Study of tissue inflammatory response in different mice strains infected by dematiaceous fungi Fonsecaea pedrosoi

Abstract: Background: Diseases caused by melanized fungi include mycetoma, chromoblastomycosis and phaeohyphomycosis. This broad clinical spectrum depends on the dynamic interactions between etiologic agent and host. The immune status of the host influences on the development of the disease, as, an exemple. phaeohyphomicosis is more frequently observed in immunocompromised patients. Objectives: Examine the histological inflammatory response induced by Fonsecaea pedrosoi in several different strains of mice (BALB/c, C57BL/6, Nude and SCID, and reconstituted Nude). Methods: Fonsecaea pedrosoi was cultivated on agar gel and a fragment of this gel was implanted subcutaneously in the abdominal region of female adult mice. After infection has been obtained, tissue fragment was studied histopathologically. Results: There were significant changes across the strains, with the nodular lesion more persistent in Nude and SCID mice, whereas in immunocompetent mice the lesion progressed to ulceration and healing. The histopathological analysis showed a significant acute inflammatory reaction which consisted mainly of neutrophils in the initial phase that was subsequently followed by a tuberculoid type granuloma in immunocompetent mice. Study limitations: There is no a suitable animal model for chromoblastomycosis. Conclusions: The neutrophilic infiltration had an important role in the containment of infection to prevent fungal spreading, including in immunodeficient mice. The fungal elimination was dependent on T lymphocytes. The re-exposure of C57BL/6 mice to Fonsecaea pedrosoi caused a delay in resolving the infection, and appearance of muriform cells, which may indicate that re-exposure to fungi, might lead to chronicity of infection.

B-1 cell: the precursor of a novel mononuclear phagocyte with immuno-regulatory properties

Characterization of the origin, properties, functions and fate of cells is a fundamental task for the understanding of physiological and pathological phenomena. Despite the bulk of knowledge concerning the diverse characteristics of mammalian cells, some of them, such as B-1 cells, are still poorly understood. Here we report the results obtained in our laboratory on these cells in the last 10 years. After showing that B-1 cells could be cultured and amplified in vitro, a series of experiments were performed with these cells. They showed that B1 cells reside mostly in the peritoneal and pleural cavities, migrate to distant inflammatory foci, coalesce to form giant cells and participate in granuloma formation, both in vitro and in vivo. They are also able to present antigens to immunologically responsive cells and are endowed with regulatory properties. Further, we have also shown that these cells facilitate different types of infection as well as tumor growth and spreading. These data are presently reviewed pointing to a pivotal role that these cells may play in innate and acquired immunity.

A caracterização da origem, propriedades, funções e destino das células representam objetivo fundamental para a compreensão dos fenômenos fisiológicos e patológicos. Apesar da grande quantidade de conhecimentos relativos às diversas características das células de mamíferos, muitas delas, inclusive células B-1, são pouco entendidas. Depois de mostrar que as células B-1 podem ser cultivadas e amplificadas in vitro, uma série de experimentos visando esclarecer as propriedades dessas células puderam ser feitos em nosso laboratório nos últimos 10 anos. Assim, pudemos demonstrar que células B-1 residem principalmente nas cavidades peritoneal e pleural do camundongo, migram para focos inflamatórios distantes, coalescem para formar células gigantes e participam na formação de granulomas, tanto in vitro como in vivo. São também capazes de apresentar antígenos a células responsivas e são dotadas de propriedades imuno-regulatórias. Mostramos ainda que estas células favorecem diferentes tipos de infecções bem como o crescimento e metastatização tumoral. Esses resultados sugerem que células B-1 devem exercer papel central na imunidade como um todo.

