Investigation of MHC gamma block C4A and C4B polymorphisms in unrelated hematopoietic stem cell transplantation

ABSTRACT Background: Immunological life-threatening complications frequently occur in post-hematopoietic stem cell transplantation (HSCT), despite matching recipient and donor (R/D) pairs for classical human leukocyte antigens (HLA). Studies have shown that R/D non-HLA disparities within the major histocompatibility complex (MHC) are associated with adverse effects post-HSCT. Methods: We investigated the impact of mismatches of single-nucleotide polymorphisms (SNPs) in C4A/C4B genes, for showing the highest diversity in the MHC gamma block, on 238 patients who underwent HLA 10/10 unrelated donor (URD) HSCT. The endpoints were acute graft-versus-host disease (aGVHD), chronic graft-versus-host disease (cGVHD) and mortality. One hundred and twenty-nine R/D pairs had 23 C4-SNPs typed by PCR-SSP (Gamma-Type™v.1.0), and 109 R/D pairs had these 23 SNPs identified by next-generation sequencing (NGS) using the Illumina platform. Results: The percentage of patients who received HSC from HLA 10/10 donors with 1-7 mismatches was 42.9%. The R/D pairs were considered C4 mismatched when bearing at least one disparity. These mismatches were not found to be risk factors for aGVHD, cGVHD or mortality after unrelated HSCT when SNPs were analyzed together (matched or mm ≥ 1), independently or according to the percentage of incompatibilities (full match for 23 SNPs; 1-3 mm and >3 mm). An exception was the association between 1-3 mismatches at the composite of SNPs C13193/T14952/T19588 with the development of aGVHD (P = 0.012) and with grades III-IV of this disease (P = 0.004). Conclusion: Our data are not consistent with the hypothesis that disparities in C4A/C4B SNPs increase the risks of post-HSCT adverse effects for the endpoints investigated in this study.

Determination of an unrelated donor pool size for human leukocyte antigen-matched platelets in Brazil

ABSTRACT Background: Successful transfusion of platelet refractory patients is a challenge. Many potential donors are needed to sustain human leukocyte antigen matched-platelet transfusion programs because of the different types of antigens and the constant needs of these patients. For a highly mixed population such as the Brazilian population, the pool size required to provide adequate platelet support is unknown. Methods: A mathematical model was created to estimate the appropriate size of an unrelated donor pool to provide human leukocyte antigen-compatible platelet support for a Brazilian population. A group of 154 hematologic human leukocyte antigen-typed patients was used as the potential patient population and a database of 65,500 human leukocyte antigen-typed bone marrow registered donors was used as the donor population. Platelet compatibility was based on the grading system of Duquesnoy. Results: Using the mathematical model, a pool containing 31,940, 1710 and 321 donors would be necessary to match more than 80% of the patients with at least five completely compatible (no cross-reactive group), partial compatible (one cross-reactive group) or less compatible (two cross-reactive group) donors, respectively. Conclusion: The phenotypic diversity of the Brazilian population has probably made it more difficulty to find completely compatible donors. However, this heterogeneity seems to have facilitated finding donors when cross-reactive groups are accepted as proposed by the grading system of Duquesnoy. The results of this study may help to establish unrelated human leukocyte antigen-compatible platelet transfusions, a procedure not routinely performed in most Brazilian transfusion services.

Nomenclatura dos fatores do sistema HLA / Nomenclature for factors of the HLA system

The Nomenclature Committee for Factors of the HLA System of the World Health Organization standardizes the nomenclature of the HLA system and meets regularly during the International Histocompatibility Workshops. During the 15th International Histocompatibility Workshop in Buzios (RJ), Brazil, in September 2008, there was a meeting of the nomenclature committee when new rules were established, whichwere implemented in April 2010.

O Comitê de Nomenclatura dos Fatores do Sistema HLA da Organização Mundial da Saúde normatiza a nomenclatura do sistema HLA e se reúne regularmente durante os Workshops Internacionais de Histocompatibilidade. Durante o 15o Workshop Internacional de Histocompatibilidade, em Búzios (RJ), em Setembro de 2008, houve a reunião do comitê de nomenclatura, quando novas regras foram estabelecidas, sendo implantadas em Abril de 2010.

