales y métodos Se estudió la infestación triatomínica y su infección por T. cruzi en A. aculeata desafectadas en campañas fitosanitarias. La presencia del parásito se determinó por microscopia y PCR-kDNA, y se realizó su caracterización mediante marcadores moleculares. Resultados Se encontraron 14 palmeras con infestación triatomínica, el 48,8 % de los ejemplares correspondieron a Rhodnius prolixus y el 48,2 % a Triatoma maculata, con desarrollo ontogénico hacia el adulto. Las pruebas parasitológicas y moleculares, su morfología típica y la infección en el modelo murino revelaron la presencia de T. cruzi en 54,8 % en promedio, para ambas especies de triatominos, con circulación del genotipo TcI de T. cruzi. Conclusiónes Se reportó para el estado Anzoátegui en Venezuela, la infestación de palma corozo con Rhodnius prolixus y Triatoma maculata y la presencia de subpoblaciones TcI de T. cruzi, siendo esta palma el hábitat peridomiciliar del binomio triatominos-T. cruzi y posible bioindicador de riesgo de infección para poblaciones humanas circunvecinas.

ABSTRACT Introduction To know the natural infestation by triatominae and their infection by Trypanosoma cruzi (T. cruzi) in Acrocomia Aculeata (A. aculeata) or coyol palm in the state of Anzoátegui, Venezuela. Materials and Methods Triatominic infestation and its infection by T. cruzi was studied in non-affected A. aculeata in phytosanitary campaigns. The presence of the parasite was determined by microscopy and PCR-kDNA, and its characterization was made by means of molecular markers. Results Fourteen palm trees with triatominic infestation were found; 48.8% of the individuals corresponded to Rhodnius prolixus and 48.2% to Maculata Triatoma, with ontogenetic development towards adult. The parasitology and molecular tests, their typical morphology and the infection in the murine model revealed the presence of T. cruzi in an average of 54,8%, for both species of triatominae, with circulation of the TcI genotype of T. cruzi. Conclusions The infestation of coyol palm trees with Rhodnius prolixus and Maculata Triatoma was reported for the state of Anzoátegui in Venezuela, as well as the presence of TcI sub-populations of T. cruzi, being this palm tree the peridomicilar habitat of the triatominae-T. cruzi binomial and possible bioindicador of risk of infection for surrounding human populations.

Estandarización de la técnica de PCR para la detección de ADN de Leishmanía sp. en muestras de sangre de caninos / Standardization of the PCR technique for detection of Leishmania sp. DNA in canine blood samples

La leishmaniasis es una enfermedad con diversidad clínica y epidemiológica, producida por varias especies de protozoarios parásitos del género Leishmania. Estos parásitos infectan una amplia variedad de hospedadores mamíferos y son transmitidos por insectos del género Lutzomyia, en nuestro país. Los caninos han sido implicados como posibles reservorios del parásito. Para el diagnóstico de leishmaniasis se utilizan técnicas parasitológicas que generalmente tienen baja sensibilidad e inmunológicas, con pobre especificidad. Debido a las limitaciones en el diagnóstico, y lo difícil de la obtención, transporte y almacenamiento de las muestras, en este trabajo se planteó estandarizar de una técnica de PCR anidada (Leishmania nested PCR, Ln-PCR) para la detección de ADN de Leishmania sp. en muestras de sangre de caninos colectadas en papel de filtro. Para ello se titularon las concentraciones de reactivos de la PCR para la amplificación del ADN del parásito y se determinó la sensibilidad analítica y la especificidad de la técnica. Se evaluaron 36 muestras de sangre de caninos (6 infectados y 30 no infectados). Las condiciones óptimas de reacción fueron 0,2 mM de dNTPs, 0,4 µM de cada cebador y 1 U de Taq polimerasa. La sensibilidad analítica de Ln-PCR fue de 10 fg y la especificidad fue de 100% en la detección de ADN de Leishmania sp., ya que no se observó amplificación con ADN de otros parásitos, ni con ADN humano, ni de perro. De las muestras de caninos evaluadas los seis controles infectados todos amplificaron por la PCR, mientras que los 30 no infectados, en ninguno se observó amplificación. La extracción de ADN de muestras de sangre colectadas en papel de filtro fue eficiente para la amplificación por la PCR, técnica que puede ser muy útil para el diagnóstico de leishmaniasis en animales y su implicación como posibles reservorios.

