Perfil de tolerancia al triclosán y detección de los genes MexA, MexC, AcrB y oqxA relacionados con la expresión de bombas de expulsión en aislados clínicos del género Enterobacter aerogenes y Enterobacter cloacae / Triclosan tolerance profile and detection of MexA, MexC, AcrB and oqxA genes related to the expression of expulsion pumps in clinical isolates of Enterobacter aero- genes and Enterobacter cloacae / Perfil de tolerância ao triclosan e detecção dos genes mexA, mexC, acrB e oqxA relacionados à expressão de bombas de expulsão em isolados clínicos do gênero Enterobacter aerogenes e Enterobacter cloacae

Introducción. La resistencia a los antimicrobianos y la tolerancia a biocidas está dada por mecanismos comunes, generados por su uso en diferentes ambientes; mecanismos como la expresión de bombas de expulsión presentes en bacterias del género Enterobacter circulantes amenaza la eficacia de los antimicrobianos limitando las opciones de terapia antibiótica. Objetivos: Determinar el perfil de tolerancia al triclosán y detección de genes asociados a bombas de expulsión en aislados clínicos de Enterobacter aerogenes y Enterobacter cloacae. Materiales y Métodos: Se realizó un estudio observacional, descriptivo y de corte transversal, se determinaron perfiles de tolerancia al triclosán por microdilución, de susceptibilidad antimicrobiana, confirmación fenotípica de mecanismos de resistencia, por reacción en cadena de la polimerasa, se identificó la presencia de genes que codifican para bombas de expulsión. Resultados: El 17% correspondió a Enterobacter cloacae y el 6% Enterobacter aerogenes. El 93,7% de los aislados clínicos del género Enterobacter presentó el fenotipo de resistencia BLEE y AmpC. En el 81,3% de los aislamientos se obtuvo la presencia de al menos un gen relacionado con las expresión de bombas de expulsión, siendo frecuentes MexC y AcrB; no identificó presencia del gen oqxA. Conclusiones: La resistencia a diferentes grupos de antibióticos se identifica en especies de Enterobacter circulante, así la presencia de enzimas BLEE y AmpC, la presencia de genes relacionados con bombas de expulsión y la alta tolerancia al triclosán. Palabras clave: Triclosán, Resistencia, Bombas de expulsión, Genes, Biocida

Introduction. Antimicrobial resistance and tolerance to biocides is given by common mechanisms, generated by the use of antimicrobial and biocidal substances in different environments, these me- chanisms such as the expression of expulsion pumps present in bacteria of the Enterobacter genus circulating threatens the efficacy of antimicrobials by limiting antibiotic therapy options. Objective: to determine the triclosan tolerance profile and detection of genes associated with expul- sion pumps in clinical isolates of Enterobacter aerogenes and Enterobacter cloacae. Materials and Methods: An observational, descriptive and the cross-sectional study was performed, triclosan tolerance profiles were determined by microdilution, antimicrobial susceptibility, phenotypic confirmation of resistance mechanisms, by the presence of polymerase chain reaction, the presence of genes that code for expulsion pumps. Results: The 17% corresponded to Enterobacter cloacae and 6% Enterobacter aerogenes. 93.7% of the clinical isolates of the genus Enterobacter presented the ESBL and AmpC resistance phenotype. In 81.3% of the isolates, the presence of at least one gene related to the expression of ejection pumps was obtained, with MexC and AcrB being frequent; did not identify the presence of the oqxA gene. conclusions: The resistance to different groups of antibiotics is identified in circulating Enterobacter species, as well as the presence of ESBL and AmpC enzymes, the presence of genes related to ejection pumps, and high tolerance to triclosan.

