Detección de aflatoxina M1 en muestras de leche cruda de vacas en tanques de enfriamiento en Boyacá (Colombia) / Detection of aflatoxin M1 in raw cow milk samples in cooling tanks in Boyacá (Colombia)

RESUMEN Una de las principales formas de contaminación de la leche con micotoxinas es el consumo de alimentos fermentados que se encuentran contaminados con mohos principalmente de Aspergillus spp., los cuales producen toxinas que pueden llegar a constituirse como un problema para la salud publica debido a su estabilidad térmica y química. El objetivo del presente trabajo fue detectar las concentraciones de aflatoxina M1 en muestras de leche de vacas en tanques de enfriamiento en cuatro municipios del departamento de Boyacá durante un año, determinando las variaciones de acuerdo con la temporada. Se realizó un estudio de corte longitudinal, descriptivo cuantitativo. Se seleccionaron aleatoriamente cuatro tanques de enfriamiento de cuatro municipios distintos del departamento; cada uno se muestreó dos veces al mes durante todo el período de estudio y se procesaron mediante metodología Charm Ez Lite . Se realizó un ANDEVA para determinar las diferencias estadísticas entre las concentraciones de la aflatoxina M1 por cada trimestre. Se determinaron diferencias estadísticas entre cada uno de los trimestres del estudio encontrando un porcentaje de positividad de 74,06% del total de muestras positivas en los trimestres de verano. 28,12% (108) de las muestras tomadas durante todo el estudio fueron positivas, con concentraciones de la toxina que oscilaron entre 0,5 y 2,0 μg/Kg de leche. Se determinó por primera vez en el departamento de Boyacá las concentraciones y variaciones estacionales de aflatoxina M1 en muestras de tanques de enfriamiento de leche, encontrando las mayores concentraciones y número de casos positivos de aflatoxina M1 en los meses de verano.

ABSTRACT One of the main forms of contamination of milk with mycotoxins is the consumption of fermented foods that are contaminated with mold, mainly Aspergillus spp, which produce toxins that can become a public health problem due to their thermal and chemical stability. The objective of the present work was to detect aflatoxin M1 concentrations in cows' milk samples in cooling tanks in four municipalities of the department of Boyacá for one year, determining the variations according to the season. A longitudinal, quantitative descriptive study was carried out, four cooling tanks from four different municipalities in the department were randomly selected, each tank, in each municipality, was sampled twice a month throughout the study period and processed using Charm methodology Ez Lite®, an ANDEVA was performed to determine the statistical differences between aflatoxin M1 concentrations for each quarter. Statistical differences were determined between each of the quarters of the study, finding a positivity percentage of 74.06% of the total positive samples in the summer quarters. 28.12% (108) of the samples taken throughout the study were positive, with toxin concentrations ranging between 0.5 and 2.0 μg/Kg of milk. Seasonal concentrations and variations of aflatoxin M1 in milk cooling tank samples were determined for the first time in the department of Boyacá, finding the highest concentrations and number of positive cases of aflatoxin M1 in the summer months.

Aflatoxin M1 in pasteurized, UHT milk and milk powder commercialized in Londrina, Brazil and estimation of exposure / Aflatoxina M1 em leite pasteurizado e UHT e leite em po comercializados em Londrina, Brasil e exposicao estimada.

Aflatoxin M1 (AFM1) is found in milk and other excretion products after aflatoxin B1 intake. AFM1 is carcinogenic to humans, and known levels of dairy product contamination is important to understand the risks to which the population is exposed. The occurrence of AFM1 was evaluated in 42 milk samples commercialized in Londrina, Parana State, Brazil and this rate of occurrence was used to estimate this exposure. AFM1 determina tion was ca rried out by ELISA, and was detected in 100 % samples at levels ranging from 0.01 to 0.81 µ g/kg (mean 0.13 µ g/kg). None of the samples p resente d AFM1 above the maximum permitted level by Brazilian Legislation (0.5 µ g/kg for fluid milk and 5 µ g/kg for milk powder). The estimated daily intake (EDI) of AFM1 was evaluated, and the average intake was 0.468 ng/kg body weight (b.w.) for adolescents, 0.384 ng/kg b.w. for adults and 0.559 ng/kg b.w. for the elderly. Values of EDI of AFM1 found in Londrina pose a toxicological risk to the population investigated. To the best of our knowledge, this is the first report on estimat ed AFM1 dietary exposure from Parana, Brazil.