Leishmaniasis is a disease with clinical and epidemiological diversity, caused by several species of protozoan parasites of the genus Leishmania. These parasites infect a wide variety of mammalian hosts, and are transmitted by insects of the genus Lutzomyia in our country. Canines have been implicated as potential reservoirs of the parasite. For the diagnosis of leishmaniasis, parasitological techniques generally with low sensitivity and immunological techniques, with poor specificity, are used. Because of limitations in the diagnosis, and the difficulty to obtain, transport, and store samples, the aim of this research was to standardize a Leishmania nested PCR test (Ln-PCR), for the detection of Leishmania sp. DNA in blood samples from dogs collected in filter paper. For that purpose, concentrations of the PCR reagent for DNA parasite amplification were titrated and the analytical sensitivity and specificity of the technique were determined. A total of 36 canine blood samples (6 infected and 30 uninfected) were evaluated.  The optimal reaction conditions were: 0.2 mM dNTPs; 0.4 µM of each primer; and 1 U of Taq polymerase. The analytical sensitivity of the Ln-PCR was 10 fg and the specificity was 100% in detecting Leishmania sp. DNA, since no amplification was observed with DNA from other parasites, human DNA or canine DNA. The six samples from infected canines evaluated amplified Leishmania sp. DNA by PCR, whereas in none of the 30 samples from uninfected canines the amplification was observed. The DNA extraction from blood samples collected in filter paper was efficient for the PCR amplification, a technique that can be very useful for the diagnosis of leishmaniasis in animals and their involvement as potential reservoirs.

Leishmaniasis.

dogs.

diagnosis.

PCR.

Achatina fulica Bowdich, 1822 (Mollusca, Gastropoda, Achatinidae) carrier of Helminthes, Protozoa and Bacteria in northeast Venezuela / Achatina fulica Bowdich, 1822 (Mollusca, Gastropoda, Achatinidae) hospedador de helmintos, protozoarios y bacterias en el noreste de Venezuela

Por cuanto el molusco Achatina fulica nativo del África es vector de helmintos, pero su relación con protozoarios y bacterias es poco conocida, decidimos estudiar las excretas de 1.200 ejemplares capturados en los estados Anzoátegui, Monagas, Sucre y Nueva Esparta, del noreste de Venezuela. Su moco pedal y heces mostraron infección por los protozoarios Chilomastix spp., Trichomonas spp., Giardia spp., Balantidium spp., Entamoeba spp., Iodamoeba spp., Blastocystis spp. Y por los helmintos de los grupos Ascarioidea, Trichuroidea, Ancylostomatidae y Cestoda. El moco céfalopodal mostró únicamente larvas de Rhabditida. Las bacterias Citrobacter freundii, Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, K. azaenae, Aeromonas hydrophila, Acinetobacter baumannii, Pseudomonas aeruginosa, Campylobacter spp. infectaron a las tres excretas. Los mecanismos de transmisión y la composición de las excretas, como nichos fisiológicamente apropiados para los organismos encontrados, son discutidos en relación con el riesgo epidemiológico que el molusco representa en salud pública y veterinaria.

