Résumé
ABSTRACT Introduction: Thrombophilia is a thrombosis susceptibility of genetic, acquired or mixed nature. Among acquired causes, the antiphospholipid syndrome (APS) stands out as an autoimmune disease characterized by antiphospholipid antibodies, thrombotic events or recurrent gestational loss. Laboratory diagnosis is based on the detection of lupus anticoagulant (LAC), anti-β2-glycoprotein 1 and anticardiolipin; however the determination of LAC still demands uniformity. The last guideline published by the Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI) prioritizes the screening and confirmatory steps, to the detriment of the mixing phase. Objectives: To compare the forms of releasing the LAC and to adopt an investigation protocol in agreement with the international guidelines. Methods: Thirty-six samples with prolonged results in the screening step by the dilute Russell viper venom time (dRVVT) or activated partial thromboplastin time (APTT) were subjected to the mixing steps (1:1) and to the confirmatory steps with high concentrations of phospholipids. Results: For APTT, values whose indexes of circulating anticoagulant (ICA) were greater than 15% were considered positive. For dRVVT, the ratio between screening and confirmation was also used. Of the 36 tested samples, 14 showed correction in the mixing step, but only one resulted negative. Conclusion: ICA aided in identifying the weak antibodies that were probably diluted in the mixing step. There is no gold standard test for the diagnosis of APS, and LAC detection still requires standardization of technique and interpretation.
RESUMO Introdução: Trombofilia é a suscetibilidade à trombose, de natureza genética, adquirida ou mista. Entre as causas adquiridas, destaca-se a síndrome do anticorpo antifosfolípide (SAF) - doença autoimune caracterizada por anticorpos antifosfolípides, eventos trombóticos ou perda gestacional recorrente. O diagnóstico laboratorial baseia-se na detecção do anticoagulante lúpico (ACL), do anti-β2-glicoproteína 1 e da anticardiolipina; entretanto a execução do ACL ainda demanda uniformização. A última diretriz publicada pelo Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI) prioriza as etapas de triagem e confirmatória, em detrimento da mistura. Objetivos: Comparar as formas de liberação do ACL e adotar um protocolo de investigação em anuência às normas internacionais. Métodos: Trinta e seis amostras com resultados prolongados na etapa de triagem pelo ensaio do tempo do veneno da víbora de Russel (dRVVT) ou tempo de tromboplastina parcial ativada (TTPA) foram submetidas às etapas de mistura (1:1) e confirmatórias com altas concentrações de fosfolipídios. Resultados: Para o TTPA, foram considerados positivos os valores cujo cálculo do índice de circulação de anticoagulante (ICA) resultasse superior a 15%. Para o dRVVT, utilizou-se também o valor da razão entre triagem e confirmatória. Das amostras testadas, 14 revelaram correção na etapa da mistura, mas somente uma resultou em pesquisa negativa. Conclusão: O cálculo do ICA auxiliou na identificação dos anticorpos fracos que possivelmente sofreram diluição na etapa da mistura. Não há um exame padrão-ouro para o diagnóstico da SAF, e a pesquisa do ACL ainda demanda uniformização da técnica e da interpretação.