Transplante de sangue de cordão umbilical - SCU / Umbilical cord blood transplantation

A frequente utilização de sangue de cordão umbilical - SCU como fonte de células- tronco hematopoéticas - CTH, tanto em crianças, como em adultos, que não dispõem de doador na família, tem levado ao estabelecimento da padronização de critérios em sua seleção, objetivando a obtenção de melhores resultados. A escolha da unidade de SCU deve basear-se no número total de células nucleadas e no número de diferenças de antígenos leucocitários humanos (HLA). Diante de uma unidade com celularidade mínima, deve-se considerar a possibilidade da utilização de duplo cordão. Frente a mais de uma unidade com características semelhantes, a realização da contagem de células CD34 e da compatibilidade ABO, assim como a qualidade e a rapidez para obtenção da unidade, podem definir a escolha.

The frequent use of umbilical cord blood as the source of hematopoietic stem cells, both in children and adults who do not have related donors, has led to the establishment of a better standardization of selection criteria aiming at improving the results. The choice of the umbilical cord blood unit should be based on the total number of nucleated cells and the number of differences in the human leukocyte antigen (HLA) system. When a unit has minimal cellularity, the use of a double cord blood transplant should be considered. When two or more units have similar characteristics, the choice may be determined by the CD34 count, ABO compatibility and the quality and speed to obtain the unit.

Seleção de doador de medula óssea ou sangue periférico / Bone marrow or peripheral blood donor selection

A compatibilidade HLA é o fator mais valorizado na escolha do doador de medula óssea voluntário, preconizando-se a realização de HLA de alta resolução nos locos HLA-A,B,C, DRB1 e DQB1. Tem sido dado preferência para o doador com consanguinidade alélica 8x8 (A,B,C, DRB1). Na presença de incompatibilidade na classe-I sugere-se a busca de doador com compatibilidade DQB1 (9x10). Já as incompatibilidades dos locos DPB1 não constituem critério de exclusão de doador, exceto quando existir presença de anticorpo contra o loco HLA-DP do doador.

The HLA system is considered the most important factor in choosing a volunteer bone marrow donor with the recommendation of performing high resolution HLA tests for the HLA-A, B, C, DRB1 and DQB1 loci. A preference has been given for donor 8x8 (A, B, C, DRB1) allele matching. In the presence of class-I incompatibility a search for DQB1 (9x10) donor compatibility is suggested. The incompatibility of the DPB1 locus does not constitute exclusion of the donor, except when there is the presence of antibodies against the HLA-DP locus of the donor.

Seleção de doador não aparentado / HLA antibodies and donor selection

Apesar da presença de anticorpos anti-HLA em transplantes de órgãos sólidos estar associada à rejeição, essa correlação não havia sido pesquisada em transplante alogênico de células progenitoras hematopoéticas (TCPH). Estudos mais recentes na literatura têm demonstrado que a falência da enxertia no TCPH pode ser mediada por aloanticorpos anti-HLA doador especifico (DSA). A especificidade desses anticorpos pode ser evidenciada pelas técnicas de fase sólida, onde os antígenos HLA únicos são aderidos a pérolas de poliestireno, que permite a realização da prova cruzada virtual. Na presença de DSA, é recomendável selecionar outro doador ou realizar as estratégias de remoção dos anticorpos.

In spite of Anti-HLA antibodies being associated to rejection in solid organs transplantation, this correlation has not been well established yet in allogenic bone marrow transplantation.Recent studies in the literature have demonstrated that engraftment failure in hematopoietic cell transplantation (HCT) can be mediated by donor specific anti-HLA antibodies (DSA). These antibodies specificity can be detected by solid-phase techniques, where single HLA antigens are adhered to microbeads, which allows the interpretation of host reactivity by "virtual crossmatch". In the presence of DSA, it is advisable to either search for another donor or remove the antibodies prior to transplantation.