The mollusk Achatina fulica, native to Eastern Equatorial Africa, has been incriminated as a carrier or vector of helminthes. Nevertheless, information in the literature as regards its status as a carrier for bacteria is scarce, and we could find no reference at all for its relation to protozoa. We studied microscopically the excreta from 1200 snails captured in Anzoátegui, Monagas, Sucre and Nueva Esparta states, in northeast Venezuela. The pedal mucus and feces were infected by the protozoa Chilomastix spp., Trichomonas spp., Giardia spp., Balantidium spp., Entamoeba spp., Iodamoeba spp., Blastocystis spp., as well as helminthes of Ascarioidea, Trichuroidea, Ancylostomatidae and Cestoda groups. The only helminthes found in the cephalopodal mucus were Rhabditida larvae. The three excreta were also infected by the bacteria: Citrobacter freundii, Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, K. azaenae, Aeromonas hydrophila, Acinetobacter baumannii, Pseudomonas aeruginosa, Campylobacter spp. Risk of infection and transmission mechanisms as well as the composition of the excreta as appropriate physiological niches for the organisms mentioned, are discussed with regard to the epidemiological importance of this snail for in human and veterinary health.

Comparación de dos protocolos de extracción de ADN de Trypanosoma cruzi cultivados en medio axénico / Comparing two protocols of DNA extraction of Trypanosoma cruzi cultured in axenic medium

Objetivos. Comparar dos protocolos de extracción de ADN de Trypanosoma cruzi para su uso en la amplificación de ADN de minicírculos de kinetoplasto (ADNk) mediante la técnica de Reacción en Cadena de Polimerasa (PCR). Materiales y métodos. Se cultivaron epimastigotas de T. cruzi en condiciones exénicas obteniéndose masas entre 1,5 hasta 100 x 10(6) parásitos. A partir de estas se procedió a la extracción de ADN mediante dos protocolos: extracción con solventes orgánicos (fenol/cloroformo), y empleo de resina (Chelex®100), a partir de los diferentes sedimentos parasitarios. La concentración y pureza del ADN se determinó por espectrofotometría y la integridad se evaluó mediante electroforesis en geles de agarosa. Se realizó el análisis de varianza y comparaciones de medias mediante la prueba de Tukey, utilizando el software Statistix 8.0. Resultados. Se realizaron diez extracciones de ADN de cada una de las diferentes cantidades de parásitos sedimentados. En la extracción de ADN con la resina Chelex®100 se obtuvo mayor rendimiento, pero menor pureza e integridad respecto a la extracción con solventes orgánicos. Sin embargo, permitió la amplificación del producto de 330 pb de ADNk de T. cruzi. Conclusiones. Aun cuando la técnica de Chelex®100 proporcionó menor pureza e integridad del ADN, permitió la amplificación con éxito de ADNk por PCR, evitando el uso de técnicas laboriosas y solventes orgánicos tóxicos.

Objectives. To compare two extraction protocols of Trypanosoma cruzi DNA for use in DNA amplification of kinetoplast minicircles (kDNA) through the technique of Polymerase Chain Reaction (PCR). Materials and methods. Epimastigotes of T. cruzi were cultured in axenic conditions and masses from 1.5 to 100 x 106 parasites were obtained. DNA extraction was performed using two protocols: extraction with organic solvents (phenol/chloroform), and with resin (Chelex®100), from different parasitic sediments. Concentration and purity of DNA was determined by spectrophotometry, and integrity was assessed by agarose gel electrophoresis. Analysis of variance and comparisons of means were performed through Tukey’s test, using the Statistix 8.0 software. Results. Ten DNA extractions were done of each one of the different amounts of parasitic sediments. In the DNA extraction with Chelex®100 resin, a higher performance was obtained but a lower purity and integrity compared to the extraction with organic solvents. However, it allowed a product amplification of 330 bp of T. cruzi kDNA. Conclusions. Although the technique of Chelex®100 provided less purity and integrity of DNA, it allowed a successful amplification of kDNA by PCR, avoiding the use of laborious techniques and toxic organic solvents.