Keloid heterograft in the hamster (mesocricetus auratus) cheek pouch

OBJETIVO: Investigar a integração do transplante heterólogo de quelóide na bolsa jugal do hamster (Mesocricetus auratus). MÉTODOS: A amostragem consiste de 18 hamsters machos, heterogênicos, com 10 a 14 semanas de idade. Fragmentos de quelóide foram obtidos de cicatrizes queloidianas da região mamária de paciente adulta parda. Cada hamster foi enxertado em ambas as bolsas com fragmentos de quelóide, totalizando 36 fragmentos enxertados. Os animais foram distribuídos em 6 grupos para exame dos fragmentos enxertados, com 5, 12, 21, 42, 84 e 168 dias. Uma avaliação macroscópica é realizada comparando a bolsa contendo o fragmento enxertado em cada período com a mesma bolsa no pós-operatório imediato, mediante a comparação de fotografias padronizadas. À microscopia, considera-se a presença de vasos sangüíneos no tecido conjuntivo do fragmento enxertado como critério de integração do mesmo. Outros eventos, como secreção de queratina, presença de infiltrados celulares e aspecto do epitélio e das fibras colágenas do quelóide, também são observados. RESULTADOS: A macroscopia revela intensa vascularização na bolsa até 12 dias de enxertia, e a presença constante de pigmentação castanho-escura nos fragmentos de quelóide enxertados. Na microscopia constata-se a integração dos fragmentos de quelóide pela presença de capilares sangüíneos no tecido conjuntivo. Observa-se, também, a presença de intenso infiltrado celular do tipo inflamatório até 12 dias, a permanência do epitélio do quelóide até 21 dias, e o aparecimento de melanócitos a partir de 42 dias. CONCLUSÃO: A bolsa jugal do hamster representa, a priori, modelo experimental para investigação do quelóide.

Experimental model in hamster (Mesocricetus auratus) to study heterologous graft of scars and cutaneous diseases in plastic surgery

O hamster sírio dourado (Mesocricetus auratus) possui no subepitélio de suas bolsas jugais um "Local de Privilégio Imunológico", permitindo a integração de homo e heteroenxertos. Este artigo descreve as características anatômicas e histológicas desse local, assim como os aspectos relativos as suas propriedades imunológicas. Cita, também, as vantagens desse modelo experimental sobre outros modelos portadores, naturais ou induzidos, de imunodeficiência. Com base nessas vantagens, e também baseado na literatura, tem o intuito de estabelecer esse modelo, mediante a realização de heteroenxertos, como uma outra opção para investigar distúrbios cicatriciais, como o quelóide, e doenças de interesse em Cirurgia Plástica, como lesões cutâneas benignas e neoplasias malignas como carcinomas e melanoma cutâneo. Tece, ainda, considerações sobre perspectivas de aplicações desse modelo, ainda bastante desconhecido entre a classe médica brasileira.

Hamster (Mesocricetus auratus) cheek pouch as an experimental model to investigate human skin and keloid heterologous graft

Descrever a integração dos enxertos de pele total humana e quelóide na bolsa jugal do hamster (Mesocricetus auratus), cujo subepitélio é, naturalmente, um "Local de Privilégio Imunológico". Foram transplantados fragmentos, de pele humana normal e de quelóide, obtidos da região mamária de pacientes pardas, no subepitélio da bolsa jugal in situ. O procedimento operatório, e de preparo das bolsas enxertadas para exame microscópico em vários períodos de transplante, foi padronizado. Verificou-se a integração dos fragmentos enxertados de pele humana e de quelóide em períodos tardios (84 dias), uma vez que a avaliação microscópica revelou a presença de vasos sangüíneos no tecido conjuntivo dos fragmentos enxertados. Foi também possível observar, nos fragmentos enxertados, o epitélio, o aparecimento de infiltrado celular incipiente, secreção epitelial de queratina, presença de melanócitos e alterações tardias no aspecto das fibras colágenas do tecido conjuntivo. Os resultados, em conjunto, permitem estabelecer o subepitélio da bolsa jugal do hamster como modelo experimental para investigação da fisiologia de tranplantes heterólogos de pele total humana e quelóide com epitélio.

Experimental model in hamster (Mesocricetus auratus) to study heterologous graft of scars and cutaneous diseases in plastic surgery

Syrian golden hamster (Mesocricetus auratus) has in its cheek pouches sub-epithelium an "Immunologically Privileged Site" which allows the integration of homo- and heterologous graft. This paper describes some anatomical and histological characteristics of that site, as well as analyzes aspects related with its immune properties. It also focuses the advantages of this experimental model over other models which are natural or induced carriers of immunodeficiency. Based on both these advantages and literature, this study aims to establish this model, through the performance of heterologous graft, as another option for the investigation of scar disturbances, as keloids and other diseases which may interest Plastic Surgery, as benign cutaneous lesions, and malignant neoplasias such as skin carcinomas and melanomas. The work also addresses perspectives for using this model, which still is a source scarcely known by Brazilian medical class.

