A comparative study on the virulence of entomopathogenic fungi against Trogoderma granarium (Everts) (Coleoptera: Dermestidae) in stored grains rice / Um estudo comparativo da virulência de fungos entomopatogênicos contra Trogoderma granarium (Everts) (Coleoptera: Dermestidae) em grãos armazenados de arroz

Entomopathogenic fungi (EPF) now a possible safer microbial control measure that could be considered as a substitute for chemical control of insect pests. Three EPF viz., Metarihizium anisopliae, Isaria furnosoroseus and Beauveria bassiana were evaluated for their virulence against the grubs of Khapra beetle, Trogoderma granarium (Everts) under laboratory conditions. The isolates were applied by two methods viz., diet incorporation and an immersion method with 3rd instar 20 grubs of T. granarium for each. The virulence of EPF was determined using percent mortality. Significantly higher mortality was observed in M. anisopliae applied through immersion (98.33%) and diet incorporation (93.33%) methods followed by B. bassiana (90.83 and 85.83%, respectively). The mortality caused by I. furnosoroseus was statistically lower in immersion and diet incorporation methods i.e. 81.67 and 73.33%, respectively. Based on the immersion method, all EPF were studied for multiple conidial concentration i.e., 1×104, 1×105, 1×106, 1×107 and 1×108 under the same in-vitro conditions. All the isolates were pathogenic to grub of T. granarium at the highest conidial concentration. M. anisopliae was proved the most effective virulent resulting in 98.33% mortality of the pest with LT50 4.61 days at 1 × 108 conidial concentration followed by 90.83 and 81.67 percent mortality with 5.07 and 8.01 days LT50, in the application of B. bassiana and I. furnosoroseus, respectively. M. anisopliae showed higher efficacy and could be considered as promising EPF for the development of myco-insecticides against effective biocontrol of T. granarium.

Os fungos entomopatogênicos (FPE) são agora a possível medida de controle microbiano mais segura, que pode ser considerada um substituto para o controle químico de pragas de insetos. Três EPF viz., Metarihizium anisopliae, Isaria furnosoroseus e Beauveria bassiana foram avaliados quanto à sua virulência contra as larvas do besouro Khapra, Trogoderma granarium (Everts) em condições de laboratório. Os isolados foram aplicados por dois métodos, a saber: incorporação de dieta e um método de imersão com 20 larvas de T. granarium de 3º ínstar para cada um. A virulência do EPF foi determinada usando a mortalidade percentual. Mortalidade significativamente maior foi observada em M. anisopliae aplicado pelos métodos de imersão (98,33%) e incorporação de dieta (93,33%), seguido por B. bassiana (90,83% e 85,83%, respectivamente). A mortalidade causada por I. furnosoroseus foi estatisticamente menor nos métodos de imersão e incorporação de dieta, ou seja, 81,67% e 73,33%, respectivamente. Com base no método de imersão, todos os EPFs foram estudados para múltiplas concentrações de conídios, ou seja, 1 × 104, 1 × 105, 1 × 106, 1 × 107 e 1 × 108 nas mesmas condições in vitro. Todos os isolados foram patogênicos à larva de T. granarium na maior concentração de conídios. M. anisopliae provou ser o virulento mais eficaz, resultando em 98,33% de mortalidade da praga com LT50 4,61 dias na concentração de 1 × 108 conídios seguido por 90,83% e 81,67% de mortalidade com 5,07 e 8,01 dias LT50, na aplicação de B. bassiana e I. furnosoroseus, respectivamente. M. anisopliae apresentou maior eficácia e pode ser considerada como um PFE promissor para o desenvolvimento de micoinseticidas contra o biocontrole efetivo de T. granarium.

A comparative study on the virulence of entomopathogenic fungi against Trogoderma granarium (Everts) (Coleoptera: Dermestidae) in stored grains rice

Abstract Entomopathogenic fungi (EPF) now a possible safer microbial control measure that could be considered as a substitute for chemical control of insect pests. Three EPF viz., Metarihizium anisopliae, Isaria furnosoroseus and Beauveria bassiana were evaluated for their virulence against the grubs of Khapra beetle, Trogoderma granarium (Everts) under laboratory conditions. The isolates were applied by two methods viz., diet incorporation and an immersion method with 3rd instar 20 grubs of T. granarium for each. The virulence of EPF was determined using percent mortality. Significantly higher mortality was observed in M. anisopliae applied through immersion (98.33%) and diet incorporation (93.33%) methods followed by B. bassiana (90.83 and 85.83%, respectively). The mortality caused by I. furnosoroseus was statistically lower in immersion and diet incorporation methods i.e. 81.67 and 73.33%, respectively. Based on the immersion method, all EPF were studied for multiple conidial concentration i.e., 1×104, 1×105, 1×106, 1×107 and 1×108 under the same in-vitro conditions. All the isolates were pathogenic to grub of T. granarium at the highest conidial concentration. M. anisopliae was proved the most effective virulent resulting in 98.33% mortality of the pest with LT50 4.61 days at 1 × 108 conidial concentration followed by 90.83 and 81.67 percent mortality with 5.07 and 8.01 days LT50, in the application of B. bassiana and I. furnosoroseus, respectively. M. anisopliae showed higher efficacy and could be considered as promising EPF for the development of myco-insecticides against effective biocontrol of T. granarium.

Resumo Os fungos entomopatogênicos (FPE) são agora a possível medida de controle microbiano mais segura, que pode ser considerada um substituto para o controle químico de pragas de insetos. Três EPF viz., Metarihizium anisopliae, Isaria furnosoroseus e Beauveria bassiana foram avaliados quanto à sua virulência contra as larvas do besouro Khapra, Trogoderma granarium (Everts) em condições de laboratório. Os isolados foram aplicados por dois métodos, a saber: incorporação de dieta e um método de imersão com 20 larvas de T. granarium de 3º ínstar para cada um. A virulência do EPF foi determinada usando a mortalidade percentual. Mortalidade significativamente maior foi observada em M. anisopliae aplicado pelos métodos de imersão (98,33%) e incorporação de dieta (93,33%), seguido por B. bassiana (90,83% e 85,83%, respectivamente). A mortalidade causada por I. furnosoroseus foi estatisticamente menor nos métodos de imersão e incorporação de dieta, ou seja, 81,67% e 73,33%, respectivamente. Com base no método de imersão, todos os EPFs foram estudados para múltiplas concentrações de conídios, ou seja, 1 × 104, 1 × 105, 1 × 106, 1 × 107 e 1 × 108 nas mesmas condições in vitro. Todos os isolados foram patogênicos à larva de T. granarium na maior concentração de conídios. M. anisopliae provou ser o virulento mais eficaz, resultando em 98,33% de mortalidade da praga com LT50 4,61 dias na concentração de 1 × 108 conídios seguido por 90,83% e 81,67% de mortalidade com 5,07 e 8,01 dias LT50, na aplicação de B. bassiana e I. furnosoroseus, respectivamente. M. anisopliae apresentou maior eficácia e pode ser considerada como um PFE promissor para o desenvolvimento de micoinseticidas contra o biocontrole efetivo de T. granarium.

