Análise comparativa entre as metodologias de PCR metilação-específica (MSP), southern blot (SB) e FISH utilizadas no diagnóstico genético molecular de pacientes com suspeita clínica das síndromes de Prader-Willi ou Angelman / Comparative analysis of methylation-specific PCR (MSP), southern blot (SB) and FISH in molecular genetic diagnosis of patients with clinical picture suggestive of Prader-Willi or Angelman syndromes

Introdução: Prader-Willi (SPW) e Angelman (SA) são síndromes clinicamente distintas, causadas pela perda de expressão de genes na região cromossômica 15q11.2-q13, de origem paterna ou materna, respectivamente. Ambas compartilham os mesmos métodos diagnósticos. Nossos objetivos foram: a) analisar por PCR metilação-específica (MSP) pacientes com suspeita clínica de SPW/SA; b) comparar resultados de diferentes metodologias de diagnóstico molecular; c) aplicar a técnica MSP na rotina assistencial de pacientes encaminhados ao Serviço de Genética Médica/Hospital de Clínicas de Porto Alegre (SGM/HCPA). Métodos: Foram analisados 123 pacientes com suspeita clínica de SPW (n = 71) ou SA (n = 52) por MSP. Desses, 79 possuíam análise prévia por hibridação in situ fluorescente (FISH) e/ou Southern blot (SB). Resultados: Foram detectados 21 casos positivos – 15 de SPW (12,19%) e 6 de SA (4,88%). Nove pacientes tiveram etiologia molecular determinada, sendo sete com diagnóstico de SPW (quatro dissomias uniparentais – UPD15 materna – e três deleções na região 15q11-13) e dois com diagnóstico de SA (um com UPD15 paterna e um com deleção na região 15q11-13). Foram observados resultados equivalentes entre MSP e SB e resultados discrepantes entre MSP e FISH (n = 4). Foram padronizados dois protocolos de MSP para confirmação dos resultados e controle interno de qualidade. Conclusão: O perfil de detecção de cada técnica varia de acordo com o mecanismo etiológico presente. A análise por MSP detecta alterações no padrão de metilação geradas por deleção, UPD e defeitos de imprinting, sem identificar o mecanismo etiológico responsável...

Introduction: Prader-Willi (PWS) and Angelman (AS) are clinically different syndromes caused by loss of expression of genes located on the chromosome 15q11.2-q13, of paternal or maternal origin, respectively. Both syndromes have the same diagnostic methods. The aims of the present study were: a) to perform a molecular analysis of 123 patients with clinical findings suggestive of PWS or AS using methylation-specific PCR (MSP); b) to compare the results obtained using different molecular diagnostic methodologies; c) to standardize MSP to be used in the routine care of patients at Medical Genetics Service/Hospital de Clínicas de Porto Alegre (SGM/HCPA). Methods: 123 patients with clinical findings suggestive of PWS (n = 71) or AS (n = 52) were analyzed by MSP. 79 had undergone previous laboratory analysis by fluorescence in situ hybridization (FISH) and/or Southern blot (SB). Results: MSP detected 21 positive cases – 15 PWS (12,19%) and 6 AS (4,88%). Molecular etiology was determined in 9 patients only – 7 were diagnosed with PWS (4 had uniparental disomy – maternal UPD15 – and 3 had deletions at 15q11-13) and 2 were diagnosed with AS (1 of paternal UPD15 and 1 deletion at 15q11-13). Comparing both methodologies, it was possible to observe concordant results between MSP and SB and discordant results between MSP and FISH (n = 4). We standardized two MSP methods in order to confirm the results and for internal quality control. Conclusion: The resulting profile of each technique varies according to the existing etiological mechanism. The methylation analysis by MSP technique detects changes on methylation pattern caused by deletion, UPD and imprinting defects, but it does not identify the responsible etiologic mechanism...

Detecçao e tipagem molecular de papilomavírus humano (HPV) em 460 amostras de colo uterino: estudo comparativo com exames citopatológico e colposcópico / Detection and typing of human papillomavirus (HPV) in 460 positives samples: comparative study with colposcopy and cytology

A reaçao em cadeira da polimerase (PCR-Polymerase Chain Reaction) é uma técnica de amplificaçao enzimática de seqüências específicas de ácidos nucleicos. Essa técnica tem sido amplamente descrita para detecçao e tipagem do Papilomavírus Humano (HPV - Human Papilomavirus). Neste trabalho, 460 amostras de colo uterino foran avaliadas para a presença do DNA do HPV pela técnica de PCR. Amostras positivas foram subseqüentemente tipadas por RFLP (Restriction Fragment Lenght Polymorphism). Os resultados de PCR-RFLP foram comparados com os exames colposcópico e citopatológico (Papanicolou). O PCR-RFLP demonstrou ser uma técnica eficaz na detecçao e tipagem virais, apresentando maior sensibilidade do que os exames citopatológico e colposcópico

Detecção e tipagem molecular de Papilomavírus Humano (HPV) em 460 amostras e colo uterino: estudo comparativo com exaes citopatológico e colposcópico / Human Papillomavirus (HPV) detection and molecular typing from 460 cervical samples: comparative study between colposcopy and citology (Papanicolaou smears)

A Reação em Cadeia da Polimerase (PCR – Polymerase Chain Reaction) é uma técnica de amplificação enzimática de sequências específicas de ácidos nucléicos. Essa técnica tem sido amplamente descrita para detecção e tipagem do Papilomavírus Humano (HPV – Human Papillomavirus). Neste trabalho, 460 amostras de colo uterino foram avaliadas para a presença do DNA do HPV pela técnica de PCR. Amostras positivas foram subsequentemente tipadas por RFLP (Restriction Fragment Polymorphism). Os resultados de PCR-RFLP foram comparados com os exames colposcópico e citopatológico (Papanicolaou). O PCR-RFLP demonstrou ser uma técnica eficaz na detecção e tipagem virais, apresentando maior sensibilidade do que os exames citopatológico e colposcópico.