Aflatoxina M1 (AFM1) e encontrada no leite e em outros produtos de excrecao apos o consumo de aflatoxina B1. AFM1 e carcinogenica para humanos, e avaliar os niveis de contaminacao em produtos lacteos e importante para conhecer os riscos aos quais a populacao esta exposta. A ocorrencia de AFM1 foi avaliada em 42 amostras de leite comercializadas em Londrina, Estado do Parana, Brasil, e sua ocorrencia foi utilizada para estimar sua exposicao. A determinacao de AFM1 foi avaliada por ELISA, e foi detectada em 100% das amostras, em niveis variando de 0,01 a 0,81 µ g/kg (media 0,13 µ g kg). Nenhuma das amostras apresentou niveis de AFM1 acima do maximo permitido pela Legislacao brasileira (0,5 µ g/kg para leite fluido e 5 µ g/kg para leite em po). A ingestao diaria estimada (IDE) de AFM1 foi avaliada, e a ingestao media foi de 0,468 ng/kg de peso corporal (p.c.)/dia para adolescentes, 0,384 ng/kg p.c./dia para adultos e 0,559 ng/kg p.c./dia para idosos. Valores de IDE de AFM1 encontrados em Londrina supoem um risco toxicologico para a populacao investigada. Do melhor do nosso conhecimento, este e o primeiro trabalho sobre a exposicao estimada de AFM1 do Parana, Brasil.

Occurrence of aflatoxin M1 in parmesan cheese consumed in Minas Gerais, Brazil / Ocorrência de aflatoxina M1 em queijo Parmesão consumido em Minas Gerais, Brasil

Aflatoxina M1 (AFM1) pode ocorrer em leite e produtos de leite, resultante da ingestão de aflatoxina B1 presente em rações de gado leiteiro. Um total de 88 amostras de queijo Parmesão, comercializadas no estado de Minas Gerais, Brasil, no período de marçode 2004 a dezembro de 2004, foram analisadas para aflatoxina M1 por cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE) com detector de fluorescência, precedida de purificação da amostra por coluna de imunoafinidade. AFM1 foi detectada em 40 das 88 amostras(46,4%). Entretanto, somente duas amostras entre estas estavam contaminadas em um nível acima do limite máximo permitido (250ng kg-1), aceito pela Comunidade Européia para AFM1. O Brasil não apresenta tolerância máxima permitida para AFM1 em queijo.

Aflatoxin M1 (AFM1) may occur in milk and milk products, resulting from the ingestion of aflatoxin B1 in feedstuffs by dairy cow. A total of 88 samples of Parmesan cheese marketed in Minas Gerais state, Brazil, from March 2004 to December 2004, were analyzed for AFM1 by high-performance liquid chromatography (HPLC) with a fluorescence detector following sample clean-up using immunoaffinity columns. AFM1 was detected in 40 of the 88 samples (46.4%). However, only two samples among these were contaminated at a level above the maximum permissible limit (250 ng kg-1) accepted by European Union for AFM1. No AFM1 maximum tolerance limit in cheese has been established in Brazil.

Determinacion de aflatoxina M1 en leche de Vaca / Determination of aflatoxin M1 in cow milk

Este estudio se realizó con 85 muestras de leche pasteurizada y UHT provenientes del muestreo hecho para análisis toxicológico de AFM1. El método analítico utilizado fue el de cromatografía líquida de alta presión (HPLC), con detector de fluorescencia. Se elaboró curva de calibración con concentraciones de 10,0, 20,0, 40,0, 60,0 y 80,0 ppt (ng/L), con R2 = 0,9862. No se detectó concentración alguna de AFM1 en las muestras analizadas en el Laboratorio de Salud Pública (Toxicología). Teniendo en cuenta estos resultados, que en principio son negativos para AFM1 en las muestras analizadas, no se descarta el que se deba mantener un programa de vigilancia y controles periódicos que garanticen la permanente inocuidad de este alimento.

The realized Study on 85 samples of pasteurized milk and UHT coming from the realized sampling for toxicological analysis of AFM1. The analytic method utilized was high pressure Liquid Chromatography (HPLC), with Fluorescence detection, curve calibration was elaborated with concentrations of 10.0, 20.0, 40.0, 60.0, and 80.0 ppt (ng/L), with R2 = 0.9862. Any concentration of AFM1 have been detected , in the analyzed samples at the Public Health Laboratory (Toxicology). Keeping in mind these results that are negative in principle for AFM1 in the analyzed samples, it´s advisable to keeping a surveillance program and periodic control that guarantes the permanent innocuousness of this food.