A comparative study on the virulence of entomopathogenic fungi against Trogoderma granarium (Everts) (Coleoptera: Dermestidae) in stored grains rice / Um estudo comparativo da virulência de fungos entomopatogênicos contra Trogoderma granarium (Everts) (Coleoptera: Dermestidae) em grãos armazenados de arroz

Entomopathogenic fungi (EPF) now a possible safer microbial control measure that could be considered as a substitute for chemical control of insect pests. Three EPF viz., Metarihizium anisopliae, Isaria furnosoroseus and Beauveria bassiana were evaluated for their virulence against the grubs of Khapra beetle, Trogoderma granarium (Everts) under laboratory conditions. The isolates were applied by two methods viz., diet incorporation and an immersion method with 3rd instar 20 grubs of T. granarium for each. The virulence of EPF was determined using percent mortality. Significantly higher mortality was observed in M. anisopliae applied through immersion (98.33%) and diet incorporation (93.33%) methods followed by B. bassiana (90.83 and 85.83%, respectively). The mortality caused by I. furnosoroseus was statistically lower in immersion and diet incorporation methods i.e. 81.67 and 73.33%, respectively. Based on the immersion method, all EPF were studied for multiple conidial concentration i.e., 1×104 , 1×105, 1×106, 1×107 and 1×108 under the same in-vitro conditions. All the isolates were pathogenic to grub of T. granarium at the highest conidial concentration. M. anisopliae was proved the most effective virulent resulting in 98.33% mortality of the pest with LT50 4.61 days at 1 × 108 conidial concentration followed by 90.83 and 81.67 percent mortality with 5.07 and 8.01 days LT50, in the application of B. bassiana and I. furnosoroseus, respectively. M. anisopliae showed higher efficacy and could be considered as promising EPF for the development of myco-insecticides against effective biocontrol of T. granarium.

Os fungos entomopatogênicos (FPE) são agora a possível medida de controle microbiano mais segura, que pode ser considerada um substituto para o controle químico de pragas de insetos. Três EPF viz., Metarihizium anisopliae, Isaria furnosoroseus e Beauveria bassiana foram avaliados quanto à sua virulência contra as larvas do besouro Khapra, Trogoderma granarium (Everts) em condições de laboratório. Os isolados foram aplicados por dois métodos, a saber: incorporação de dieta e um método de imersão com 20 larvas de T. granarium de 3º ínstar para cada um. A virulência do EPF foi determinada usando a mortalidade percentual. Mortalidade significativamente maior foi observada em M. anisopliae aplicado pelos métodos de imersão (98,33%) e incorporação de dieta (93,33%), seguido por B. bassiana (90,83% e 85,83%, respectivamente). A mortalidade causada por I. furnosoroseus foi estatisticamente menor nos métodos de imersão e incorporação de dieta, ou seja, 81,67% e 73,33%, respectivamente. Com base no método de imersão, todos os EPFs foram estudados para múltiplas concentrações de conídios, ou seja, 1 × 104, 1 × 105, 1 × 106, 1 × 107 e 1 × 108 nas mesmas condições in vitro. Todos os isolados foram patogênicos à larva de T. granarium na maior concentração de conídios. M. anisopliae provou ser o virulento mais eficaz, resultando em 98,33% de mortalidade da praga com LT50 4,61 dias na concentração de 1 × 108 conídios seguido por 90,83% e 81,67% de mortalidade com 5,07 e 8,01 dias LT50, na aplicação de B. bassiana e I. furnosoroseus, respectivamente. M. anisopliae apresentou maior eficácia e pode ser considerada como um PFE promissor para o desenvolvimento de micoinseticidas contra o biocontrole efetivo de T. granarium.

Efecto Ecotoxicológico de la Mezcla de Aroclor 1254 y Plomo en el Bioindicador Daphnia magna / Ecotoxicological effect of the mixture of Aroclor 1254 and lead in the bioindicator Daphnia magna / Efeito ecotoxicológico da mistura de aroclor 1254 e chumbo no bioindicador Daphnia magna

Resumen Introducción: el bioensayo con la especie bioindicadora Daphnia magna Strauss, 1820 posibilita obtener el efecto ecotoxicológico agudo individual y en mezcla de diversos tóxicos químicos mediante la concentración letal media (CL50). Objetivo: determinar el efecto ecotoxicológico de la mezcla de aroclor 1254 y del plomo (Pb2+) sobre D. magna. Materiales y Métodos: se midió la CL50 siendo aroclor 1254 > Pb2+, y ulteriormente la concentración sin efecto ecológico (PNEC) para el efecto individual y en mezcla. Se contrastaron los valores de PNEC con la categoría 4 - E1 (lagunas y lagos) y E2 (ríos) del Estándar de Calidad Ambiental Peruano (Decreto Supremo N° 004 2017-MINAM -Perú). Resultados: los valores de CL50 disminuyeron de forma gradual a 48 h de exposición para ambos compuestos en forma individual y en mezcla. Se calculó la proporción - sinergia (PS) en relaciones de 1:1, 3:2 y 4:1 (aroclor 1254: Pb2+), obteniéndose mayores valores de PS en 3:2 y 4:1 en contrastación a 1:1. Conclusiones: la concentración de aroclor 1254 estimada de PNEC es similar al valor de la conservación del ambiente acuático categoría 4 - E1 y E2, y la concentración máxima para Pb2+ no es adecuada y debe reducirse para fortalecer la conservación de la biota acuática. Finalmente, el bioindicador D. magna determinó idóneamente la mezcla de aroclor 1254 y Pb2+.

Abstract Introduction: the bioassay with the bioindicator species Daphnia magna Strauss, 1820 makes it possible to obtain the individual acute ecotoxicological effect and in a mixture of various chemical toxics by means of the mean lethal concentration (LC50). Objective: to determine the ecotoxicological effect of the mixture of aroclor 1254 and lead (Pb2+) on D. magna. Materials and Methods: LC50 was measured with arochlor 1254> Pb2+, and subsequently the concentration without ecological effect (PNEC) for the individual effect and as a mixture. PNEC values were contrasted with category 4-E1 (lagoons and lakes) and E2 (rivers) of the Peruvian Environmental Quality Standard (Supreme Decree No. 004 2017-MINAM-Peru). Results: LC50 values gradually decreased after 48 h of exposure for both compounds individually and as a mixture. The proportion-synergy (PS) was calculated in ratios of 1:1, 3:2 and 4:1 (arochlor 1254: Pb2+), obtaining higher PS values in 3:2 and 4:1 in contrast to 1:1. Conclusions: the PNEC estimated arochlor 1254 concentration is similar to the conservation value of the aquatic environment category 4-E1 and E2, and the maximum concentration for Pb2+ is not adequate and should be reduced to strengthen the conservation of aquatic biota. Finally, the bioindicator D. magna ideally determined the mixture of aroclor 1254 and Pb2+.

Resumo Introdução: o bioensaio com as espécies bioindicadoras Daphnia magna Strauss, 1820 permite obter o efeito ecotoxicológico agudo individual e numa mistura de várias toxinas químicas por meio da concentração letal média (CL50). Objetivo: determinar o efeito ecotoxicológico da mistura de arocloro 1254 e chumbo (Pb2+) sobre D. magna. Materiais e Métodos: a CL50 foi medida com arocloro 1254>Pb2+, e posteriormente a concentração sem efeito ecológico (PNEC) para o efeito individual e como mistura. Os valores do PNEC foram contrastados com a categoria 4-E1 (lagoas e lagos) e E2 (rios) do Padrão de Qualidade Ambiental Peruano (Decreto Supremo n° 004 2017-MINAM-Peru). Resultados: Os valores de LC50 diminuíram gradualmente após 48 h de exposição para ambos os compostos individualmente e como uma mistura. A proporção-sinergia (PS) foi calculada em proporções de 1:1, 3:2 e 4:1 (arocloro 1254: Pb2+), obtendo-se valores de PS mais altos em 3:2 e 4:1 em contraste com 1:1. Conclusões: a concentração estimada de arocloro 1254 do PNEC é semelhante ao valor de conservação do ambiente aquático categoria 4-E1 e E2, e a concentração máxima de Pb2+ não é adequada e deve ser reduzida para fortalecer a conservação da biota aquática. Finalmente, o bioindicador D. magna determinou idealmente a mistura de arocloro 1254 e Pb2+.

