Molecular detection of Apicomplexa protozoa in tissues from Alouatta guariba clamitans / Detecção molecular de protozoários Apicomplexa em tecidos de Alouatta guariba clamitans

The brown howler monkey (Alouatta guariba clamitans) is a primate species widely distributed in South America. Infections by protozoa are common in primates. However, studies on protozoa in primates in Brazil are scarce, so the goal of this study was to investigate DNA from the apicomplexan protozoa Neospora caninum, Sarcocystis spp. and Toxoplasma gondii in tissues of A. guariba clamitans. DNA extraction was performed on tissue samples from the heart, brain, liver, spleen, lung and intestine of six A. guariba clamitans from Santa Maria, Central Region of Rio Grande do Sul, Brazil. Conventional PCR was performed using 18S rRNA gene general primers for Apicomplexa and also specific primers to amplify Neosporaspp. and Toxoplasma gondii DNA. All animals were positive in the 18S PCR and the genetic sequencing confirmed the presence of Sarcocystis spp. DNA in the tissues of four animals belonging to at least two species (S. neurona and S. gigantea) and T. gondii DNA in the other two animals. One positive sample for T. gondii was genotypically characterized as atypical by the restriction fragment length polymorphism technique. N. caninum DNA was not detected in the tested samples. The presence of Apicomplexa protozoan DNA in the tissues of the six animals tested in this study highlights the importance of howler monkeys as maintainers of these pathogens in nature.(AU)

O bugio ruivo (Alouatta guariba clamitans) é uma espécie de primata amplamente distribuída na América do Sul. As infecções por protozoários são comuns em primatas. Entretanto, estudos sobre protozoários em primatas no Brasil são escassos, portanto o objetivo deste estudo foi pesquisar DNA dos protozoários Apicomplexa Neospora caninum, Sarcocystisspp. e Toxoplasma gondii em tecidos de A. guariba clamitans. A extração de DNA foi realizada em amostras de tecido do coração, cérebro, fígado, baço, pulmão e intestino de seis A. guariba clamitans oriundos de Santa Maria, Região Central do Rio Grande do Sul, Brasil. Foi realizada PCR convencional utilizando primers geral do gene 18S rRNA para Apicomplexa e também primers específicos para amplificação de DNA de Neospora spp.e Toxoplasma gondii. Todos os animais foram positivos no PCR geral para Apicomplexa e no sequenciamento genético confirmou-se a presença de DNA de Sarcocystis nos tecidos de quatro animais pertencentes a pelo menos duas espécies (S. neurona e S. gigantea), e DNA de T. gondii foi detectado nos outros dois animais. Uma amostra positiva para T. gondii foi caracterizada genotipicamente como atípico pela técnica de polimorfismo do comprimento do fragmento de restrição. Não foi detectado DNA de N. caninum nas amostras testadas. A presença de DNA de protozoários apicomplexa nos tecidos dos seis animais testados neste estudo destaca a importância dos bugios ruivos como mantenedores desses patógenos na natureza.(AU)

Molecular detection of Apicomplexa protozoa in tissues from Alouatta guariba clamitans

ABSTRACT: The brown howler monkey (Alouatta guariba clamitans) is a primate species widely distributed in South America. Infections by protozoa are common in primates. However, studies on protozoa in primates in Brazil are scarce, so the goal of this study was to investigate DNA from the apicomplexan protozoa Neospora caninum, Sarcocystis spp. and Toxoplasma gondii in tissues of A. guariba clamitans. DNA extraction was performed on tissue samples from the heart, brain, liver, spleen, lung and intestine of six A. guariba clamitans from Santa Maria, Central Region of Rio Grande do Sul, Brazil. Conventional PCR was performed using 18S rRNA gene general primers for Apicomplexa and also specific primers to amplify Neosporaspp. and Toxoplasma gondii DNA. All animals were positive in the 18S PCR and the genetic sequencing confirmed the presence of Sarcocystis spp. DNA in the tissues of four animals belonging to at least two species (S. neurona and S. gigantea) and T. gondii DNA in the other two animals. One positive sample for T. gondii was genotypically characterized as atypical by the restriction fragment length polymorphism technique. N. caninum DNA was not detected in the tested samples. The presence of Apicomplexa protozoan DNA in the tissues of the six animals tested in this study highlights the importance of howler monkeys as maintainers of these pathogens in nature.

