Monitoring human cytomegalovirus viral load in peripheral blood leukocytes of renal transplant recipients by a simple limiting dilution-PCR assay

To assess the clinical relevance of a semi-quantitative measurement of human cytomegalovirus (HCMV) DNA in renal transplant recipients within the typical clinical context of a developing country where virtually 100 per cent of both receptors and donors are seropositive for this virus, we have undertaken HCMV DNA quantification using a simple, semi-quantitative, limiting dilution polymerase chain reaction (PCR). We evaluated this assay prospectively in 52 renal transplant patients from whom a total of 495 serial blood samples were collected. The samples scored HCMV positive by qualitative PCR had the levels of HCMV DNA determined by end-point dilution-PCR. All patients were HCMV DNA positive during the monitoring period and a diagnosis of symptomatic infection was made for 4 of 52 patients. In symptomatic patients the geometric mean of the highest level of HCMV DNAemia was 152,000 copies per 106 leukocytes, while for the asymptomatic group this value was 12,050. Symptomatic patients showed high, protracted HCMV DNA levels, whereas asymptomatic patients demonstrated intermittent low or moderate levels. Using a cut-off value of 100,000 copies per 106 leukocytes, the limiting dilution assay had sensitivity of 100 per cent, specificity of 92 per cent, a positive predictive value of 43 per cent and a negative predictive value of 100 per cent for HCMV disease. In this patient group, there was universal HCMV infection but relatively infrequent symptomatic HCMV disease. The two patient groups were readily distinguished by monitoring with the limiting dilution assay, an extremely simple technology immediately applicable in any clinical laboratory with PCR capability.

Rejeiçäo humoral com prova cruzada negativa: análise de 31 casos / Humoral rejection with negative crossmatch: analysis of 31 cases

Analisamos os dados clínicos, anatomopatológicos e imunológicos de 31 casos de rejeiçäo humoral (RH) com prova cruzada (PC) negativa e perda do enxerto, observados nos últimos 487 transplantes renais. Diferenciamos três tipos de rejeiçäo humoral: imediata - RHI - (1,84%), tardia - RHT (2,25%) e vascular aguda - RVA - (2,25%). Em relaçäo ao tipo de doador, a RH ocorreu em 3,96% dos casos com doador vivo parente, 7,9% com doador cadáver e em 10,4% com doador vivo näo partente e foi mais freqüente no retransplante. A prova cruzada pré-transplante foi negativa contra linfócitos T em todos os casos. Em 12 casos, foi feita utilizando-se antiglobulina humana (AGH) e manteve-se negativa. Em 11 casos, os soros foram testados contra monócitos do doador, com resultados também negativos. Apenas três casos em 12 tiveram PC positiva contra linfócitos B do doador. Doze casos de RHI e RHT tiveram as provas cruzadas repetidas pós-perda do enxerto. Um caso apresentou resultados positivos para células T, B e monócitos e outro só para monócitos. Nos seis casos de RVA que tiveram a PC repetida no pós-transplante, três apresentaram positividade para T, B e monócito e os três restantes apenas para B. Esses resultados sugerem que, apesar do PCs altamente sofisticadas, continuamos impossibilitados de prever todas as perdas por RH. Além disso, cremos que os alvos estudados parecem näo apresentar diversidade suficiente, sugerindo a participaçäo de antígenos ainda näo pesquisados na rotina pré-transplante