Molecular characterization of Toxoplasma gondii isolates from free-range chickens reveals new genotypes in Goiânia, Goiás, Brazil / Caracterização molecular de Toxoplasma gondii isolados de galinhas caipiras revela novos genótipos em Goiânia, Goiás, Brasil

Abstract The aim of this study was to evaluate the genotypic characteristics of Toxoplasma gondii isolated from free-range chickens in the metropolitan area of Goiânia, Goiás, in Brazil's central-west region. The seroprevalence rate was found to be 96%, according to an indirect hemagglutination assay. Brain and heart samples were processed by peptic digestion for a mice bioassay. The tissues were homogenized and the resulting samples were subjected to polymerase chain reaction (PCR), which revealed that 64% of them contained the parasite's DNA. The mice bioassay revealed 15 isolates, 8 of them tachyzoites isolates from the peritoneal lavage and 7 from brain cysts. T. gondii genotypes were determined through PCR-RFLP, using the following markers: SAG1, SAG2, SAG3, BTUB, GRA6, c22-8, c29-2, L358, PK1, alt. SAG2, Apico and CS3. Three genotypes were identified, inclued ToxoDB #65, and the other two are not yet described in the literature. Hence, we conclude that the isolates obtained from the metropolitan area of Goiânia showed relatively low genetic diversity.

Resumo O objetivo deste estudo foi avaliar as características genotípicas de Toxoplasma gondii isolados de galinhas caipiras da Região Metropolitana de Goiânia, Goiás, Região Centro Oeste do Brasil. A soroprevalência foi de 96% dos animais, determinada por hemaglutinação indireta. As amostras de cérebro e coração foram processadas através da digestão péptica para o bioensaio em camundongos. Os tecidos foram homogeneizados, e as amostras resultantes foram analisadas por reação em cadeia da polimerase (PCR), que possibilitou a detecção do DNA do parasito em 64% deles. Por meio do bioensaio em camundongos, foi possível detectar 15 isolados, 8 deles apresentando taquizoítos na lavagem peritoneal e 7 apresentando cistos cerebrais. A determinação dos genótipos de T. gondii foi realizada por PCR-RFLP com os seguintes marcadores: SAG1, SAG2, SAG3, BTUB, GRA6, c22-8, c29-2, L358, PK1, alt. SAG2, Apico e CS3. Foi possível definir 3 genótipos, incluindo o ToxoDB # 65 e dois deles ainda não foram descritos na literatura. Portanto, conclui-se que os isolados obtidos na região metropolitana de Goiânia apresentaram diversidade genética relativamente baixa.

Toxoplasma gondii genotyping from free-range chickens (Gallus gallus domesticus) in a rural area of Rio Grande do Sul, Brazil / [Genotipagem de Toxoplasma gondii em galinhas domésticas em uma área rural do Rio Grande do Sul, Brasil]

Free-range chickens may ingest oocysts of T. gondii present in the environment and consequently harbor virulent strains of this parasite in different tissues, without any clinical signs. Isolation of T. gondii through bioassays on mice and cats from naturally infected chicken tissues has been described in several countries, demonstrating the importance of free-range chickens in the transmission of this parasite. The aim of this study was the genotypic characterization of T. gondii isolates obtained from naturally infected free-range chickens in a rural area of the state of Rio Grande do Sul, Brazil. Brain and heart tissue from 12 chickens seropositive for T. gondii were processed using peptic digestion technique for parasite isolation. From 12 samples subjected to mouse bioassay, nine isolates were obtained. RFLP-PCR genotypic characterization was performed using 11 genetic markers: SAG1, 5'-3'SAG2, alt.SAG2, SAG3, BTUB, GRA6, c22-8, c29-2, L358, PK1 and Apico. Genetic characterization of the isolates revealed the presence of five atypical genotypes according to ToxoDB (# 11, # 55, # 64, # 140 and # 163). Our results showed a wide genetic diversity of T. gondii in free-range chickens in this region.(AU)

Galinhas criadas ao ar livre podem ingerir oocistos de T. gondii presentes no ambiente e, com isso, albergar cepas virulentas desse parasita em diferentes tecidos, sem sinais clínicos. O isolamento de T. gondii por meio de bioensaios em camundongos e gatos, a partir de tecidos de galinhas naturalmente infectadas, tem sido descrito em vários países. Isso demonstra a importância das galinhas caipiras na epidemiologia desse parasita. O objetivo deste trabalho foi caracterizar genotipicamente isolados de T. gondii obtidos de galinhas caipiras naturalmente infectadas em uma área rural do município de Santa Maria, estado do Rio Grande do Sul, Brasil. Fragmentos de cérebro e de coração, de 12 galinhas soropositivas para T. gondii, foram processados pela técnica de digestão péptica para isolamento do parasita. Das 12 amostras submetidas a bioensaio com camundongos, nove isolados foram obtidos. A caracterização genotípica por RFLP-PCR foi realizada utilizando-se 11 marcadores genéticos: SAG1, 5'-3'SAG2, alt.SAG2, SAG3, BTUB, GRA6, c22-8, c29-2, L358, PK1 e Apico e revelou a presença de cinco genótipos atípicos de acordo com o ToxoDB (# 11, # 55, # 64, # 140 e # 163). Os resultados mostraram uma ampla diversidade genética de T. gondii em galinhas caipiras nessa região.(AU)

Estimation of sulfentrazone sorption in isolated application and mixed with glyphosate / Estimativa da sorção do sulfentrazone na aplicação isolada e em mistura com glifosato

The use of herbicides belonging to a single mechanism of action for several consecutive years in the same area may lead to the selection of weed biotypes resistant to herbicides. Weeds resistant to glyphosate have been problem worldwide. As an alternative control, farmers have used glyphosate mixed with sulfentrazone. When two herbicides are mixed, the parameters that govern the behaviour of herbicides in the soil can be altered. In this study, the sorption of sulfentrazone was estimated when applied in isolation with glyphosate formulations. For this, increasing doses of sulfentrazone were applied using Red-Yellow Latosol substrate and washed sand. Each dose of sulfentrazone was applied in a mixture with 1080 g a. e. ha-1 Roundup Ready®, Roundup Ultra® and Zapp Qi®. To evaluate the presence of sulfentrazone in the soil solution, Sorghum bicolor was used as an indicator species. Symptoms of intoxication were evaluated at 7, 14 and 21 days after sowing. At 21 days after sowing, the plants were collected and dried in an oven at 70 ± 10 °C to determine the dry matter. Based on the intoxication of the indicator plants, it was verified that, regardless of the formulation, the presence of glyphosate in the mixture increased the sorption of sulfentrazone in the Red-Yellow Latosol. However, based on dry matter accumulation, sulfentrazone sorption increased because of the mixture with Roundup Ultra®, but decreased due to the presence of Roundup Ready® and Zapp Qi®. Therefore, the application of sulfentrazone in mixture with glyphosate alters the sorptive forces of sulfentrazone in a Red-Yellow Latosol.