Estandarización de la técnica de aglutinación directa para el inmunodiagnóstico de la enfermedad de Chagas / Standardization of a direct agglutination test for the immunodiagnosis of Chagas disease

Introducción. La enfermedad de Chagas es causada por el parásito Trypanosoma cruzi y su diagnóstico inmunológico se basa principalmente en la detección de anticuerpos contra T. cruzi mediante pruebas tales como ELISA, inmunofluorescencia indirecta (IFI) y hemaglutinación indirecta (HAI). Esta última tiene el inconveniente de requerir la preparación de eritrocitos de carnero, difíciles de obtener y de poca duración. Sin embargo, existen pruebas alternativas, como la técnica de aglutinación directa. Objetivo. Estandarizar la técnica de aglutinación directa para el diagnóstico de la enfermedad de Chagas. Materiales y métodos. Se prepararon parásitos epimastigotes de T. cruzi mediante dos protocolos, con tratamiento con tripsina y sin él. Los parásitos se colorearon, y se determinaron las condiciones óptimas de concentración parasitaria y diluciones de suero. Se utilizaron sueros de pacientes con enfermedad de Chagas, de individuos sanos y con otras parasitosis. Resultados. La concentración parasitaria óptima fue de 500 x10 6 parásitos/ml, utilizando parásitos coloreados y sin tratamiento con tripsina. Las diluciones de suero óptimas fueron de 1/25, 1/50 y1/100, y el punto de corte, la dilución de 1/50. La técnica estandarizada mostró índices diagnósticos de sensibilidad de 94,3 % (IC 95% 79,5-99,0) y de especificidad de 96,3 % (IC 95% 88,8-99,0); se encontró reacción cruzada en tres sueros de individuos con leishmaniasis visceral, con valores pronósticos positivo y negativo de 91,7 % (IC 95% 76,4-97,8) y de 97,5 % (IC 95% 90,4-99,6), respectivamente. Se compararon los resultados con los obtenidos por HAI, ELISA e IFI y la concordancia fue de 96 % con un índice kappa de 0,90 (IC 95% 0,81-0,99). Conclusión. La técnica de aglutinación directa estandarizada podría ser útil para el inmunodiagnóstico de la enfermedad de Chagas.

Introduction: Chagas´ disease is caused by the parasite Trypanosoma cruzi and its immunological diagnosis is mainly based on the detection of antibodies against T. cruzi using tests such as the ELISA, the indirect fluorescence antibody test (IFAT) and the indirect hemagglutination test (IHAT). The main disadvantage of the IHAT is the need to prepare sheep erythrocytes, whose availability is limited and they have a short duration once prepared. However, there are alternative tests, such as the direct agglutination test (DAT). Objective: To standardize the direct agglutination test for the diagnosis of Chagas disease. Materials and methods: Trypanosoma cruzi epimastigotes were prepared using two protocols, with and without trypsin treatment. The parasites were stained and optimal conditions for parasitic concentration and serum dilutions were determined. We evaluated the technique using sera from patients with Chagas disease, from healthy individuals and from individuals with other parasitic diseases. Results: The optimal parasitic concentration was 500 x 10 6 parasites/ml using stained parasites without trypsin treatment. The optimal serum dilutions were 1/25, 1/50 y 1/100 and the cut-off point was the 1/50 dilution. The diagnostic indices for the standardized technique were as follows: Sensitivity, 94.3% (95% CI: 79.5-99.0) and specificity, 96.3% (95% CI: 88.8-99.0), with positive and negative predictive values ?? of 91.7% (95% CI: 76.4-97.8) and 97.5% (95% CI: 90.4-99.6), respectively. Cross-reaction was observed only in three sera from individuals with visceral leishmaniasis. The results were compared with those obtained by IHA, ELISA, and IFA, and the concordance rate was 96% and the kappa index, 0.90 (95% CI: 0.81-0.99). Conclusion: The standardized direct agglutination test could be useful for immunodiagnosis of Chagas disease.

