Résumé
@#目的:探讨成纤维细胞生长因子 13(fibroblast growth factor 13,FGF13)对非小细胞肺癌 A549 细胞活性氧(reactive oxygen species,ROS)的生成和凋亡的影响及其调控机制。方法:WB 法检测 FGF13 在人正常肺上皮细胞 BEAS-2B 和肺癌 A549、H460 细胞中的本底表达量。采用 FGF13 过表达载体转染 BEAS-2B 和 A549 细胞;设计两组靶向 FGF13 的 shRNA 序 列,构建慢病毒干扰载体,包装病毒后侵染 A549 细胞,采用 qPCR 和 WB 法检测干扰效果,DCFH-DA 探针结合荧光酶标仪分 析敲减 FGF13 对 A549 细胞内 ROS 水平的影响,MitoSOX 与 WB 法检测对线粒体 ROS 水平及烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧 化酶 4(nicotinamide adenine dinucleotide phosphate oxidase 4,NOX4)蛋白表达量的影响,Annexin V-FITC-PI 双染法检测对细胞 凋亡和 Caspase-3 及 Cleaved Caspase-3 蛋白表达的影响。结果:与 BEAS-2B 细胞相比,FGF13 蛋白在两种肺癌细胞中均高表 达(均 P<0.05)。成功构建 FGF13 过表达、低表达的 A549 细胞系。过表达 FGF13 后,BEAS-2B 和 A549 细胞内 ROS 水平显著 降低(P<0.05);敲减 FGF13 表达后,A549 细胞内 ROS 水平显著升高(P<0.05);然而过表达及干扰 FGF13 对 A549 细胞内线粒 体 ROS 水平无显著影响,但 NOX4 蛋白表达量显著下调(P<0.05)及显著上调(P<0.05)。FGF13 干扰后 A549 细胞凋亡率显著 升高(P<0.01),Caspase-3 及 Cleaved Caspase-3 蛋白表达量显著上调(P<0.05)。结论:FGF13 可能通过 NOX 家族途径调控 ROS 的生成,并通过 ROS/Caspase-3 通路调控 A549 细胞凋亡。