A utilização de herbicidas pertencentes a um único mecanismo de ação por vários anos consecutivos na mesma área pode levar a seleção de biótipos de plantas daninhas resistentes a herbicidas. Plantas daninhas resistentes ao glyphosate têm sido problema no mundo inteiro. Como alternativa de controle, os agricultores têm utilizado glyphosate em mistura com sulfentrazone. Quando se misturam duas moléculas herbicidas, os parâmetros que governam o comportamento de herbicidas no solo podem ser alterados. Neste estudo foi estimada a sorção do sulfentrazone quando aplicado de forma isolada e em mistura com formulações de glyphosate. Para isso, doses crescentes de sulfentrazone foram aplicadas utilizando-se como substrato Latossolo Vermelho-Amarelo e areia lavada. Cada uma das doses de sulfentrazone foi aplicada em mistura com 1080 g ha-1 de glyphosate comercializado nas formulações Roundup Ready®, Roundup Ultra® e Zapp Qi®. Para avaliar a presença do sulfentrazone na solução do solo utilizou-se o Sorghum bicolor como espécie indicadora. Os sintomas de intoxicação foram avaliados aos 7, 14 e 21 dias após a semeadura. Aos 21 dias após a semeadura, as plantas foram coletadas e secadas em estufa a 70 ±10C para determinação da matéria seca. Com base na intoxicação das plantas indicadoras, verificou-se que, independente da formulação, a presença glyphosate na mistura, aumentou a sorção do sulfentrazone no Latossolo Vermelho-Amarelo. No entanto com base no acúmulo de matéria seca, constatou-se que a sorção do sulfentrazone aumentou em função da mistura com Roundup Ultra®, mas diminuiu devido a presença de Roundup Ready® e Zapp Qi®. Conclui-se que a aplicação de sulfentrazone em mistura com glyphosate altera as forças sortivas do sulfentrazone no Latossolo Vermelho-Amarelo.

An outbreak of caprine toxoplasmosis - investigation and case report / Surto de toxoplasmose caprina - investigação e relato de caso

ABSTRACT: The present study aimed to investigate an abortion outbreak in a dairy goat herd in the municipality of Arapoti, Parana, Brazil. At the beginning of the outbreak, blood samples were collected from 33 goats with clinical signs; later, of the whole goat herd, two cats and two dogs. Milk samples were collected from 78 lactating goats. Four environmental soil samples and four samples of feed residue from goat feeders were collected too. Immunofluorescence antibody test (IFA) was used for serodiagnosis, the molecular analysis was conducted by means of the polymerase chain reaction (PCR), for the isolation of the etiological agent the bioassay was used. The results of the IFA revealed that 76.53% (137/179) of the goats, two dogs and two cats were seropositive for Toxoplasma gondii. Bioassay revealed one buffy coat and two milk sample having viable T. gondii. In the PCR, 11 whole blood samples, eight milk, three feeder troughs, and all soil samples were positive. The findings of the present study confirmed an outbreak caused by environmental contamination (of soil and feed) with T. gondii oocysts that could have been shed by kittens that lived on the farm and had access to the stock of goat food, facilitating this contamination, which reinforces the need for veterinary assistance and good management practices on farms.

RESUMO: O presente estudo teve como objetivo investigar um surto de aborto em um rebanho de cabras leiteiras no município de Arapoti, Paraná, Brasil. No início do surto, foram coletadas amostras de sangue de 33 cabras com sinais clínicos; mais tarde, de todo o rebanho caprino, dois gatos e dois cachorros. Foram obtidas amostras de leite das 78 cabras em lactação. Quatro amostras ambientais de solo e quatro de resíduos de comedouro também foram coletadas. O teste de imunofluorescência (IFI) foi utilizado para o sorodiagnóstico, a análise molecular foi conduzida por meio da reação em cadeia da polimerase (PCR), para isolamento do agente etiológico utilizou-se o bioensaio. Os resultados da IFI revelaram que 76,53% (137/179) das cabras, todos os cães e gatos eram soropositivos para Toxoplasma gondii. O bioensaio revelou uma amostra de camada leucocitária e duas de leite contaminadas com T. gondii viável. Na PCR, 11 amostras de sangue total, oito de leite, três resíduos alimentares e todas as amostras de solo foram positivas. Os resultados do presente estudo confirmaram um surto causado por contaminação ambiental (de solo e alimentos) com oocistos de T. gondii que, provavelmente, foram eliminados por gatos que permaneceram na fazenda e tinham acesso ao estoque de alimento dos caprinos, reforçando a necessidade de assistência técnica veterinária e boas práticas de manejo.

Acaricidal activity of ethanolic extracts of Stryphnodendron adstringens and Lafoensia pacari and oil resins from Copaifera sp. and Pterodon emarginatus against Sarcoptes scabiei var. suis / Atividade acaricida dos extratos etanólicos de Stryphnodendron adstringens Mart. e Lafoensia pacari A. St Hil., bem como das óleo-resinas de Copaifera sp. e Pterodon emarginatus Vogel, 1837 contra Sarcoptes scabiei var. suis

In vitro bioassay using Sarcoptes scabiei as a test microorganism is a viable method of study for diverse drugs with acaricidal properties. A great amount of assays proves the diverse and efficient biological activity of extracts and compounds from Brazilian savanna plants. This study had as main object, test and compare the acaricidal activity of four Brazilian Cerrado bioproducts: Stryphnodendron adstringens Mart., Copaifera sp., Lafoensia pacari A. St Hil. and Pterodon emarginatus Vogel, 1837. To perform this test S. scabiei mites were collected from crusts removed on ears of highly infected sows. The mites were selected and separated in Petri dishes with three different concentrations (25, 50 and 75%) of each bioproduct, to evaluate their potential acaricidal activity. The mortality of the mites was counted in each Petri dish every hour, during five hours. The statistical analyses demonstrated differences between the bioproducts tested. The oleoresin of Copaifera sp. and P. emarginatus presented the best results with 100% of mites mortality after treatment. The ethanolic extracts of S. adstringens and L. pacari demonstrated lower acaricidal activity when compared to the oleoresins, with little or no difference among the control groups tested. This bioassay demonstrated to be efficient, reliable, low cost and easy accomplishment. Oil resins from Copaifera sp. and P. emarginatus have in vitro acaricidal activity against adult females of S. scabiei var. suis.(AU)

O uso de Sarcoptes scabiei como microrganismo teste para bioensaio in vitro é um método de estudo viável para diversas drogas acaricidas. Muitos ensaios comprovam a diversidade e eficiência de atividade biocida de extratos e componentes presentes em plantas do cerrado brasileiro. Este trabalho objetivou testar e comparar a atividade acaricida de quatro bioprodutos do cerrado brasileiro: Stryphnodendron adstringens Mart., Lafoensia pacari A. St Hil., Copaifera sp. e Pterodon emarginatus Vogel, 1837. Para este estudo, ácaros S. scabiei foram colhidos em crostas removidas de orelhas de fêmeas suínas altamente infestadas. Os ácaros foram selecionados, separados e colocados em placas de Petri com três diferentes concentrações (25, 50 e 75%) de bioprodutos, para avaliar o potencial de atividade acaricida de cada um. Foi realizada a contagem da mortalidade dos ácaros em cada placa de Petri a cada hora, durante cinco horas. As análises estatísticas demonstraram diferenças entre os bioprodutos testados. As óleo-resinas de Copaifera sp. e P. emarginatus apresentaram os melhores resultados, com 100% de mortalidade dos ácaros após tratamento. Os extratos etanólicos de S. adstringens Mart. e L. pacari demonstraram menor atividade acaricida quando comparados as óleo-resinas, com pequena ou nenhuma diferença entre os resultados dos grupos controle. Este ensaio demonstrou ser uma ferramenta eficiente, confiável, de baixo custo e de fácil realização. As óleo-resinas Copaifera sp. e P. emarginatus possuem atividade acaricida in vitro sobre fêmeas adultas de S. scabiei var. suis.(AU)