Résumé
En los pacientes hemodializados son frecuentes las oclusiones de los accesos vasculares por una diálisis insuficiente y en un bajo porcentaje por un estado hipercoagulable desencadenado por anticuerpos dirigidos contra determinados componentes fosfolipídicos. El objetivo del trabajo fue evaluar la prevalencia de estos autoanticuerpos (APL) y del marcador anti anexina V en 79 pacientes en plan de hemodiálisis y en 66 donantes de sangre de la ciudad de Bahía Blanca. Para la detección del anticoagulante lúpico (AL) se realizaron estudios coagulométricos básicos, pruebas de detección, corrección con mezclas con plasma normal y ensayos confirmatorios con lisados plaquetarios. En paralelo, se efectuaron ensayos inmunológicos séricos: anticuerpos anticardiolipinas (ACL) IgM/IgG, anticuerpos anti β2 Glicoproteina I (aβ2GPI) IgM/IgG y anticuerpos anti anexina V IgM/IgG. Para estimar las diferencias se realizó el test de Fisher con una significancia del 5%. No se detectó anticoagulante AL en ninguna de las dos poblaciones. La prevalencia de los ACL IgG fue mayor en los dializados que en los dadores (31,6% vs. 12,1%, p: 0,0056); la correspondiente a las antiβ2 GPI fue similar (2,5% en dializados vs. 7,6% en dadores, p: 0,2458), mientras que la correspondiente a la anti anexina V IgG resultó mayor en dializados (16,4% vs. 4,5%, p: 0,0316). Los resultados obtenidos sugieren la importancia de monitorear la presencia de anticuerpos antifosfolípidos y anti anexina V previo al ingreso de un plan de diálisis para prevenir eventos trombóticos.
In hemodialysis patients, occlusions of vascular access are frequent due to insufficient dialysis and in a low percentage, due to a hypercoagulable state triggered by antibodies directed against certain phospholipid components. The objective of this work was to evaluate the prevalence of these autoantibodies (APL) and the anti-annexin V marker in 79 patients undergoing hemodialysis and in 66 blood donors in the city of Bahía Blanca. For the detection of lupus anticoagulant (LA), basic coagulometric studies, detection tests, correction with mixtures with normal plasma and confirmatory tests with platelet lysates were performed. In parallel, serum immunological assays were performed: IgM/IgG anticardiolipin antibodies (ACL), IgM/IgG anti-β2 glycoprotein I (aβ2GPI) antibodies and IgM/IgG anti-annexin V antibodies. To estimate the differences, a Fisher test with a significance of 5% was performed. Lupus anticoagulant (LA) was not detected in any of the two populations. The prevalence of IgG ACL was higher in the dialysate than in the donors (31.6% vs. 12.1%, p: 0.0056); the corresponding antiβ2GPI was similar (2.5% dialysate vs. 7.6% donors, p: 0.2458), while the corresponding anti-Annexin V IgG was higher in dialysate (16.4% vs. 4.5%, p: 0.0316). The results obtained suggest the importance of monitoring the presence of antiphospholipid and anti-annexin V antibodies prior to entry to a dialysis plan to prevent thrombotic events.
Em pacientes hemodialisados são frequentes as oclusões dos acessos vasculares devido a uma diálise insuficiente e, um percentual baixo, a um estado de hipercoagulabilidade desencadeado por anticorpos dirigidos contra determinados componentes dos fosfolípidos. O objetivo do trabalho foi avaliar a prevalência desses autoanticorpos (APL) e do marcador anti Anexina V em 79 pacientes em plano de hemodiálise e em 66 doadores de sangue da cidade de Bahía Blanca. Para a detecção do anticoagulante lúpico (AL) foram realizados estudos coagulométricos básicos, testes de detecção, correção com misturas com plasma normal e ensaios de confirmação com lisados de plaquetas. Em paralelo se realizaram ensaios imunológicos séricos: anticorpos anticardiolipinas (ACL) a IgM/IgG, anticorpos anti β 2 GlicoproteinaI (aβ 2GPI) IgM/IgG e anticorpos anti Anexina V IgM/IgG. Para estimar as diferenças foi realizado o teste de Fisher com uma significância de 5%. Não foi detectado anticoagulante AL em qualquer uma das duas populações. A prevalência de ACL IgG foi maior nos dialisados que nos doadores (31,6% vs. 12,1%, p: 0,0056); a correspondente às anti β 2GPI foi semelhante (2,5% em dialisados vs. 7,6% em doadores, p: 0,2458), enquanto que o correspondente à anti Anexina V IgG foi maior em dialisados (16,4% vs. 4.5 %, p: 0,0316). Os resultados obtidos sugerem a importância de monitorar a presença de anticorpos antifosfolipídios e anti Anexina V antes de entrar em um plano de diálise para prevenção de eventos trombóticos.