Primer registro de triatóminos naturalmente infectados por Trypanosoma cruzi en el estado Bolívar, Venezuela / First record of naturally infected triatomines with trypanosoma cruzi, Bolivar state, Venezuela

La enfermedad de chagas o tripanosomiasis americana está adquiriendo cada vez mayor importancia en la región amazónica de Venezuela, en la cual hasta ahora se carecía de información de la presencia de trypanosoma cruzi en triatóminos, reservorios y humanos, particularmente para el estado Bolívar, el estado de mayor superficie del país, situado al sur del río Orinoco. Cuatro ejemplares de triatoma maculata fueron recolectados en el peridomicilio de la comunidad de Maniapure, en el municipio Cedeño. En dos de los ejemplares se determinó la infección natural por trypanosoma cruzi al examen al fresco de heces con presencia de tripomastigotos metacíclicos infectantes. Los parásitos fueron inoculados en modelos murinos y aislados en cultivos para su caracterización molecular. Se confirmó el diagnóstico de este parásito por pruebas parasitológicas y moleculares, caracterizándose los aislados como TcI. La importancia de estos hallazgos pioneros podría motivar el estudio de la transmisión vectorial de la enfermedad de chagas en este estado catalogado como no endémico.

American trypanosomiasis or chagas disease is becoming increasingly important in the Amazon region of Venezuela, in which up to now information was lacking of the presence of trypanosoma cruzi in triatomins, reservoirs and humans, particularly for Bolivar state, the state with the largest territory of the country, located in the south of the Orinoco river. Four specimens of triatoma maculata were collected in the peri-domiciliar area of the community of Maniapure, in the Cedeño municipality. Two of these individuals were found naturally infected with trypanosoma cruzi upon examination of fresh stool with presence of metacyclic trypomastigotes. Parasites were inoculated in murine models and isolated for molecular characterization. Parasite isolates were molecularly characterized as TcI. The importance of these pioneering findings should motivate the study of the vector or oral transmission of Chagas disease in this non endemic State of Venezuela.

Panstrongylus rufotuberculatus (Hemiptera, Reduviidae, Triatominae) infectado con Trypanosoma cruzi en el estado Anzoátegui (Venezuela) / Panstrongylus rufotuberculatus (Hemiptera, Reduviidae, Triatominae) infected with Trypanosoma cruzi in the state of Anzoátegui (Venezuela) Antonio Morocoima

En el caserío rural Mundo Nuevo, municipio Pedro María Freites, estado Anzoátegui (Venezuela) se capturaron en la pared externa de una vivienda cuatro ejemplares adultos de Panstrongylus rufotuberculatus (Champion, 1899) (Hemiptera, Reduviidae, Triatominae), uno de los cuales mostró infección por Trypanosoma cruzi, evidenciada por examen directo del contenido intestinal. El comportamiento del aislado en ratones NMRI presentó parasitismo tisular en 47% de 12 tejidos estudiados. La especie T. cruzi fue confirmada por PCR-ADNk y PCR ADN satélite. Se demuestra por primera vez la presencia de esta especie silvestre en el estado Anzoátegui.

In the rural village Mundo Nuevo, municipality Pedro Maria Freites, Anzoátegui state (Venezuela), four adults of Panstrongylus rufotuberculatus (Champion, 1899) (Hemiptera, Reduviidae, Triatominae) were captured in the external wall of a human dwelling. One triatomine was infected by Trypanosoma cruzi. The isolate inoculated in NMRI mice showed parasites in 47% of 11 studied tissues. T.cruzi was confirmed by PCR-kDNA and PCR satellite DNA.The presence of this species represents, to our knowledge,the first report for this state.

Simpatría de triatominos (Reduviidae) y escorpiones (Buthidae) en Cocos nucifera y Acrocomia aculeata (Aracaceae) de Anzoátegui, Venezuela / Simpatry of triatomines (Reduviidae) and scorpions (Buthidae) in Cocos nucifera and Acrocomia aculeata (Aracaceae) in Anzoátegui State, Venezuela