Gamma-irradiation effect on fumonisin B1 inactivation in corn flour and on aflatoxin M1 in fluid and powdered milk / Influência da irradiação gama na destruição de fumonisina B1 em farinha de milho e de aflatoxina M1 em leite fluido e em pó

Fumonisin B1 is a mycotoxin produced by Fusarium verticillioides and Fusarium proliferatum, and it is found chiefly in corn and corn-based products. Since its discovery fumonisin B1 has been associated with diseases in animals, such as leukoencephalomalacia in horses, and pulmonary edema in swine. On humans, the ingestion of foods with fumonisin B1 is associated with esophageal cancer. Aflatoxin M1 is the principal hydroxylated metabolite occurring in milk from animals which have consumed aflatoxin B1-contaminated feeds. It is also present in milk from nursing mothers who consumed foodstuffs with aflatoxin B1. In this study the effect of gamma-irradiation (60Co) was verified, in doses ranged from 0 to 20 kGy, in order to inactivate fumonisin B1 in corn flour and aflatoxin M1 in fluid and powdered milk. Fumonisin B1 was extracted from the samples with methanol:water (3:1). The extract was purified through immunoaffinity column followed by separation and quantification by means of high-performance liquid chromatography (HPLC) with o-phthaldialdehyde (OPA). For determining aflatoxin M1 the purification was done through immunoaffinity column followed by separation and quantification by means of HPLC with fluorescence detector. Gamma irradiation (60Co) at doses from 3 to 20 kGy reduced the fumonisin B1 content in a range of 11.2 % to 55.5 %. Gamma irradiation (60Co) at 20 kGy dose r

Fumonisina B1 é a micotoxina produzida por Fusarium verticillioides e Fusarium proliferatum e é encontrada principalmente em milho e produtos a base de milho. Desde sua descoberta a fumonisina B1 tem sido associada a doenças em animais, como leucoencefalomalácia em cavalos e edema pulmonar em suínos. Em humanos, o consumo de alimentos com fumonisina B1 tem sido associado com câncer esofágico. A aflatoxina M1 é o principal metabólito hidroxilado encontrado no leite de animais que consumiram rações contaminadas com aflatoxina B1, bem como no leite de lactantes que consumiram alimentos com esta substância. Neste estudo foi verificado o efeito da irradiação gama (60Co), em doses que variaram de 0 a 20 kGy, quanto à capacidade de inativar fumonisina B1 em farinha de milho e aflatoxina M1 em leite fluido e em pó. A fumonisina B1 foi extraída das amostras com metanol:água (8:2). O extrato foi purificado em coluna de imunoafinidade, seguido de separação e quantificação por meio de cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE) com detector de fluorescência, após derivatização com ortoftaldialdeído. Para efetuar a determinação da aflatoxina M1, a amostra foi purificada em coluna de imunoafinidade e a separação e a quantificação por meio de CLAE com detector de fluorescência. Foi observada uma redução da concentração da fumonisina B1 na faixa de 11,2 % a 55,5% em doses de 3 a 20 kGy de

Afloxina M1 em queijo prato e parmesäo determinada por coluna de imunoafinidade e cromatografia líquida / Aflatoxin M1 in soft and parmesan chesse by immunoaffinity column and liquid chromatography

Produtos derivados de leite, como o queijo, podem estar com aflatoxina M1 (AFM1) quando o gado leiteiro consome raçäo contendo aflatoxina B1 (AFB1). Amostras de queijo tipo prato e tipo parmesäo ralado foram coletadas na cidade de Belo Horizonte pela Vigilância Sanitária de Minas Gerais - Brasil. Foi obtido um extrato purificado através de extraçäo com diclorometano, seguido de lavagem com n-hexano e purificaçäo em coluna de imunoafinidade. A quantificaçäo da AFM1 foi feita por cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE) usando detetor de fluorescência. AFM1 foi detectada em todas as marcas de queijo tipo prato analisadas, em uma faixa de concentraçäo de 0,02 a 0,54 ng/g e média de 0,15 ng/g. Em queijo ralado, tipo parmesäo, AFM1 foi detectada em 13 das 14 marcas de amostras analisadas (93 por cento), em faixa de concentraçäo de 0,04 a 0,30 ng/g e média de 0,14 ng/g. (AU)

Aflatoxin M1 was determined in Soft and Parmesan cheese by immunoaffinity columnand liquid chromatography. Milk products such as cheese may be contaminated by aflatoxin M1 (AFM1)when dairy cattle have consumed feeds contaminated with aflatoxin B1 (AFB1). Samples of Soft andParmesan cheese were collected in Belo Horizonte city, by the Inspection Service of Minas Gerais ­Brazil. A purified extract was obtained by extraction with dichloromethane followed by a washing withn-hexane and immunoaffinity column clean-up. The quantification of AFM1 was done by highperformance liquid chromatography (HPLC) using a fluorescence detector. AFM1 was detected in allsoft cheese brands analysed, in concentrations ranging between 0.02 and 0.54 ng/g and mean level of0.15 ng/g. In grated cheese, Parmesan variety, AFM1 was detected in 13 of 14 brands analysed (93%),in the range 0.04-0.30 ng/g with mean level of 0.14 ng/g. (AU)