Solubilización y renaturalización de la fusión superóxido dismutasa humana y proquimosina de ternero sintetizada en Saccharomyces cerevisiae / Solubilization and renaturation of human superoxide dismutase and call prochymosin gen fusion synthetized in saccharomyces cerevisiae

La proquimosina de ternero fusionada al gen de la superóxido dismutasa humana (SOD) fue sintetizada en forma insoluble en Saccharomyces cerevisiae. Las condiciones que permiten la solubilización de la proteína fueron investigada, siendo la desnaturalización el proceso esencial mediante el cual es solubilizado más del 90 % del producto recombinante. Se estudiaron diferentes parámetros que intervienen en el proceso de renaturalización de la SOD proquimosina, describiéndose un procesamiento mediante el cual es posible recuperar el 25 % de la proquimosina soluble en su forma nativa. Más del 98 % de la proteína fue activada, obteniéndose un preparado enzimático cuya función biológica fue determinada mediante el proceso de coagulaciónm de la leche

Producción de proquimisina bovina recombinante en Saccharomyces cerevisiae utilizando cultivo incrementado / Production of recombinant calf prochymosin in Sacharomyces cerevisiae using Fed-baytch culture

Se examinó el efecto de las condiciones de cultivo en la producción de la proteina fusionada SOD-proquimosina sintetizada en Sacharomyces cerevisiae bajo el control del fragmento corto del promotor que regula la síntesis de la enzima gliceraldehido-3-fosfato deshidrogenasa. El proceso fermentativo de 5 y 50 l de cultivo, obteniéndose resultados similares en ambas escalas. Cuando las células son cultivadas en medio selectivo suplementado con sacarosa al 5 % e hidrolizado de caseina al 2 % utilizando un sistema batch, la concentración relativa de SOD-proquimosina es incrementada 1,7 veces, mientras que la utilización del cultivo incrementado aumenta aproximadamente 4 veces la masa celular y eleva significativamente la producción de la proteina recombinante a un nivel del 2 % del total de la proteina celular

La fusión de los genes superóxido dismutasa humana y la proquimosina de ternero se expresa en Saccharomyces cerevisiae / Efficient expression of human superoxide dismutasa calf prochymosin gene fusion in Saccharomices cerevisiae

El gen de la proquimosina de ternero (PQ) fue fusionado a la secuencia que codifica los primeros 41 aminoácidos de la superóxido dismutasa humana (SODh). Esta fusión se expresó en la levadura S. cerevisiae bajo el control del fragmento corto del promotor que regula la síntesis de la enzima gliceroaldehído-3-fosfato deshidrogenasa (GFD) en este microorganismo. Los niveles de expresión de la proteina fusionada están en el orden del 2 % con respecto a la proteína total, produciéndose en forma insoluble y asociada a la membrana. El producto obtenido después de su activación presentó las mismas propiedades bioloógicas que la enzima natural