Diagnosis and treatment of acute antibody-mediated rejection in renal transplant: the role of C4d and donor-specific antibody identification / Diagnóstico e tratamento da rejeição aguda mediada por anticorpo no transplante renal: papel do C4d e da pesquisa de anticorpo específico contra o doador

Objective: To evaluate the incidence of antibody-mediated rejection after the C4d and donor specific antibody detection was provided by Luminex in renal transplantation biopsies; to compare acute antibody-mediated rejection characteristics as related to acute cellular rejection; to evaluate the impact on the incidence of acute antibody mediated rejection after the utilization of cross match test by flux cytometry and the detection of pre-transplantation donor specific antibody in patients with previous history of exposition to alloantigens. Methods: One hundred twenty-four renal transplanted patients were evaluated through the detection of C4d in early biopsies of those presenting graft dysfunction and the detection of antibody against donor when C4d was positive. The acute antibody mediated rejection was treated by plasmapheresis and intravenous immunoglobulin. Results: The incidence of acute rejection was 18.8%, being the acute cellular rejection 14.9% and acute antibody mediated rejection 6.6%. When both were compared, the acute antibody-mediated rejection were earlier than the acute cellular rejection (12.5 versus 59.9 days, p = NS), being more frequent in female patients (75 versus 29%, p = 0.05), with deceased donors (75 versus 33%, p = 0.09), with higher dialysis time (87.7 versus 47.4, p = 0.03), greater number of transfusion episodes (4.6 versus 1.4, p = 0.02), greater panel reaction activity (28.0 versus 4.8, p = 0.03) and more frequently in re-transplanted patients (50 versus 5.6%, p = 0.02). Delayed graft function was more frequent in antibody mediated rejection (100 versus 50%, p = 0.02). All patients with acute cellular rejection reversed graft function after treatment, with 100% graft survival after one year. Among patients with acute antibody-mediated rejection, the treatment with plasmapheresis and immunoglobulin was efficient in reducing the titers of donor specific antibody (2605 versus 202 mfi, p < 0.001), but 3/8 of patients evolved to graft loss, making graft survival of 62.5% (p < 0.001). Conclusions: The routine use of detecting C4d and donor specific antibody increased the incidence of acute rejection. Acute antibody-mediated rejection presented clinical profile and therapeutic response different from acute cellular rejection, identifying a worse prognosis as well as therapeutic success.

Objetivo: Avaliar a incidência da rejeição mediada por anticorpo depois de instituída a pesquisa de C4d em biópsias de rim transplantado e pesquisa de anticorpo específico de doador pelo Luminex; comparar as características da rejeição aguda mediada por anticorpo em relação à rejeição aguda celular; avaliar o impacto na incidência de rejeição aguda mediada por anticorpo após utilizar a prova cruzada por citometria de fluxo e pesquisa de anticorpo específico de doador pré-transplante em pacientes com histórico de exposição prévia à aloantígenos. Métodos: Foram avaliados 124 pacientes transplantados renais, com pesquisa de C4d em biópsias precoces em pacientes com disfunção do enxerto e pesquisa de anticorpo contra o doador quando o C4d foi positivo. A rejeição aguda mediada por anticorpo foi tratada com plasmaferese e imunoglobulina intravenosa. Resultados: Foi encontrada uma incidência de rejeição aguda de 18,8%, com frequência de episódios de rejeição aguda celular de 14,9% e de rejeição aguda mediada por anticorpo de 6.6%. Quando comparados com rejeição aguda celular, os episódios de rejeição aguda mediada por anticorpo foram mais precoces (12,5 versus 59,9 dias, p = NS), sendo mais frequentes em pacientes femininas (75% versus 29%, p = 0,05), com doadores falecidos (75% versus 33%, p = 0.09), com maior tempo de diálise (87,7 versus 47,4, p = 0,03), maior número de transfusões (4,6 versus 1,4, p = 0,02), maior atividade contra painel (28,0 versus 4,8, p = 0,03) e mais frequentemente retransplantados (50 versus 5,6%, p = 0,02). Função retardada do enxerto foi mais frequente nos pacientes com rejeição aguda mediada por anticorpo (100 versus 50%, p = 0,02). Todos os pacientes com rejeição aguda celular reverteram a função do enxerto após o tratamento, com sobrevida do enxerto, em um ano, de 100%. Entre os pacientes com rejeição aguda mediada por anticorpo, o tratamento com plasmaferese e imunoglobulina foi eficiente em reduzir os títulos de anticorpo específico de doador (2.605 versus 202 mpi, p < 0,001), mas 3/8 pacientes evoluíram para perda do enxerto, conferindo sobrevida do enxerto de 62,5% (p < 0,001). Conclusões: O uso rotineiro da pesquisa de C4d e anticorpo doador específico aumentou a incidência de rejeição aguda. A rejeição aguda mediada por anticorpo apresentou perfil clínico e resposta terapêutica diferentes da rejeição aguda celular, conferindo-lhe pior prognóstico e pior resposta terapêutica.