Introdução.A resistência antimicrobiana e a tolerância a biocidas esta dada pelos mecanismos comuns gerados pelo uso em diferentes ambientes; mecanismos como a expressão de bombas de expulsão presentes em bactérias do gênero Enterobacter circulantes ameaza a eficácia das antimicrobiana limitando as opções de terapia antibiótica. Objetivos: Determinar o perfil de tolerância ao triclosan e detecção dos genes asociados a bombas de expulsão em isolados clínicos Enterobacter aerogenes e Enterobacter cloacae. Materiais e Métodos: Realizou-se um estudo observacional, descritivo e de corte transversal, deter- minaram-se perfiles de tolerância ao triclosan por microdiluição, de susceptibilidade antimicrobiana, confirmação de mecanismos de resistência fenotípica por reação em cadeia da polimerase, identifi- cou-se a presença de genes que codificam para bombas de expulsão. Resultados: 17% correspondeu ao Enterobacter cloacae e 6% ao Enterobacter aerogenes. 93,7% em isolados clínicos do gênero Enterobacter presentou o fenótipo de resistência BLEE e AmpC. No 81% dos isolamentos se obteve a presença de pelo menos um gen relacionado à expressão de bombas de expulsão, sindo frequentes mexC e acrB; não se identificou a presença do gen oqxA. Conclusões: A resistência de diferentes grupos de antibióticos se identificou em espécies de Entero- bacter circulante, assim a presença de enzimas BLEE e AmpC, a presença de genes relacionados com bombas de expulsão e a alta tolerância ao triclosan.

Biocidal potential of Eugenia pyriformis essential oil in the control of Rhipicephalus (Boophilus) microplus in the free-living cycle / Potencial biocida do óleo essencial de Eugenia pyriformis Cambess no controle de Rhipicephalus (Boophilus) microplus no ciclo de vida livre

Brazil has one of the largest commercial cattle herds in the world, which naturally coexist with an enormous number of parasitic species. Southern cattle tick, Rhipicephalus (Boophilus) microplus, is among these species, interfering with animal productivity and causing losses to the beef and dairy cattle sector. The use of chemical acaricides in the control of this mite has resulted in the emergence of resistant populations. In this sense, alternative control measures using plants as sources of botanical acaricides have shown to be effective. Eugenia pyriformis Cambess is a Brazilian plant with antioxidant and antimicrobial activity; however, there are no reports on its acaricidal activity in the literature. The present study aimed to evaluate the acaricidal and larvicidal potential of E. pyriformis leaf essential oil (EO) on southern cattle tick at different stages of the reproductive cycle. E. pyriformis leaves were collected and dried, and had their EO extracted by hydrodistillation (3h) using a modified Clevenger apparatus. Chemical analysis was performed by gas chromatography coupled with mass spectrometry (GC/MS), and 32 compounds belonging to the sesquiterpene class were identified: hydrocarbons (17.98%) and oxygenated forms (81.96%), with spathulenol (43.65%) and caryophyllene oxide (12.17%) as the most common. The EO was evaluated by the Adult Immersion Test at the concentrations (500.00 to 3.12mg/mL) in which the following parameters were measured: mortality of females (%), hatchability of eggs (%), and product efficiency (%). Larvae were assessed by the Larval Packet Test at concentrations ranging from 25.00 to 0.00004mg/mL. Lethal concentrations (LC) required for killing 50 and 99.9% of adult females and larvae were determined using Probit analysis. LC50 and LC99.9 of EO were 0.06 and 24.60mg/mL and 1,208.80 and 2,538mg/mL for larvae and adult females, respectively. Action of the EO in the free-living cycle of R. (B.) microplus larvae was another parameter assessed. To this end, the larvae were deposited in pots containing Brachiaria decumbens and, after migration to the leaf apex, a solution containing LC99.9 (24.60mg/mL) of the EO was sprayed. After 24h, 72.25% of the larvae had died, indicating stability of the EO when subjected to uncontrolled temperature and humidity conditions. The mechanism of action through which the EO killed the larvae and adult females was investigated by the Bioautographic Method, which showed inhibition of 3.15mg/mL of the EO on the acetylcholinesterase (AChE) enzyme. The results found in the present experiment indicate that E. pyriformis essential oil is an alternative in the control of southern cattle tick in the larval (parasitic) and free-living cycle (non-parasitic) stages under field conditions.(AU)