El hallazgo de Rhodnius prolixus y Triatoma maculata (Hemiptera, Reduviidae, Triatominae) con Rhopalurus laticauda (Scorpiones, Buthidae) en palmas permitió ampliar los conocimientos sobre la ecología de estos artrópodos. Para ello se estudió la presencia de ambos artrópodos en Cocos nucifera - palma de coco (n = 14) y Acrocomia aculeata - palma corozo (n = 14), de peridomicilios del municipio Bolívar, noreste del estado Anzoátegui, Venezuela. Se contabilizó, en 28 palmeras, un total de 114 ejemplares de R. laticauda, 223 de T. maculata (con 62,8% de infección con Trypanosoma cruzi) y 328 de R. prolixus (con 88,1% de infección con T. cruzi). Los resultados demostraron simpatría de ambos grupos zoológicos en los ecotopos estudiados, con mayor abundancia de T. maculata y R. prolixus en C. nucifera (P = 0,00001) y de R. laticauda en A. aculeata (P = 0,006). La presencia de triatominos infectados con T. cruzi en C. nucifera en el noreste de Anzoátegui, es de significación epidemiológica por la estrecha relación de esta palma con el hábitat antrópico, a lo cual se suma el papel similar para A. aculeata como palma de menor uso en la vivienda rural campesina. Correspondido con la simpatría de estos artrópodos, es posible que R. laticauda pueda actuar como depredador sobre los triatominos.

The finding of Rhodnius prolixus and Triatoma maculata (Hemiptera, Reduviidae, Triatominae) together with Rhopalurus laticauda (Scorpiones, Buthidae) in palms enabled us to widen our knowledge of the ecology of these arthropods. The presence of these arthropods in peridomicilar Cocos nucifera - coconut palm (n = 14) and Acrocomia aculeata - grugu palm (n = 14), in Bolívar municipality, northeast Anzoátegui state, Venezuela, was studied. A total of 114 R. laticauda, 223 T. maculata (62.8% infected with Trypanosoma cruzi) and 328 R. prolixus (88.1% infected with T. cruzi) insects were counted in 28 palms. The results showed that the zoological groups were sympatric in the ecotopes studied, although T. maculata and R. prolixus were more abundant in C. nucifera (P = 0.00001) and R. laticauda in A. aculeata (P = 0.006). The presence of triatomes infected with T. cruzi in C. nucifera in northeastern Anzoátegui is epidemiologically significant due to the strong association of this palm to human habitation, as well as the role played by A. aculeata as a less used palm for rural dwellings. The sympatry of these arthropods leads us to suggest that R. laticauda could act as a predator of these triatomes.

Eratyrus mucronatus (Stal, 1859) (Hemiptera, Reduviidae, Triatominae): primer registro para el estado Anzoátegui (Venezuela) / Eratyrus mucronatus (Stal, 1859): first report for Anzoátegui state (Venezuela)

Señalamos la presencia de Eratyrus mucronatus (Stal, 1859) (Hemiptera, Reduviidae, Triatominae) infectado con Trypanosoma cruzi, en un área urbana peridomiciliar (Universidad de Oriente, Núcleo de Anzoátegui, estado Anzoátegui, Venezuela) lo que representa, en nuestro conocimiento, el primer reporte de la especie para este estado. Se discute la importancia epidemiológica de este hallazgo.

The authors report the presence of Eratyrus mucronatus (Stal, 1859) (Hemiptera, Reduviidae, Triatominae) infected with Trypanosoma cruzi, in an urban peridomiciliar area (Universidad de Oriente, Núcleo de Anzoátegui, Anzoátegui state, Venezuela), what represents, to our knowledge, the first report of the species for this state. The epidemiological importance of this finding is emphasized.

Una revisión sobre reservorios de Trypanosoma (Schizotrypanum) cruzi (Chagas, 1909), agente etiológico de la enfermedad de Chagas / A review of reservoirs of Trypanosoma (Schizotrypanum) cruzi (Chagas, 1909), the etiologic agent of Chagas Disease