O hamster sírio dourado (Mesocricetus auratus) possui no subepitélio de suas bolsas jugais um "Local de Privilégio Imunológico", permitindo a integração de homo e heteroenxertos. Este artigo descreve as características anatômicas e histológicas desse local, assim como os aspectos relativos as suas propriedades imunológicas. Cita, também, as vantagens desse modelo experimental sobre outros modelos portadores, naturais ou induzidos, de imunodeficiência. Com base nessas vantagens, e também baseado na literatura, tem o intuito de estabelecer esse modelo, mediante a realização de heteroenxertos, como uma outra opção para investigar distúrbios cicatriciais, como o quelóide, e doenças de interesse em Cirurgia Plástica, como lesões cutâneas benignas e neoplasias malignas como carcinomas e melanoma cutâneo. Tece, ainda, considerações sobre perspectivas de aplicações desse modelo, ainda bastante desconhecido entre a classe médica brasileira.

Hamster (Mesocricetus auratus) cheek pouch as an experimental model to investigate human skin and keloid heterologous graft

To describe the integration process of grafts of total human skin and keloid in hamster (Mesocricetus auratus) cheek pouch, whose sub-epithelium is naturally an "Immunologically Privileged Site". Fragments of human normal skin and keloid from the breast region of mulatto female patients were transplanted into the cheek pouch subepithelium in situ. Surgical procedure and grafted pouches for microscopic exam at several time points of the transplantation were standardized. The integration of grafted fragments of human skin and keloid was seen in late periods (84 days) since the microscopic assessment showed the presence of blood vases within the conjunctive tissue of grafted fragments. It was also possible to see among the grafted fragments the epithelium, the appearing of early cellular infiltrated, epithelial secretion of keratin, the presence of melanocytes, and delayed changes on the aspect of collagen fibers of conjunctive tissue. Pooled results allow to define hamster cheek pouch sub-epithelium as an experimental model to investigating heterologous graft physiology of human total skin and keloid with epithelium.

Descrever a integração dos enxertos de pele total humana e quelóide na bolsa jugal do hamster (Mesocricetus auratus), cujo subepitélio é, naturalmente, um "Local de Privilégio Imunológico". Foram transplantados fragmentos, de pele humana normal e de quelóide, obtidos da região mamária de pacientes pardas, no subepitélio da bolsa jugal in situ. O procedimento operatório, e de preparo das bolsas enxertadas para exame microscópico em vários períodos de transplante, foi padronizado. Verificou-se a integração dos fragmentos enxertados de pele humana e de quelóide em períodos tardios (84 dias), uma vez que a avaliação microscópica revelou a presença de vasos sangüíneos no tecido conjuntivo dos fragmentos enxertados. Foi também possível observar, nos fragmentos enxertados, o epitélio, o aparecimento de infiltrado celular incipiente, secreção epitelial de queratina, presença de melanócitos e alterações tardias no aspecto das fibras colágenas do tecido conjuntivo. Os resultados, em conjunto, permitem estabelecer o subepitélio da bolsa jugal do hamster como modelo experimental para investigação da fisiologia de tranplantes heterólogos de pele total humana e quelóide com epitélio.

Integraçäo do enxerto heterólogo de pele humana no subepitélio da bolsa jugal do hamster (Mesocricetus auratus) / Integration of human skin heterologous graft into hamster (Mesocricetus auratus) cheek pouch sub-epithelium

