Purificación y caracterización parcial de una enzima dextranasa a partir de una cepa del hongo del género Penicillium / Purification and partial characterization of a destranase enzyme from a fungal strain of the genero Penicillium

Una fracción dextranasa (EC 3.2.1.11) excretada por un hongo del género Penicillium, fue purificada después de cinco días de inducción de la enzima en cultivo sumergido en agitación a 28-C. El crudo enzimático fue precipitado con 80 % de sulfato de amonio, resuspendido en tampóm acetato y aplicado en cromatografía sucesivas de filtración por el gel e intercambio iónico. La fracción homogénea de dextrabasa está formada por dos bandas de proteinas superpuestas con un peso molecular aproximado de 67 000 Da, un nivel de glicosidación entre 15-18 % y un punto isoeléctrico a pH 3,88. La actividad específica osciló entre 1 500 y 2 000 U/mg de proteína con un máximo de actividad a pH 5

Caracterización de la estructura primaria de la interleucina-2 humana recombinante / Characterization of the primary structure of the recombinant human interleukin-2

La interleucina-2 humana recombinante clonada y expresada en E. coli, y purificada mediante cromatografía líquida de alta eficacia (HPLC), fue analizada para verificar su estructura primaria. El análisis de aminoácidos de la proteína pura coincide con la composición teórica esperada. La proteína fue hidrolizada con bromuro de cianógeno, los péptidos separados por HPLC fueron secuenciados automáticamente y determinada su composición aminoacídica, confirmándose la estructura desde el extremo N-terminal hasta el residuo 56. Con el propósito de completar la secuencia de la proteína, esta fue reducida y carboximetilada. La proteína se sometió a digestión con endoproteinasa GLU-C (Staphyloccocus aureus V8) y una parte de esta digestión se incubó a continuación con tripsina. Los péptidos purificados mediante gel filtración (Biogel P-6) y HPLC en fase inversa, fueron secuenciados con la técnica manual de doble acoplamiento con dimetilaminoazobenzeno isotiocianato e isotiocianato de fenilo (DABITC/PITC). La purificación de la digestión tríptica de la proteína reducida y carboximetilada mediante fase inversa, suministró los péptidos para análisis en espectrometría de masas utilizando como fuente de ionización bombardeo con átomos rápidos (MS FAB). Tanto los resultados de la secuenciación como la espectrometría de masas confirman que la interleucina-2 obtenida en E. coli posee la estructura primaria reportada para esta proteína

Caracterización química del interferón humano alfa-2 recombinante / Chemical characterization of human alpha-2 recombinant interferon

El interferón humano alfa-2 recombinante con alto grado de pureza, expresado en E. coli, fue analizado con vistas a verificar su secuencia aminoacídico. El análisis de aminoácidos permitió comprobar que el contenido aminoacídico de la molécula es correcto. Mediante estudios de cromatografía líquida de alta eficacia se evaluó la pureza de la proteína. Se obtuvieron los mapas peptídicos con diferentes proteasas y métodos químicos, aislándose de una de estas digestiones los péptidos trípticos para su secuencia automática. Se determinó que una parte del material se inicia en metionina y otra en cisteína. La secuencia aminoacídica de la proteína se verificó, coincidiendo esta con la secuencia predicha a partir de la secuencia del gen clonado. Se estableció la secuencia C-terminal mediante análisis enzimático

Grandes mononucleares tipo linfoblasto en el líquido sinovial de las artropatías inflamatorias crónicas / Sinovial lymphoblast-like large mononuclear cells in chronic inflammatory arthropaties

El estudio del líquido sinovial mediante microscopía óptica y electrónica, mostró la existencia de grandes células mononucleares tipo linfoblasto en pacientes con artritis reumatoide (81.2%), artritis reumatoide juvenil (75%) y espondiloartropatías seronegativas (60%). Las características morfológicas de estas células en la microscopía óptica fueron: tamaño aproximado 20 micras, índice núcleo citoplasma 2:1, citoplasma basófilo, patrón leptocromático del núcleo y 2 ó 3 nucleolos. El análisis de estas células por microscopía electrónica demostró una forma redondeada o ligeramente oval, un núcleo usualmente redondeado que puede presentar invaginaciones, heterocromatina dispuesta en un fino anillo cerca de la membrana nuclear, citoplasma ocupado por mono y polirribosomas y ausencia de aparato de Golgi. La identificación de las grandes células mononucleares tipo linfoblasto en el líquido sinovial puede ser dato de importancia diagnóstica de las artropatías inflamatorias crónicas, con probables fenómenos antoinmunes, como la artritis reumatoide y las espondiloartropatías seronegativas