Type C waterborne botulism outbreaks in buffaloes (Bubalus bubalis) in the Amazon region / Surtos de botulismo hídrico tipo C em búfalos (Bubalus bubalis) na região amazônica

Botulism is a poisoning caused by botulinum neurotoxins (BoNTs). BoNTs serotypes C and D are involved in botulism outbreaks in cattle in several countries. Despite the high number of buffaloes worldwide, the real impact of botulism in buffaloes is not known, because it is not a notifiable disease in Brazil and only few studies have evaluated the occurrence of the disease in buffaloes. Those studies did not conduct diagnostic tests to confirm the presence of BoNTs. The objective of the present study was to describe three outbreaks of botulism in buffaloes in the Brazilian Amazon region considering epidemiological and clinical data as well as laboratory diagnosis to confirm the presence of BoNTs. The results of the bioassay were negative in the tissues and in feed samples, but positive for BoNT C in water samples. Confirmation of the occurrence of botulism in buffaloes allows the implementation of preventive strategies in susceptible herds. Waterborne botulism in buffaloes is prevented by ensuring the constant circulation of water collections and restricting the presence of dead animals and bones in order to prevent the accumulation of organic matter and the development of anaerobic conditions, which might favor the replication of Clostridium botulinum. Another measure that can be adopted is the shading of the pasture, in order to maintain the thermal comfort for the buffaloes and to avoid the excess of permanence of them in the water pools.(AU)

Botulismo é uma intoxicação causada por neurotoxinas botulínicas (BoNTs). Os sorotipos C e D de BoNTs estão envolvidos em surtos de botulismo em bovídeos em vários países. Apesar do elevado número de búfalos em todo o mundo, o real impacto do botulismo em búfalos não é conhecido; pois não é uma doença de notificação obrigatória no Brasil e poucos estudos avaliaram a incidência desta doença em búfalos. Além disso, estes estudos não realizaram testes diagnósticos para confirmar a presença de BoNTs. O objetivo do presente estudo foi descrever três surtos de botulismo em búfalos na região amazônica brasileira, considerando dados epidemiológicos e clínicos, bem como o diagnóstico laboratorial para confirmar a presença de BoNTs. Os resultados do bioensaio em camundongos foram negativos em todos os tecidos e nas amostras de alimentos testados; no entanto foram positivos para BoNT C nas amostras de água. A confirmação da ocorrência de botulismo em búfalos permite a implementação de estratégias preventivas nos rebanhos. O botulismo hídrico nos búfalos pode ser prevenido assegurando-se que coleções de água fossem mantidas limpas, sem a presença de animais mortos e ossadas no seu interior e não permitindo o acúmulo de matéria orgânica e condições de anaerobiose favoráveis à multiplicação de Clostridium. botulinum. Outra medida que pode ser adotada é o sombreamento das pastagens, a fim de manter o conforto térmico dos búfalos e assim evitar o excesso de sua permanência dentro das fontes de água.(AU)

Sensitivity of two isolates of Phakopsora pachyrhizi to dithiocarmamate, chloronitril, triazoles, strobilurins, and carboxamides fungicides / Sensibilidade de Phakopsora pachyrhizi aos fungicidas ditiocarbamatos, cloronitrilas, triazóis, estrobilurinas e carboxamidas

Asian soybean rust (ASR), caused by the phytopathogen Phakopsora pachyrhizi Sydow & Sydow, is a worldwide distributed fungal disease responsible for causing damages in soybean crops [Glycine max (L.) Merril] of up to 90% of its productive potential. So far, due to limited availability of resistant varieties, fungicide application is the most widely used strategy for ASR control, although some populations of the pathogen have shown reduced sensitivity to certain active ingredients. Several methods have been described to measure the sensitivity of a fungus to a given fungicide, or even the fungitoxicity of a chemical. The most used tests are spore germination in wateragar medium and evaluation of disease severity in detached soybean leaves. Experiments were carried out with Brazilian populations of the pathogen: one from Uberlândia - MG and the other from Chapadão do Sul - MS, following the mentioned methodologies. The results showed the reduction of benzovindiflupyr efficiency in relation to spore germination and disease severity for the MS population, as also did fluxapyroxad, cyproconazole, and tebuconazole. Multisite fungicides (chlorothalonil, copper oxychloride, and mancozeb) may be used in the management of ASR resistance in the fields of Brazil associated with strobilurins, triazoles, and carboxamides. The efficiency of the main active ingredient tested depends on the formulation and others molecules used in the commercial product.

A ferrugem asiática da soja (FAS), causada pelo fitopatógeno Phakopsora pachyrhizi Sydow & Sydow, é uma doença fúngica distribuída mundialmente e responsável por causar danos na cultura da soja [Glycine max (L.) Merril], em até 90% do potencial produtivo. Até agora, devido à limitada disponibilidade de variedades resistentes, a aplicação de fungicida é a estratégia mais utilizada para controlar a FAS, embora algumas populações do patógeno tenham demonstrado menor sensibilidade a determinados ingredientes ativos. Vários métodos foram descritos para medir a sensibilidade de um fungo a um dado fungicida, ou para monitorar sua redução ou perda de eficácia, ou mesmo a fungitoxicidade de um produto químico. Os testes mais utilizados são a germinação de esporos in vitro e a severidade da doença (%) em folhas de soja destacadas. Baseando-se nessas metodologias, foram realizados ensaios com populações do patógeno oriundas de Uberlândia - MG e do Chapadão do Sul - MS. Os resultados mostraram a redução da eficiência de benzovindiflupyr em relação à germinação e à severidade de doença para a população de Chapadão do Sul - MS. O mesmo comportamento foi obtido para os ingredientes ativos fluxapyroxad, cyproconazole e tebuconazole. Os fungicidas multissítios (clorotalonil, oxicloreto de cobre e mancozeb) podem ser utilizados no manejo da resistência à FAS nas lavouras do Brasil associados às estrobilurinas, triazóis e carboxamidas. A eficiência do principal ingrediente ativo estudado depende dos outros ingredientes ativos ou fungicidas associados na formulação comercial.

Genetic characterization of Toxoplasma gondii isolates from eared doves (Zenaida auriculata) in Brazil / Caracterização genética de isolados de Toxoplasma gondii de pombos (Zenaida auriculata) no Brasil

Eared doves (Zenaida auriculata), which are common in urban, rural and wild areas in many regions of Brazil, are frequently prey for domestic cats. Therefore Toxoplasma gondii isolates obtained from doves may reflect greater environmental diversity than those from other hosts. The aim of the present study was to evaluate T. gondii seroprevalence, isolate and genotype strains from Z. auriculata. Serum and tissue samples were collected from 206 doves for use in the modified agglutination test (MAT) and mouse bioassay. The prevalence of T. gondii antibodies in the doves was 22.3% (46/206), with titers ranging from 16 to 4096, and T. gondii strains were isolated from 12 of these doves. Five genotypes were detected by means of PCR-RFLP, including ToxoDB genotypes #1, #6, #17 and #65, and one genotype that had not previously been described (ToxoDB#182). This was the first report on isolation of T. gondii from Z. auriculata. This study confirmed the genetic diversity of T. gondii isolates and the existence of clonal type II (ToxoDB genotype #1) in Brazil.