OBJETIVO: Descrever a integraçäo de enxertos de pele total humana no subepitélio da bolsa jugal do hamster (Mesocricetus auratus). MÉTODOS: A amostragem consistiu de 18 hamsters machos, exogâmicos, com 10 a 14 semanas de idade. Fragmentos de pele humana normal foram obtidos de pele excedente de mastoplastia redutora de paciente parda. Cada hamster foi enxertado em ambas as bolsas com fragmentos de pele, perfazendo um total de 36 fragmentos enxertados. Os animais foram distribuídos, em 6 grupos, para exame dos fragmentos enxertados com 5, 12, 21, 42, 84 e 168 dias. Uma avaliaçäo macroscópica foi realizada comparando a bolsa contendo o fragmento enxertado em cada período com a mesma bolsa no pós-operatório imediato, mediante fotografias padronizadas. Na avaliaçäo microscópica foi adotado como critério de integraçäo a presença de vasos sangüíneos na derme dos enxertos. Observou-se também a presença de queratina, melanócitos, infiltrado celular e aspecto do tecido conjuntivo. RESULTADOS: Na avaliaçäo macroscópica foi observada uma reaçäo vascular em torno dos fragmentos até 12 dias do implante, e a presença de pigmentaçäo castanho-escura a partir de 42 dias. A microscopia, integraram-se 80,64 por cento dos fragmentos enxertados, inclusive no grupo de 168 dias. Observou-se infiltrado celular inflamatório até 12 dias, a presença de melanócitos a partir de 42 dias e uma hialinizaçäo do tecido conjuntivo após 84 dias. CONCLUSÕES: Fragmentos de pele humana integram-se no tecido celular subcutâneo da bolsa jugal do hamster, mantêm-se vascularizados por 168 dias, e conservam o epitélio íntegro até 21 dias. O subepitélio da bolsa representa modelo experimental de investigaçäo da fisiologia de pele humana ex vivo

Minisuíno (minipig) na pesquisa biomédica experimental: o Minipig br1 / Miniature swine (minipig) in biomedical experimental research: the Minipig br1

Diferentes espécies de animais vertebrados e invertebrados têm sido usados em investigaçäo biomédica experimental. Neste trabalho é apresentada uma breve revisäo sobre o uso do suíno em pesquisa biomedica e sobre as similaridades da anatomia, fisiologia, bioquímica e imunologia desta espécie com aquelas do homem. É também revisto o desenvolvimento do minipig nos anos 60 e os sucessos obtidos com este modelo animal nas mais diversas áreas da medicina experimental. Finalmente, säo descritas as características básicas de uma colônia de minipigs desenvolvida pelo autor (Minipig br1). São descritas as condições de alimentaçäo desses animais, como säo mantidos, vacinados e selecionados. Pesam de 10-15 quilos com seis meses de idade e de 30-37 quilos com onze meses. A possível contribuiçäo desse modelo animal para o desenvolvimento da cirurgia experimental e para outras áreas de experimentaçäo animal no país é discutida

Investigaçäo do transplante heterólogo de quelóide na bolsa jugal do hamster (Mesocricetus auratus) / Investigation of keloid heterologous graft into hamster (Mesocricetus auratus) cheek pouch

OBJETIVO: Descrever a integraçäo do transplante heterólogo de quelóide no subepitélio da bolsa jugal do hamster (Mesocricetus auratus). MÉTODOS: A amostragem consiste de 18 hamsters machos, näo isogênicos, com 10 a 14 semanas de idade. Fragmentos de quelóide foram obtidos de cicatrizes queloideanas da regiäo mamária de paciente adulta parda. Cada hamster foi enxertado em ambas as bolsas com fragmentos de quelóide, totalizando 36 fragmentos enxertados. Os animais foram distribuídos, em 6 grupos, para exame dos fragmentos enxertados com 5, 12, 21, 42, 84 e 168 dias. Uma avaliaçäo macroscópica é realizada comparando a bolsa contendo o fragmento enxertado em cada período com a mesma bolsa no pós-operatório imediato, mediante a comparaçäo de fotografias padronizadas. A microscopia, considera-se a presença de vasos sangüíneos no tecido conjuntivo do fragmento enxertado como critério de integraçäo do mesmo. Outros eventos, como secreçäo de queratina, presença de infiltrados celulares e aspecto do epitélio e das fibras colágenas do quelóide, também säo observados. RESULTADOS: A macroscopia revela intensa vascularizaçäo na bolsa até 12 dias de enxertia, e a presença constante de pigmentaçäo castanho-escura nos fragmentos de quelóide enxertados. Na microscopia constata-se a integraçäo dos fragmentos de quelóide pela presença de capilares sangüíneos no tecido conjuntivo. Observa-se, também, a presença de intenso infiltrado celular do tipo inflamatório até 12 dias, a permanência do epitélio do quelóide até 21 dias, e o aparecimento de melanócitos a partir de 42 dias. CONCLUSÄO: A bolsa jugal do hamster representa, a priori, modelo experimental para investigaçäo do quelóide.