RESUMO: O bugio ruivo (Alouatta guariba clamitans) é uma espécie de primata amplamente distribuída na América do Sul. As infecções por protozoários são comuns em primatas. Entretanto, estudos sobre protozoários em primatas no Brasil são escassos, portanto o objetivo deste estudo foi pesquisar DNA dos protozoários Apicomplexa Neospora caninum, Sarcocystisspp. e Toxoplasma gondii em tecidos de A. guariba clamitans. A extração de DNA foi realizada em amostras de tecido do coração, cérebro, fígado, baço, pulmão e intestino de seis A. guariba clamitans oriundos de Santa Maria, Região Central do Rio Grande do Sul, Brasil. Foi realizada PCR convencional utilizando primers geral do gene 18S rRNA para Apicomplexa e também primers específicos para amplificação de DNA de Neospora spp.e Toxoplasma gondii. Todos os animais foram positivos no PCR geral para Apicomplexa e no sequenciamento genético confirmou-se a presença de DNA de Sarcocystis nos tecidos de quatro animais pertencentes a pelo menos duas espécies (S. neurona e S. gigantea), e DNA de T. gondii foi detectado nos outros dois animais. Uma amostra positiva para T. gondii foi caracterizada genotipicamente como atípico pela técnica de polimorfismo do comprimento do fragmento de restrição. Não foi detectado DNA de N. caninum nas amostras testadas. A presença de DNA de protozoários apicomplexa nos tecidos dos seis animais testados neste estudo destaca a importância dos bugios ruivos como mantenedores desses patógenos na natureza.

Anatomia do sistema reprodutor feminino de Alouatta belzebul (Linnaeus, 1766) / [Anatomy of the female reproductive system of the Alouatta belzebul (Linnaeus, 1766)]

O conhecimento da anatomia de qualquer animal silvestre é de fundamental importância para sua preservação e proteção. Neste contexto, o presente estudo objetivou descrever a morfologia do sistema reprodutor feminino de Alouatta belzebul. Foram utilizados seis espécimes de A. belzebul, fêmeas, adultas, e livres de lesões. Observou-se macroscopicamente que os ovários têm características morfológicas em formato ovoides, com superfície lisa, e, na análise histológica na região de córtex, evidenciou-se folículos ovarianos em diferentes estágios de desenvolvimento. As tubas uterinas anatomicamente são finas e curvilíneas, apresentando uma camada mucosa, uma muscular e outra serosa. O útero possui formato simples, com fundo globoso, com um miométrio altamente vascularizado, sendo organizado em feixes de fibras musculares lisas. A estrutura anatômica da vagina apresentou-se como um tubo muscular longo de paredes finas, onde, na região vestibular, o óstio externo da uretra é marcado por uma papila uretral bilobada e, na região de vulva, em sua porção caudal, contatou-se um clitóris bem desenvolvido. No que concerne à análise histológica da vagina, verificou-se, em região de mucosa vaginal, um extrato basal composto por epitélio estratificado pavimentoso não queratinizado atrófico. As descrições morfológicas fornecem, de forma inédita, informações importantes relativas à anatomia macroscópica e microscópica do sistema reprodutor feminino dessa espécie.(AU)

Knowledge of the anatomy of any wild animal is of fundamental importance for its preservation and protection. In this context the present study aimed to describe the morphology of the female reproductive system of A. belzebul. We used 6 specimens of A. belzebul, female, adult and free of lesions. It was macroscopically observed that the ovaries are ovoid with smooth surface and the histological analysis in cortical region showed ovarian follicles in different stages of development. The fallopian tubes are anatomically thin and curvilinear, with one mucous layer, one muscular and one serous layer. The uterus was presented in a simple format with a globular fundus, with a highly vascularized myometrium, being organized in bundles of smooth muscle fibers. The anatomical structure of the vagina presented itself as a long thin-walled muscular tube where in the vestibular region the external orifice of the urethra is marked by a bilobed urethral papilla and in the caudal portion in its caudal portion a well-developed clitoris. Regarding the histological analysis of the vagina, a basal extract composed of atrophic non-keratinized stratified squamous epithelium was found in the vaginal mucosa region. The morphological descriptions provide important information regarding the macroscopic and microscopic anatomy of the female reproductive system of this species in an unprecedented way.(AU)

Aspectos ultrassonográficos, biometria e dopplerfluxometria ocular do bugio ruivo (Alouatta fusca) / Ultrasonography aspects, biometry and Doppler of howler monkey (Alouatta fusca) ocular bulb

Este estudo teve como objetivo geral descrever os aspectos ultrassonográficos normais das estruturas do bulbo ocular de primatas da espécie Alouatta fusca, determinando ainda os valores da biometria ocular, e os parâmetros da dopplerfluxometria ocular das artérias oftálmica interna e central da retina. Vinte exames ultrassonográficos oculares foram realizados em dez primatas da espécie Alouatta fusca clinicamente saudáveis, sem sinais de doença ocular ao exame oftalmológico. Procedeu-se a descrição ultrassonográfica das estruturas oculares e posteriormente a biometria foi obtida em quatro distâncias distintas: (D1) correspondentes à câmara anterior, (D2) espessura da lente, (D3) profundidade da câmara vítrea e (D4) comprimento axial do bulbo ocular. Na dopplerfluxometria foram avaliadas as artérias oftálmica interna e central da retina quanto ao índice de resistividade (IR), de pulsatilidade (IP), e as velocidades do pico sistólico (VPS) ediastólica final (VDF). Os valores de biometria foram submetidos a teste de comparação quanto ao gênero dos animais e cortes ultrassonográficos, utilizando o teste t de Student. O mesmo teste foi realizado para comparação dos resultados de dopplerfluxometria entre fêmeas e machos. A descrição ultrassonográfica das estruturas oculares e vascularização do bugio ruivo mostraram-se semelhantes a espécies como o cão, o gato e o homem. Os valores biométricos médios encontrados foram de 2,1±0,38 mm para D1, 3,7±0,30mm para D2, 10,4±0,78mm para D3 e 19,3±1,64mm para D4. Os valores de dopplerfluxometria da artéria oftálmica e da artéria central da retina foram respectivamente: VPS de 25,6cm/s e 14,6cm/s; VDF de 15,8cm/s e 10,7cm/s; IR de 0,7 e 0,5; IP de 1,4 e 0,8.(AU)