Las parasitosis, circunscritas a grupos animales, como la tripanosomiasis americana o Enfermedad de Chagas, son primariamente enzootias o zoonosis, en las cuales el hombre, como ultimo eslabón de la escala zoológica, participa como un hospedador accidental dentro de la cadena de transmisión. Una de las grandes necesidades planteadas en el estudio de estas parasitosis, es el conocer los hospedadores en cada ecosistema y su rol como reservorios. En la presente revisión, se expondrán algunos puntos tratados por diferentes autores en relación a hospedadores mamíferos primarios o secundarios y su conceptualización. Se ha intentado resumir una lista de especies de mamíferos, naturalmente infectados por Trypanosoma cruzi, agente etiológico de la Enfermedad de Chagas, con sus respectivas referencias originales

Animal parasitoses, such as American trypanosomiasis or Chagas Disease, are principally enzootic diseases or zoonoses, in which humans, as the last step in the zoological chain, participate as accidental hosts in the transmission cycle. One of the great needs within the study of these parasitoses is to identify the hosts in each ecosystem where the disease is prevalent and determine their role as reservoirs. In this review, some of the issues and concepts covered by different authors in relation to primary and secondary mammalian hosts are discussed. A list of mammalian species that are naturally infected by Trypanosoma cruzi, the causal agent of Chagas disease, together with the original bibliographical references has been included

Enfermedad de Chagas en el estado Anzoátegui, Venezuela: Registro de un caso agudo y caracterización parasitológica y molecular del aislado / Chagas disease in Anzoategui state, Venezuela: Detection of an acute case and parasitological and molecular characterization of the parasite isolate

Se describe un caso agudo de enfermedad de Chagas en un preescolar de sexo masculino, de 6 años de edad, procedente del caserío Las Lajas, municipio Sotillo, estado Anzoátegui, Venezuela. Clínicamente, a la inspección y palpación, presentó eritema y edema bipalpebral derecho, con adenomegalia y nódulo satélite que sugiere el clásico signo de Romaña. También, presentaba lesión cutánea plana eritematosa entre el borde externo del recto abdominal izquierdo y la cicatriz umbilical, compatible con chagoma de inoculación. Además, se detectó hepatoesplenomegalia y fiebre de 38 y 39ºC. A la auscultación se escuchó soplo mesosistólico paraesternal. El tratamiento con Clindamicina no fue resolutivo, por lo cual se procedió a investigar la presencia del agente causal en sangre, mediante exámenes directos e indirectos, serología y técnicas moleculares. El estudio parasitológico comprobó la presencia de trypanosoma cruzi, que resultó de moderada virulencia en sangre, en modelos murinos, con amplio espectro de órganos invadidos especialmente células musculares de los tres tipos: esqueléticas cardíacas y lisas. El aislado fue compatible con los referentes moleculares del linaje TcI, el de más amplia distribución en Venezuela. Los resultados indican que hay transmisión activa de la enfermedad de chagas en el estado Anzoátegui, lo cual amerita más investigaciones.

An acute case of Chagas disease in a preschool male, 6 years old, from the village of Las Lajas, municipality of Sotillo, state of Anzoátegui, Venezuela, is described. Clinically on the inspection and palpation, he presented right bipalpebral erythema and oedema with a subsequent satellite node, suggesting the classical Romaña sign. He also had a flat erythematous lesion between the outer edge of the left rectus abdominis and the umbilical scar, compatible with a chagoma of inoculation. Hepatoesplenomegaly was also detected. The patient had fever of 38ºC and 39ºC. On auscultation, parasternal mesosistolic blow was heard. As treatment with Clindamycin was not resolving, we decided to investigate the presence of causal agent in blood, by means of direct and indirect methods, serology and molecular techniques. The parasitological study demonstrated the presence of Trypanosoma cruzi, which showed moderate virulence in blood, murine models, with broad spectrum of colonized organs, especially cardiac, skeletal, smooth muscle cells and atypical invasion of kidneys. The molecular characterization of isolates showed a pattern compatible with TcI lineage, the most distributed in Venezuela. These results indicate that active transmission of Chagas disease in the state of Anzoátegui persists and more investigations are required.