Pombos silvestres (Zenaida auriculata), comuns em áreas urbanas, rurais e selvagens em muitas regiões do Brasil, são frequentemente predados por gatos domésticos. Sendo assim, os isolados de T. gondii obtidos de pombos podem refletir uma maior diversidade ambiental do que os outros hospedeiros. O objetivo do presente estudo foi avaliar a soroprevalência, isolar e genotipar T. gondii de Z. auriculata. Amostras de soro e tecido foram coletadas de 206 pombos para o teste de aglutinação modificado (MAT) e o bioensaio em camundongos. A prevalência de anticorpos contra T. gondii em pombos foi 22,3% (46/206), com títulos variando de 16 a 4096, e T. gondii foi isolado de 12 pombos. Cinco genótipos foram detectados por PCR-RFLP, incluindo os genótipos ToxoDB #1, #6, #17, #65 e um genótipo não descrito anteriormente (ToxoDB#182). Esse é o primeiro relato de isolamento de T. gondii de Z. auriculata. Este estudo também confirmou a diversidade dos isolados de T. gondii e a presença de tipo clonal II (ToxoDB #1) no Brasil.

Comparison of three larval bioassays to evaluate susceptibility of Rhipicephalus (Boophilus) microplus to amitraz / Comparação de três bioensaios larvais para avaliar a suscetibilidade de Rhipicephalus (Boophilus) microplus ao amitraz

Field samples of Rhipicephalus (Boophilus) microplus from the state of Rio Grande do Sul, Brazil, were assessed using the following methods: larval packet test (LPT), larval immersion test (LIT) and syringe immersion test (SIT). The following parameters were determined for each population and for the Mozo susceptible reference strain: lethal concentration for 50% (LC50) with its 95% confidence interval (95% CI), regression line slope and resistance ratio (RR). Using the LPT, only one population was susceptible to amitraz, presenting a RR of 1.9. Using the same technique, the other populations presented RRs of between 92.9 and 3445.8 and were considered resistant. The LC50 of the Mozo strain calculated using the LPT, LIT and SIT was 2.9, 27.3, and 52.7 µg/mL, respectively. In general, a good fit to the probit statistical model was only achieved using the LPT. The results obtained in this study impair recommendations for using the LIT and SIT to diagnose amitraz resistance in R. (B.) microplus populations. Additional studies are required to improve the sensitivity of these tests in relation to the LPT.

Amostras de Rhipicephalus (Boophilus) microplus coletadas à campo no Rio Grande do Sul, Brasil, foram analisadas pelos seguintes métodos: teste do pacote de larvas (TPL), teste de imersão de larvas (TIL) e teste de imersão em seringas (TIS). Os seguintes parâmetros foram determinados para cada população e para a amostra referência suscetível Mozo: concentração letal para 50% (CL50) e seu intervalo de confiança de 95% (IC95%), inclinação da reta de regressão e os fatores de resistência (FR). Pelo TPL, apenas uma população foi sensível ao amitraz, com FR de 1,9. Utilizando a mesma técnica, as outras amostras apresentaram FR entre 92,9 e 3445,8 sendo consideradas resistentes. As CL50 da cepa Mozo calculadas por meio do TPL, TIL e TIS foram 2,9, 27,3 e 52,7 µg/mL, respectivamente. De forma geral, a adequação ao modelo estatístico de probitos só foi alcançada com o uso do TPL. Os resultados obtidos no presente estudo limitam a recomendação de uso do TIL e TIS para diagnóstico de resistência ao amitraz em populações de R. (B.) microplus. Estudos adicionais são necessários para aprimorar a sensibilidade destes testes em relação ao LPT.

Meia-vida do diuron em solos com diferentes atributos físicos e químicos / Half - life of diuron in soils with different physical and chemical attributes

A distribuição e a dissipação dos herbicidas nos solos são processos dinâmicos e únicos para cada relação solo-herbicida. Neste trabalho, a meia-vida do diuron foi determinada em cinco solos (Latossolo Vermelho Amarelo, Latossolo Vermelho e Latossolo Amarelo), com diferentes valores de pH. As concentrações do diuron foram determinadas em amostras dos referidos solos coletadas em oito épocas (1, 8, 15, 22, 36, 66, 96 e 156 dias após a aplicação do herbicida na dose 3,0kg ha-1). Em uma parte dessas amostras, foi feita a quantificação do diuron por cromatografia líquida de alta eficiência e, na outra parte, os testes biológicos, visando à confirmação dos resultados das análises cromatográficas. Constatou-se que a persistência do diuron é dependente dos atributos físicos e químicos dos solos. Todavia, a correção do pH do solo favoreceu apenas a degradação do herbicida em solos arenosos com baixo teor de matéria orgânica. A meia-vida do diuron nos solos estudados variou de 40 a 91 após a sua aplicação, sendo maior no solo com maior teor de matéria orgânica. Esses resultados foram confirmados pelos testes biológicos que se mostraram eficientes e complementares às análises cromatográficas.

The distribution and dissipation of herbicides on soils are dynamic and unique processes for each soil-herbicide relation. In this research, the half-life of diuron was determined in five soils (Red-Yellow Latosol, Red Latosol, and Yellow Latosol), with different pH values. Diuron concentrations were determined in samples of each soil collected at eight different times (1, 8, 15, 22, 36, 66, 96 and 156 days after herbicide application at 3.0kg ha-1). Part of each soil sample was used to quantify diuron by high performance liquid chromatography. The other part of soil sample was used to do biological tests in order to confirm the results of chromatographic analysis. It was found that the persistence of diuron is dependent on the physical and chemical soil attributes. However, the correction of soil pH favored only herbicide degradation in sandy soils with low organic matter content. The half-life of diuron in soils ranged from 40 to 91 after its application and it was higher in soil with higher organic matter content. The biological tests confirmed these results and they were efficient and complementary to the chromatographic analysis.

Diagnosis and isolation of Toxoplasma gondii in horses from brazilian slaughterhouses / Diagnóstico e isolamento de Toxoplasma gondii em equídeos de frigoríficos brasileiros

This study aimed to investigate anti-Toxoplasma gondii antibodies and to isolate the parasite from the brains of horses processed at slaughterhouses in Brazil. We collected brain and blood samples from 398 horses of various ages, from six Brazilian states. Serum samples were evaluated by indirect fluorescent antibody test (IFAT cut-off titre ≥ 1:64), and brains were submitted to mouse bioassay. Among the 398 horses, positivity for T. gondii was identified in 46 (11.6%) by IFAT and in 14 (3.5%) by mouse bioassay. In 12 of those 14 bioassays, mice were positive only by IFAT (cut-off titre ≥ 1:16), T. gondii being isolated in the remaining two. Using polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism (PCR-RFLP) analysis of 18S rDNA to differentiate among T. gondii, Neospora caninum, and Sarcocystis neurona, we found that two of the 14 brains were positive for T. gondii only. For genotyping of the two isolates and the PCR-positive brain, we performed PCR-RFLP based on 13 markers, and SAG2 all samples were Toxoplasma gondii type I. Collectively, IFAT of horse sera and mouse bioassay identified positivity in 60 (15%) of the samples. Our results show that some horses sent to slaughter in Brazil have been exposed toT. gondii.

O objetivo do estudo foi investigar anticorpos anti-Toxoplasma gondii e isolar o parasita do cérebro de equídeos abatidos em matadouros-frigoríficos no Brasil. Colheram-se amostras de 398 cérebros e sangue de equídeos machos e fêmeas de idades variadas, provenientes de seis estados brasileiros. As amostras de soro foram avaliadas pelo teste de imunofluorescência indireta (IFI) para T. gondii (ponto de corte ≥ 64), e os fragmentos de cérebros foram submetidos ao bioensaio em camundongos. Por meio da IFI, 46 (11,6%) equídeos foram soropositivos. Pelo bioensaio em camundongos, 14 (3,5%) cérebros de equídeos testados foram positivos. Em doze dos bioensaios, os camundongos foram positivos somente pela IFI (ponto de corte ≥ 16) e T. gondii foi isolado nos outros dois bioensaios. A PCR-RFLP com base em 18S rDNA para diferenciar entre T. gondii, Neospora caninum, e Sarcocystis neurona foram feitas em todos os 14 cérebros e dois foram positivos apenas para T. gondii. De dois isolados positivos para T. gondii e do cérebro positivo à PCR em que realizou-se a PCR-RFLP, com base em 13 marcadores e SAG2, a genotipagem mostrou ser o T. gondii tipo I para todas as amostras. A IFI de soros de equídeos e do bioensaio em camundongos identificaram positividade em 60 (15%) amostras testadas. Os resultados mostram que alguns cavalos enviados para abate foram expostos ao T. gondii.

