Résumé
Se sintetizó un análogo fotoactivable de biotina, el que se utilizó para marcar sondas de ácidos nucleicos. La marca se reveló con dos sistemas de detección avidina-peroxidasa y estreptavidina-fosfatasa alcalina, siendo ésta última la que demostró una mayor sensibilidad. Los plasmidos pSS1.8 y pSP64/U1 fueron fotobiotinilados y utilizados en ensayos de hibridación en gota con DNA extraido de leucocitos humanos. Despues de la incubacion con estreptavidina y fosfatasa alcalina biotinilada, la actividad de la enzima se reveló con un sustrato soluble. Los resultados obtenidos demuestran diferencias cuantitativas consistentes con el número de copias para globina y U1snRNA humano. El plasmido pSS1.8 fotobiotinilado se utilizó para identificar fragmentos de restricción de DNA genómico alterados en un paciente afectado de anemia de células falciformes. El gen de la globina mutado se detectó por digestión del DNA del paciente con la endonucleasa de restricción Dde I, seguido de una hibridación "Southern" con la sonda marcada