Trypanosoma cruzi: behavior of metatrypomastigotes from didelphis marsupialis and panstrongylus geniculatus

Trypanosoma cruzi coloniza las glándulas anales odoríferas de rabipelados o zarigüeyas donde se diferencia a metatripomastigotes que infectan a mamíferos por contaminación, en forma similar a los insectos vectores. Tripomastigotes metacíclicos obtenidos de las glándulas anales de Didelphis marsupialis y del intestino de Panstrongylus geniculatus, naturalmente infectados y capturados en áreas urbanas del valle de Caracas (Venezuela), fueron inoculados por vía intraperitoneal (i.p) en ratones NMRI para comparar su infectividad, tropismo tisular y virulencia. Metatripomastigotes de ambas fuentes produjeron 100 por ciento de infección y de mortalidad, con histotropismo en corazón, músculo esquelético, páncreas, colon, hígado y pulmón; sin embargo, tripomastigotes metacíclicos glandulares causaron niveles mas elevados de proliferación parasitaria en los tejidos. Ratones inoculados con metacíclicos de glándulas anales de rabipelados mostraron, adicionalmente, tropismo hacia la musculatura lisa de testículo, epidídimo, conducto deferente y vesícula seminal. Rabipelados controles inoculados i.p. con tripomastigotes luminales desarrollaron parásitos sanguíneos y glandulares; estos últimos inoculados i.p. en ratones produjeron parasitemias letales. Los resultados fueron discutidos en relación con la elevada variabilidad de las poblaciones de T. cruzi, la cual ha sido señalada como respuesta a diferentes y simultáneos ciclos de transmisión que se producen en ecótopos con particularidades propias. La importancia epidemiológica de la presencia de estadios metacíclicos de T. cruzi en las glándulas anales de rabipelados de áreas rurales y urbanas es enfatizada

Experimental transmission of Trypanosoma cruzi through the genitalia of albino mice

Trypanosoma cruzi is usually transmitted by contact with the excreta of infected Triatominae; among non-vectorial infections, direct transmission through coitus has been proposed. We investigated this possibility by instilling, through the external meatus of the vagina and the penis of previously anesthetized NMRI albino mice, blood of mice infected with strains isolated from Didelphis marsupialis (opossum, strain CO57), Rattus rattus (rat, strain CO22) and human (strain EP). Some animals were allowed to copulate the same day of the instillation. In other experiments, the strains were inoculated in the scrotum. To determine the effect of immunosuppression, some mice were treated with cyclophosphamide 30 days post-instillation. Controls were instilled orally and ocularly. Vaginal instillation with strain CO22 produced systemic infection with tropism to the heart, skeletal muscle, skin, duodenum, pancreas, ovary and sternum. Scrotal inoculation with strain EP likewise invaded liver, spleen, lung, lymph nodes and urogenital organs; while strain CO57 invaded skeletal and cardiac muscle, pancreas, testis, and vas deferens. Penile infection with strain CO22 was detected by xenodiagnosis. Immunosuppression did not increase parasitemia of vaginally infected mice or controls. Mating did not produce infection. Our results show that contact of blood trypomastigotes of T. cruzi with genital mucosa can produce blood and tissue infections. These results are discussed in relation to reports of frequent experimental tropism of T. cruzi toward urogenital organs

Synanthropic rodent reservoirs of Trypanosoma (Schizotrypanum) cruzi in the Valley of Caracas, Venezuela

Exame direto de sangue e xenodiagnostico de 47 roedores sinantropicos (Rattus rattus, R. norvegicus, Mus musculus) capturados no Vale de Caracas, Venezuela, revelaram infecçäo por tripanosoma em 12 R. rattus, 10 com T. lewisi e 2 com T. cruzi. Dos ultimos o curso de parasitemia, o pleomorfismo dos tripomastigotas na corrente sanguinea, tropismo tissular em ratos e camundongos natural e experimentalmente infectados, mortalidade dos hospedeiros, morfologia dos parasitas fecais em Rhodnius prolixus usados para xenodiagnóstico e infectividade das fezes do "barbeiro" para camundongos NMRI, foram todos caracteristicos de Trypanosoma (Schizotrypanum) cruzi...