Brine shrimp lethality test as a biological model for preliminary selection of pediculicidal components from natural source / Teste de toxicidade frente artemia como modelo preliminar de busca de substâncias pediculicidas a partir de fontes naturais

Brine shrimp lethality test as a biological model for the preliminary selection of pediculicidal components from a natural source. In order to achieve a good correlation between pediculicidal activity and brine shrimp lethality (BSL) test, several pediculicidal substances and active essential oils were tested in BSL test, with the purpose to use the latter as convenient preliminary protocol for pediculicidal activity. Benzyl benzoate, deltametrine and essential oil of Eucalyptus were purchased and clove essential oil obtained by hydrodistillation, besides essential oils, chloroform extracts from Duguetia furfuracea were also submitted to BSL test. All of them were carried out with same protocol described to pediculicidal assay found in the literature, i.e, flask tests were examined every five minutes in the first half hour and then every ten minutes until all the naupli were dead or no movements were observed (knockdown). During the BSL test, it was possible to observe the effect of a particular lethal dose or only a knockdown in the arthropod, as occurred in the test with lice. The results of the BSL test for essential oils and other active substances are essentially in agreement with those described in literature for pediculicidal activity. Extracts and essential oil obtained from aerial parts of D. furfuracea did not present activity, but the essential oil from underground stem bark was active. α-asarone has already been isolated from the underground stem and it has been previously described to possess insecticidal activity.

O teste de toxicidade frente a Artemia salina (TAS) foi utilizado como modelo biológico preliminar na busca de substâncias potencialmente pediculicidas a partir de fontes naturais. Foi encontrada uma boa correlação entre a atividade pediculicida e o TAS, várias substâncias e óleos essenciais descritos como pediculicidas foram testados sobre o microcrustáceo, com o objetivo de se obter um protocolo preliminar e apropriado para detectar aquela atividade. Benzoato de benzila, deltametrina, e óleos essenciais de eucalipto e cravo foram obtidos comercialmente e/ou por extração. Além desses, extratos e óleos essenciais de Duguetia furfuracea também foram testados frente a Artemia. Todas as amostras foram conduzidas utilizando o mesmo protocolo proposto para atividade pediculicida, ou seja, os frascos testes foram lidos a cada cinco minutos na primeira meia hora e depois a cada dez minutos até os nauplios estarem mortos ou sem movimento (knockdown). Durante o TAS foi possível observar a dose letal ou somente o knockdown na larva, como ocorrido no teste com piolho. Os resultados do TAS para os óleos essencial e os demais compostos ativos estão essencialmente de acordo com o descrito na literatura para a atividade pediculicida. Extratos das sementes e óleos essenciais das folhas e sementes D. furfuracea não apresentaram atividade, mas o óleo das cascas do caule subterrâneo foi ativo α-asarona foi isolado das cascas do caule e esta substância apresenta atividade inseticida.

Diagnosis and isolation of Toxoplasma gondii in horses from Brazilian slaughterhouses

This study aimed to investigate anti-Toxoplasma gondii antibodies and to isolate the parasite from the brains of horses processed at slaughterhouses in Brazil. We collected brain and blood samples from 398 horses of various ages, from six Brazilian states. Serum samples were evaluated by indirect fluorescent antibody test (IFAT cut-off titre 1:64), and brains were submitted to mouse bioassay. Among the 398 horses, positivity for T. gondii was identified in 46 (11.6%) by IFAT and in 14 (3.5%) by mouse bioassay. In 12 of those 14 bioassays, mice were positive only by IFAT (cut-off titre 1:16), T. gondii being isolated in the remaining two. Using polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism (PCR-RFLP) analysis of 18S rDNA to differentiate among T. gondii, Neospora caninum, and Sarcocystis neurona, we found that two of the 14 brains were positive for T. gondii only. For genotyping of the two isolates and the PCR-positive brain, we performed PCR-RFLP based on 13 markers, and SAG2 all samples were Toxoplasma gondii type I. Collectively, IFAT of horse sera and mouse bioassay identified positivity in 60 (15%) of the samples. Our results show that some horses sent to slaughter in Brazil have been exposed toT. gondii.

O objetivo do estudo foi investigar anticorpos anti-Toxoplasma gondii e isolar o parasita do cérebro de equídeos abatidos em matadouros-frigoríficos no Brasil. Colheram-se amostras de 398 cérebros e sangue de equídeos machos e fêmeas de idades variadas, provenientes de seis estados brasileiros. As amostras de soro foram avaliadas pelo teste de imunofluorescência indireta (IFI) para T. gondii (ponto de corte 64), e os fragmentos de cérebros foram submetidos ao bioensaio em camundongos. Por meio da IFI, 46 (11,6%) equídeos foram soropositivos. Pelo bioensaio em camundongos, 14 (3,5%) cérebros de equídeos testados foram positivos. Em doze dos bioensaios, os camundongos foram positivos somente pela IFI (ponto de corte 16) e T. gondii foi isolado nos outros dois bioensaios. A PCR-RFLP com base em 18S rDNA para diferenciar entre T. gondii, Neospora caninum, e Sarcocystis neurona foram feitas em todos os 14 cérebros e dois foram positivos apenas para T. gondii. De dois isolados positivos para T. gondii e do cérebro positivo à PCR em que realizou-se a PCR-RFLP, com base em 13 marcadores e SAG2, a genotipagem mostrou ser o T. gondii tipo I para todas as amostras. A IFI de soros de equídeos e do bioensaio em camundongos identificaram positividade em 60 (15%) amostras testadas. Os resultados mostram que alguns cavalos enviados para abate foram expostos ao T. gondii.

Uso do conceito do erro total, dos perfis de exatidão e do índice de exatidão no pré-estudo de validação de ensaio imunoenzimático / Use of the total error concept, the accuracy profiles and the accuracy index in the pre-study validation of an enzyme-linked immunosorbent assay

O uso do conceito do Erro Total em validação de métodos analíticos é abordagem que incorpora a expressão da soma da veracidade e da precisão. Esse método utiliza ainda os Perfis de Exatidão baseados em intervalos de tolerância (ou intervalos de predição) para decidir se um modelo de calibração dará resultados de qualidade e prevê o controle do risco de aceitar uma metodologia imprópria. Com a finalidade de avaliar o uso dessas ferramentas para efetuar a validação de bioensaios, foram aplicados o Conceito do Erro Total,os perfis de Exatidão e os Índices de Exatidão no pré-estudo de validação de ELISA para determinar o teor de ovoalbumina em vacinas, abrangendo-se o intervalo de 33-167 por cento da concentração alvo (5,0μg/mL) e um intervalo controle abaixo dessa faixa (0,33-2,5 por cento). O pré-estudo de validação demonstrou que o ensaio apresenta exatidão, precisão, linearidade e veracidade em conformidade no intervalo de concentrações 1,25-10μg/mL, e mostrou ser ensaio confiável para avaliar o teor de ovalbumina. A abordagem do conceito do Erro Total é ferramenta para efetuar validações que apresentam desempenho superior à abordagem clássica, que avalia os componentes de veracidade e precisão isoladamente, e é capaz de identificar deficiências na Exatidão de um bioensaio.