O Brasil dispõe de um dos maiores rebanhos bovinos comerciais do mundo, sendo natural que junto a esse rebanho, coexista uma enorme quantidade de espécies parasitárias; dentre estes o carrapato Rhipicephalus (Boophilus) microplus que interfere na produtividade animal, causando prejuízos à pecuária de corte e leite. A utilização de acaricidas químicos no controle deste ácaro tem causado o surgimento de populações resistentes e neste sentido, controles alternativos utilizando plantas como fontes de acaricidas botânicos têm se mostrado eficazes. Eugenia pyriformis Cambess é uma planta brasileira com atividades antioxidante e antimicrobiana, entretanto não há relatos da atividade acaricida. O objetivo do presente estudo consistiu na avaliação do potencial acaricida e larvicida do óleo essencial das folhas de E. pyriformis sobre o carrapato bovino nos diferentes estágios do ciclo reprodutivo. As folhas foram coletadas, secas e o OE extraído por hidrodestilação (3 horas) em aparelho Clevenger modificado. A análise química foi realizada por cromatografia gasosa acoplada à espectrometria de massas (CG/EM) sendo identificados 32 compostos, pertencentes à classe sesquiterpenos: hidrocarbonetos (17.98%) e oxigenados (81.96%); tendo como majoritários o spathulenol (43,65%) e caryophylene oxide (12,17%). O OE foi avaliado pelo teste de imersão de adultos nas concentrações (500,00 a 3,12mg/mL) onde foram mensurados os parâmetros: mortalidade das fêmeas (%), eclodibilidade dos ovos (%) e eficiência do produto (%). As larvas foram avaliadas pelo teste de imersão larval (Larval Packet Test) nas concentrações que variaram de 25,00 a 0,00004mg/mL. Foram determinadas as concentrações letais (CLs) necessárias para matar 50 e 99,9% das fêmeas adultas e das larvas utilizando a análise de Probitos. As CL50 e CL99,9 do OE foram (0,06 e 24,60mg/mL) para as larvas e (1.208,80 e 2.538mg/mL) para as fêmeas adultas, respectivamente. Outro parâmetro avaliado em nossa pesquisa foi mensurar a ação do OE no ciclo de vida livre das larvas de R.(B.) microplus; onde as larvas foram depositadas em vasos com Brachiaria decumbens e após migração destas para o ápice das folhas, foi aspergido solução contendo a CL99,9 (24,60mg/mL) do OE. Após 24 horas, 72,25% das larvas morreram indicando que houve estabilidade do OE quando submetido a condições de temperatura e umidade não controladas. O mecanismo de ação pelo qual o OE matou as larvas e fêmeas adultas foi investigado pelo método bioautográfico, indicando uma inibição de 3,15mg/mL do óleo essencial sobre a enzima acetilcolinesterase (AChE). Os resultados encontrados no presente experimento indicaram que o óleo essencial de E. pyriformis é uma alternativa no controle do carrapato bovino no estágio larval (parasitário) e no ciclo de vida livre (estágio não parasitário) em condições de campo.(AU)

Effects of biocide exposure on P. Aeruginosa, E. coli and A. Baumannii complex isolates from hospital and household environments / Efectos de la exposición a biocidas en aislados ambientales de P. Aeruginosa, E. coli y del complejo A. Baumannii hospitalarios y de la comunidad