Rejeição aguda mediada por anticorpo após o transplante de pâncreas / Acute antibody-mediated rejection after pancreas transplantation

Objetivo: A rejeição aguda mediada por anticorpos requer tratamento específico e tem impacto na sobrevida do enxerto. Os objetivos foram: relatar a incidência de rejeição aguda mediada por anticorpos após o transplante de pâncreas, e descrever os dados demográficos, os desfechos e o padrão de distribuição do C4d, além da correlação com exames laboratoriais. Métodos: Microscopia óptica, imunofluorescência para C4d e pesquisa de anticorpos antidoadores por Luminex®, em 31 biópsias renais em 17 pacientes (mediana 87 dias) e 34 biópsias pancreáticas em 22 pacientes (mediana 192 dias), de agosto de 2006 a agosto de 2008. Foram realizados os testes de χ2, t de Student, coeficiente de correlação de Pearson e regressão logística (p < 0.05). Rresultados: Um total de 47% das rejeições pancreáticas foi humoral: cinco agudas; duas subclínicas e uma silenciosa. O tratamento anterior e posterior da rejeição aguda (n = 17, 65% das biópsias): amilasúria 1271.3  ± 1214.1 versus 1966.5 ± 1423 U/h (p = 0.004); amilase 188.4 ± 87.9 versus 102.3 ± 47.2 U/l (p < 0.0001) e lipase 1219.1 ± 594.4 versus 419.3 ± 207.3 U/l (p < 0.0001), respectivamente. Houve correlação do diagnóstico da rejeição aguda pancreática com a amilase(p = 0.02) e a lipase (p = 0.018) e correlação entre si destes exames (p = 0.0013, r2 = 0.49). Ao todo, 27.3% das rejeições agudas renais foram humorais: uma aguda, uma subclínica e uma silenciosa. Não houve correlação da sobrevida dos enxertos com o C4d (padrão difuso: > 60% das biópsias). Cconclusões: A incidência de rejeição mediada por anticorpos é elevada em enxertos pancreáticos, de modo que o C4d deve ser rotineiramente pesquisado. Os exames laboratoriais são ferramentas úteis para o diagnóstico e seguimento do tratamento da rejeição aguda.

Utilização da técnica de PCR para monitoramento molecular de quimerismo pós-transplantes / Using PRC for molecular monitoring of p´post transpalntation chimerism

O monitoramento pós-transplante de órgãos sólidos e medula óssea tornou-se uma ferramenta imprescindível para aumentar a sobrevida dos enxertos, sendo o termo quimerismo utilizado paradescrever a presença de células do doador nos pacientes receptores de transplantes. O presente artigo descreve as diversas aplicações e avanços nas técnicas que podem ser utilizadas para a detecção e monitoramento quantitativo do quimerismo póstransplantes,em especial a metodologia de PCR utilizando oligonucleotídeos fluorescentes e seqüenciadores automáticos para amplificação e detecção de marcadores conhecidos como microssatélites, ou STRs.

Hipertensäo arterial na gravidez: experiência terapêutica com alfametil dopa, clonidina e clorpromazina / Arterial hypertension in pregnancy: therapeutic experience with alphamethyldopa, clonidine and chlorpromazine

Enfatiza-se a importância da caracterizaçäo e tratamento da H.A. na gravidez e apresentam 36 gestantes hipertensas distribuídas em 4 grupos, de acordo com o tipo de H.A. e o esquema terapêutico empregado. Na H.A. leve observou-se que a metil DOPA e a clorpromazina controlaram a P.A., porém, com a clorpromazina houve menor ganho de peso. Na H.A. moderada, empregou-se MD + clorpromazina e clonidina + clorpromazina e observou-se que ambos os esquemas controlaram a P.A. na gestaçäo. Näo se observou efeito colateral maior nos esquemas terapêuticos empregados