Bioactivity evaluation against Artemia salina Leach of medicinal plants used in Brazilian Northeastern folk medicine / Avaliação da bioatividade frente à Artemia salina Leach de plantas medicinais utilizadas na medicina popular na Região Nordeste do Brasil

The brine shrimp (Artemia salina Leach) lethality bioassay offers an advantage in standardization and quality control of botanical products. This test is well correlated with antitumor activity (cytotoxicity) and can be used to monitor the activity of bioactive natural products. This paper reports the bioactivity of ethanol extracts from seven medicinal plants from the Northeast of Brazil (Acmella uliginosa, Ageratum conyzoides, Eugenia uniflora, Plectranthus neochilus, Moringa oleifera, Justicia pectoralis and Equisetum sp.) against Artemia salina. Biological activity was evaluated for extracts at 1, 10, 100, and 1000 µg/mL in triplicate, and the mean lethal concentration values (LC50) were obtained by probit analysis. The species Acmella uliginosa showed the highest bioactivity, and its flower extract was more active than its leaf extract.

O bioensaio em Artemia salina Leach oferece uma vantagem na padronização e no controle de qualidade de produtos botânicos. Esse teste é bem correlacionado com a atividade antitumoral (citotoxicidade) e pode ser usado para monitorar a atividade de produtos naturais bioativos. Este trabalho relata a bioatividade de extratos etanólicos de sete plantas medicinais (Acmella uliginosa, Ageratum conyzoides, Eugenia uniflora, Plectranthus neochilus, Moringa oleifera, Justicia pectoralis e Equisetum sp.) contra Artemia salina. A bioatividade foi avaliada em triplicata paraextratos nas concentrações de 1, 10, 100 e 1000 µg/mL, e os valores das concentrações letais para metade dos animais (CL50) foram obtidos por meio da análise de probitos. A espécie Acmella uliginosa apresentou a maior bioatividade frente à Artemia salina e o extrato etanólico de suas flores apresentou maior atividade do que o das folhas.

Serologic and molecular diagnostic and bioassay in mice for detection of Toxoplasma gondii in free ranges chickens from Pantanal of Mato Grosso do Sul / Diagnóstico sorológico e molecular e bioensaio em camundongo para detecção de Toxoplasma gondii em galinhas de criação livre do Pantanal do Mato Grosso do Sul

The aim of this study was to investigate the occurrence of Toxoplasma gondii and compare the results obtained in the Modified Agglutination Test (MAT), Polimerase Chain Reaction (PCR) and bioassay in mice. In order to accomplish this, 40 free-range chickens from eight farms in neighboring areas to the Pantanal in Nhecolândia, Mato Grosso do Sul, were euthanized and blood samples, brain and heart were collected. The occurrence of anti-T. gondii antibodies found in chickens was 67.5% (27 samples), considering as a cutoff point the dilution 1:5. Among the samples analyzed, 7 (25.9%) were positive in the dilution 1:5, 3 (11.1%) in 1:10, 2 (7.4%) in 1:20, 3 (11.1%) in 1:320, 1 ( 3.7%) in 1:640, 3 (11.1%) in 1:1280, 2 (7.4%) in 1:2560, 4 (14.8%) in 1:5120 and 2 (7.4%) in 1:10.240. From the mixture of tissue samples (brain and heart) from the chickens analyzed, 16 (40%) presented electrophoretic bands compatible with T. gondii by PCR (gene B1). In the comparison of techniques, 59.26% positivity in PCR was revealed among animals that were seropositive in MAT (cutoff 1:5). From 141 inoculated mice, six (4.44%) died of acute toxoplasmosis between 15 and 23 days after inoculation. Surviving mice were sacrificed at 74 days after inoculation, and a total of 28 cysts were found in the brains of 10 distinct groups. From the seropositive hens, 27 bioassays were performed and 11 (40.7%) isolates were obtained. A greater number of isolations happened in mice that were inoculated with tissues from chickens that had high titers for anti-T. gondii antibodies. Chronic infection in mice was observed in nine groups (33.3%) from five different properties. Among the surviving mice, 25.6% were positive for T. gondii in MAT (1:25). From mice positive in PCR, 87.5% were also positive in MAT. Among the PCR-negative mice, 5.2% were positive for T. gondii in MAT. It can be concluded through this study that the occurrence of infecton by T. gondii in the rural properties studied was high, that PCR directed to gene B1 does not confirm the viability of the parasite, but it can be used as a screening method for the selection of chickens infected by T. gondii, that the animals with titer greater than 10 must be prioritized for the selection of animals for bioassay, since for them, the chances of isolating the parasite are greater and that seroconversion in experimentally infected mice is not a good indicator for isolating the agent.

Os objetivos deste estudo foram investigar a ocorrência de Toxoplasma gondii e comparar os resultados obtidos no Teste de Aglutinação Modificada (MAT), Reação em Cadeia pela Polimerase (PCR) e o bioensaio em camundongos. Para tanto, 40 galinhas de criação livre de oito fazendas em áreas limítrofes ao Pantanal da Nhecolândia, Mato Grosso do Sul, foram eutanasiadas e amostras de sangue, o cérebro e o coração foram coletados. A frequência de anticorpos anti-T. gondii encontrada nas galinhas foi de 67,5% (27 amostras), considerando como ponto de corte a diluição 1:5. Entre as amostras analisadas, 7 (25,9%) foram positivas na diluição 1:5, 3 (11,1%) em 1:10, 2 (7,4%) em 1:20, 3 (11,1%) em 1:320, 1 ( 3,7%) em 1:640, 3 (11,1%) em 1:1.280, 2 (7,4%) em 1:2.560, 4 (14,8%) em 1:5.120 e 2 (7,4%) em 1:10.240. A partir da mistura de amostras de tecidos (cérebro e coração) das galinhas analisadas, 16 (40%) apresentaram bandas eletroforéticas compatíveis com T. gondii por PCR (gene B1). Na comparação das técnicas, revelou-se 59,26% de positividade na PCR entre os animais soropositivos no MAT (ponto de corte 1:5). Dos 141 camundongos inoculados, seis (4,44%) morreram de toxoplasmose aguda entre 15 e 23 dias após a inoculação. Os camundongos que sobreviveram foram sacrificados 74 dias após a inoculação, sendo encontrados 28 cistos nos cérebros de 10 grupos distintos. Das galinhas soropositivas, foram realizados 27 bioensaios e obtidos 11 (40,7%) isolados. Um maior número de isolamentos ocorreu em camundongos que foram inoculados com tecidos de galinhas que tinham altos títulos de anticorpos anti-T. gondii. Infecção crônica em camundongos foi observada em nove grupos (33,3%) de cinco propriedades diferentes. Entre os camundongos que sobreviveram, 25,6% foram positivos para T. gondii no MAT (1:25). Dos camundongos positivos na PCR, 87,5% também foram positivos no MAT. Já entre os camundongos PCR negativos 5,2% foram positivos para T. gondii no MAT. Concluiu-se através deste estudo que a ocorrência de infecção pelo T. gondii nas propriedades rurais estudadas foi alta, que a PCR direcionada ao gene B1, não confirma a viabilidade do parasita, porém pode ser utilizada como método de triagem para a seleção de galinhas infectadas por T. gondii, que os animais com título maior que 10 devem ser priorizados para a seleção de animais para bioensaio, pois para eles, as chances de isolamento do parasita são maiores e que a soroconversão em camundongos infectados experimentalmente não é um bom indicador de isolamento do agente.