Background: Bacterial responses to biocide exposure and its effects on survival and persistence remain to be studied in greater detail. Aim: To analyse the viability and survival of environmental isolates from household and hospital settings after biocide exposure. Methods: The minimum inhibitory concentration (MIC) and minimum bactericidal concentration (MBC) of chlorhexidine (CHxG), benzalkonium chloride (BAC) and triclosan (TC) were determined in isolates of Pseudomonas aeruginosa, Acinetobacter baumannii complex and Escherichia coli collected from hospital and house- holds environments. Viability was monitored after exposure and removal of biocides using agar cultures and flow cytometry. Findings: P. aeruginosa isolates showed greater tolerance for all biocides tested whereas A. baumannii complex and E. coli were less tolerant. When compared with reference strains, biocide tolerance was up to 8 to 13-fold higher for TC and BAC respectively. Flow cytometry showed that biocide exposure may induce viable but non-growing states in P. aeruginosa and E. coli isolates before becoming fully replicative. Changes in the susceptibility profile in one isolate of A. baumannii complex were observed after biocide exposure. Discussion: Bacteria isolates from hospital and households were able to recover after biocide exposure at bactericidal concentrations favouring persistence and spread of biocide-tolerant strains. This study reinforces that cleaning compliance should be monitored by non-culture based tests. Novel formulations in cleaning and disinfection protocols should be revisited in hospitals harbouring P. aeruginosa and A. baumannii multidrug resistant isolates.

Introducción: El efecto de la exposición a biocidas en las poblaciones bacterianas, su viabilidad y persistencia requieren de estudios detallados. Objetivo: analizar la viabilidad y persistencia de bacterias de ambientes hospitalarios y domésticos posterior a la exposición a biocidas. Materiales y Métodos: En un estudio experimental in vitro se determinó la concentración inhibitoria mínima (CIM) y la concentración bactericida (CBM) para chlorhexidina (CHxG), cloruro de benzalconio (BAC) y triclcosan (TC) en aislados de Pseudomonas aeruginosa (10), el complejo Acinetobacter baumannii (5) y Escherichia coli (5) obtenidos de ambientes hospitalarios y domésticos. La viabilidad y susceptibilidad bacteriana después de la exposición y remoción del biocida fue evaluada por citometria de flujo y cultivo. Resultados: Independiente de su procedencia P. aeruginosa presentó mayor tolerancia a todos los biocidas. El complejo A. baumannii y E. coli fueron hasta 8 a 13 veces más tolerantes a BAC y TC que las cepas de referencia. Se observó que la exposición a biocidas altamente efectivos induce formas viables no replicativas en P. aeruginosa y E. coli. Un aislado del complejo A baumannii presentó cambios en el perfil de susceptibilidad posterior a la exposición. Discusión: Aislados tanto de ambiente hospitalario como de la comunidad pueden recuperarse después de la exposición a concentraciones bactericidas de los biocidas favoreciendo la persistencia y diseminación de bacterias no replicativas. Por lo anterior métodos alternativos al cultivo deben utilizarse en el seguimiento de protocolos de limpieza y desinfección. Los tiempos de recuperación de la viabilidad bacteriana deben tenerse en cuenta en la formulación de protocolos para erradicar y/o controlar cepas hospitalarias de P. aeruginosa o A. baumannii multirresistentes.

Evaluation of the antifungal activity by plant extracts against Colletotrichum gloeosporioides Penz / Avaliação da atividade anti-fúngica de extratos vegetais contra Colletotrichum gloeosporioides Penz

Aiming to develop more efficient and environmental friendly methods than those available to control Colletotrichum gloeosporioides Penz, which causes blister spot in coffee trees, a search for plants able to produce substances active against such pathogen was carried out. Thus, extracts of 48 plant species, collected at Alto Rio Grande region, in Minas Gerais, were prepared and submitted to in vitro assays with that fungus. The best results were obtained with the extracts prepared from Digitalis lanata Ehrh, Origanum manjorona L., Plantago lanceolata Hook. and Stevia rebaudiana (Bertoni) Bertoni, which inhibited C. gloeosporioides spores germination. After dilution of some active extracts with aqueous 1 percent Tween 80 solution in a 1:2 or 1:3 ratio (extract:aqueous solution), their antifungal activity vanished. Some of the active extracts were also submitted to freeze drying and none of them presented any alteration in their antifungal activity. Concluding, several plants presented potential to be used in the search for new bioactive substances to control C. gloeosporioides, especially O. manjorona L., which inhibited 96 percent of the fungus spores germination.