A new murine model of persistent lung eosinophilic inflammation

We summarize here the main characteristics of a novel model of pulmonary hypersensitivity. Mice were immunized with a subcutaneous implant of a fragment of heat solidified chicken egg white and 14 days later challenged with ovalbumin given either by aerosol or by intratracheal instillation. This procedure induces a persistent eosinophilic lung inflammation, a marked bone marrow eosinophilia, and Th2-type isotypic profile with histopathological findings that resemble human asthma. Further, this model is simple to perform, reproducible in different strains of mice, does not require adjuvants nor multiple boosters. Based on these characteristics we propose it as a suitable murine model of allergic eosinophilic lung inflammation.

Evoluçäo das lesöes induzidas por micobactérias BCG e por H37RV em hamster (Mesocricetus auratus) / Evoution of the injuries induced by BCG mycobacterium and by H37RV in hamster (Mesocricetus auratus)

Foram investigados experimentalmente alguns aspectos da patogenia da tuberculose através da inoculaçao de uma cepa de micobactéria de virulência atenuada - BCG e outra cepa altamente virulenta - M. tuberculosis H37 Rv no tecido sub-epitelial do coxim plantar e no tecido sub-epitelial do terço distal da bolsa cervical de hamster, um sítio desprovido de drenagem linfática. A inoculaçao desses agentes determinou diferentes perfis de evoluçao das lesoes, sendo que as lesoes produzidas pelo BCG na pata apresentaram uma tendência de declínio do tamanho após 21 dias e as lesoes produzidas pelo H37 Rv mostraram uma evoluçao progressiva. O mesmo perfil foi observado nas lesoes induzidas na bolsa cervical por ambos os agentes. Contudo, diferentemente do BCG, o H37 Rv disseminou-se para os órgaos internos, causando extensas lesoes. A inoculaçao de BCG ou H37 Rv na pata provocou um aumento de 21 e 68 vezes, respectivamente, o peso do linfonodo satélite em relaçao ao controle, evidenciado a disseminaçao do bacilo por via linfática. Todavia, quando essas amostras foram inoculadas na bolsa, nao determinaram significativas mudanças de peso do linfonodo cervical, mas evidenciou-se a disseminaçao do bacilo virulento por via sangüínea, pelas lesoes produzidas no baço e pulmao.

Virulence of Candida albicans "clones"

Com base em características morfo-fisiológicas e cromossomais foram selecionados 5 clones oriundos de diferentes cepas de Candida albicans. Por meio de inoculaçöes em camundongos investigou-se a atividade letal de blastósporos e de extratos intra e extracelulares das fases leveduriforme (Y) e micelial (M) dos 5 clones. A inoculaçäo de 5.10(4ª) blastósporos de qualquer dos clones estudados näo foi letal para os animais. Por outro lado, a inoculaçäo de 10(6ª) mostrou que o clone Ca 3.7 foram letais para todos os animais, logo após a inoculaçäo. Entretanto, o extrato extracelular da forma M deste clone näo mostrou toxicidade. A análise dos extratos oriundos do clone Ca 5.5 näo apresentaramtoxicidade. A análise dos extratos dos diferentes clones por SDS-PAGE näo mostrou ocorrência de uma nítida associaçäo entre virulência dos clones e a toxicidade dos extratos. A partir do estudo com macrófagos "in vitro" obteve-se para o clone Ca 5.5 o maior índice de fagocitose. Entretanto, a percentagem de macrófagos com células mortas foi a mesma para os clones Ca 3.7 e Ca 5.5

Extra-tissular Schistosoma mansoni egg granulomata in the peritoneal cavity of mice

The presence of Schistosoma mansoni eggs surrounded by inflammatory cells were detected within the peritoneal cavity of experimentally infected mice. The histological and ultrastructural analysis revealed the predominantly macrophagic composition of these structures. The presence of epithelioid cells, macrophages in different stages of activation and the architectural pattern of the cells, characterize these structures as extra-tissular true granulomas. Granulomas much similar to those observed in the peritoneal cavity of infected mice were also detected after the intraperitoneal injection of viable eggs in non-infected mice. Collagen fibers were observed in between the inflammatory cells of granulomas obtained 10 weeks after infection and 48 hours after the injection of viable eggs into the peritoneal cavity. In later times of infection or injection the amount of collagen fibers increases resulting in a typical pattern of healed schistosoma egg granulomas. The possible influence of the immune response on the genesis of the granulomatous reaction as well as the influence of the vascularized connective tissue on this process is discussed.