Com vistas a contribuir para o desenvolvimento de métodos mais eficientes e menos agressivos ao ambiente que aqueles disponíveis para o controle de Colletotrichum gloeosporioides Penz, causador da mancha manteigosa em cafeeiros, buscou-se identificar espécies vegetais produtoras de substâncias ativas contra o referido patógeno. Para tanto, prepararam-se extratos de 48 espécies vegetais, coletadas na região do Alto Rio Grande, em Minas Gerais, para serem submetidos a testes in vitro com o mencionado fungo. Constatou-se que os melhores resultados foram obtidos com os extratos oriundos de Digitalis lanata Ehrh, Origanum manjorona L., Plantago lanceolata Hook. e Stevia rebaudiana (Bertoni) Bertoni que inibiram a germinação dos esporos de C. gloeosporioides. Alguns dos extratos ativos também foram submetidos a diluições em solução aquosa de Tween 80 a 1 por cento, o que permitiu observar que, na proporção de 1:2 ou 1:3 (extrato: solução aquosa), os extratos perdiam a atividade antifúngica. Verificou-se também que alguns dos extratos ativos não alteraram suas atividades quando submetidos ao processo de liofilização. Desse modo, identificaram-se várias plantas promissoras na pesquisa por novas substâncias bioativas para o controle de C. gloeosporioides, com destaque para O. manjorona L., que inibiu 96 por cento da germinação dos esporos do referido fungo.

Evaluación del molibdato y nitrato sobre bacterias sulfato-reductoras asociadas a procesos de corrosión en sistemas industriales / Evaluation of molybdate and nitrate on sulphate-reducing bacteria related to corrosion processes in industrial systems

Se estudió la cinética de crecimiento de bacterias sulfato-reductoras (BSR) y la biotransformación de sulfato a sulfuro de hidrógeno bajo condiciones de laboratorio, para establecer el efecto inhibitorio de sales de molibdato y nitrato de sodio. Los microorganismos estudiados fueron aislados del agua de producción contenida en un sistema de transporte de gas natural, donde se encontraban relacionados con procesos de corrosión influenciada microbiológicamente. Con 5 mM de molibdato se obtuvo una reducción de células libres a niveles no detectables y de seis órdenes de magnitud en las biopelículas, con una disminución del sulfuro de alrededor del 100%. Con 75 mM de nitrato se observó una reducción de cuatro y dos órdenes de magnitud en las células libres y en las adheridas en forma de biopelículas, respectivamente, con una disminución del sulfuro de alrededor del 80%. La reducción de la tasa de corrosión observada sustenta la posibilidad de emplear estas sales como biocidas no convencionales no contaminantes del medio ambiente, para el control y mitigación efectiva de los procesos de biocorrosión interna de tanques de almacenamiento y de líneas de transporte en sistemas industriales de gas natural y petróleo.

The sulfate-reducing bacteria growth kinetics and the biotransformation of sulfate into hydrogen sulfide were studied under laboratory conditions, using batch and continuous assays to determine the effect of molybdate and nitrate as metabolic inhibitors. The microorganisms were isolated from water coming from a natural gas dehydration plant, where they were associated with Microbiologically Influenced Corrosion (MIC) processes, and later cultured in planktonic and sessile states. The addition of 5 mM molybdate showed a growth reduction to levels of non - detectable floating cells and a six order of magnitude reduction in biofilms, concomitant with a sulfide decrease of around 100% in all cultures inhibited by this compound. The addition of 75 mM nitrate showed a four order of magnitude reduction in free bacterial cells and a two order of magnitude reduction in adhered bacterial cells, respectively, as well as a sulfide decrease of around 80%. The decreased corrosion rate detected suggests that these inorganic salts could be nonconventional biocides for an effective and environmentally non contaminant way of controlling and mitigating internal biocorrosion processes in storage tanks and pipelines in natural gas and petroleum industrial systems.