This study aimed to describe the sonographic features of normal ocular structures, the ocular biometry and Doppler parameters of the internal ophthalmic artery and central retinal artery of the Alouatta fusca. Twenty ocular ultrasonographic examinations were perform in ten primate species of the Alouatta fusca. Proceeded to the sonographic description of the ocular structures and later biometrics was obtained in four distances: (D1) corresponding to the anterior chamber (D2) lens thickness (D3) vitreous chamber and (D4) axial length of the eyeball. Doppler ultrasound evaluated internal ophthalmic artery and central retinal artery as for the resistivity Index (RI), pulsatility index (PI), peak systolic velocity (PSV) and end diastolic velocity (EDV). The values of biometrics and flowmetry underwent comparison test between genders and sonographic views, by Student t test. The anatomical sonographic description of the ocular structures and vasculature of the red howler were similar to species such as dog, cat and man. The biometric average values found were 2.1±0.38mm for D1, 3.7±0.30mm for D2, 10.4±0.78mm for D3 and 19.3±1.64mm for D4. The Doppler values of the ophthalmic artery and central retinal artery found were: PSV of 25.6cm/s and 14.6cm/s; VDF 15.8cm/s and 10.7cm/s; IR 0.7 and 0.5; IP 1.4 and 0.8.(AU)

Avaliação ultrassonográfica e mensurações das glândulas adrenais em primatas não humanos neotropicais: mico-de-cheiro (Saimiri sciureus), macaco-da-noite (Aotus azarae infulatus) e bugio-ruivo (Alouatta guariba clamitans) / Adrenal glands measurements and ultrasound evaluation in nonhuman primates: squirrel monkey (Saimiri sciureus), owl monkey (Aotus azarae infulatus) and howler monkey (Alouatta guariba clamitans)

As glândulas adrenais possuem funções endócrinas relacionadas a múltiplas funções vitais, estando intimamente relacionadas à capacidade do animal em se adaptar ao estresse. O exame ultrassonográfico é o método diagnóstico de escolha para avaliação das glândulas em diferentes espécies. Considerando a escassa literatura, questiona-se se as doenças adrenais em primatas não humanos são incomuns ou subdiagnosticadas, havendo a hipótese desse fato ser determinado pela falta de parâmetros. Objetivou-se descrever as características ultrassonográficas das glândulas adrenais para três espécies de primatas não humanos mantidas em cativeiro: Saimiri sciureus (mico-de-cheiro), Aotus azarae infulatus (macaco-da-noite) e Alouatta guariba clamitans (bugio-ruivo). Conclui-se que é possível a identificação das glândulas adrenais por meio de exame ultrassonográfico, sendo que os padrões de referência foram estabelecidos com sucesso para as espécies em questão. Ressalta-se que a adequação de animais em ambientes estressantes é frequentemente acompanhada por uma hipertrofia das glândulas adrenais, portanto deve-se levar em consideração que as mensurações realizadas nesse estudo foram estabelecidas em animais de cativeiro...

The adrenal glands have endocrine functions related to multiple vital functions and are closely related to the animal's ability to adapt to stress. The ultrasound is the diagnostic method of choice for evaluation of glands in different species. Considering the scarce literature, one may question whether the adrenal disorders in nonhuman primates are uncommon or underdiagnosed, and a hypothesis exists that this fact is determined by the lack of parameters. The goal is to describe the sonographic features of the adrenal glands for three species of nonhuman primates kept in captivity: squirrel monkey (Saimiri sciureus), owl monkey (Aotus azarae infulatus) and howler monkey (Alouatta guariba clamitans). It is concluded that it is possible to identify the adrenal glands by ultrasound, and the reference standards have been established successfully for the species in question. It is noteworthy that the adaptation of animals in many stressful environments is often accompanied by a hypertrophy of the adrenal glands, so one should take into account that the measurements performed in this study were established in captive animals...

Análise do líquido cefalorraquidiano de bugio-ruivo (Alouatta guariba) / Cerebrospinal fluid analysis of the howler monkey (Alouatta guariba)

A presente pesquisa foi realizada com o objetivo de desenvolver e adaptar técnicas diagnósticas em neurologia para primatas não humanos, da espécie Alouatta guariba Geoffroy Saint-Hilaire, 1812 (bugio-ruivo) saudáveis e mantidos em cativeiro. Foram realizadas análises físico-químicas e citológicas do líquido cefalorraquidiano obtido na cisterna magna de oito bugios-ruivos. Para realização dos exames, todos os animais foram contidos quimicamente com associação de cetamina, xilazina e midazolam e anestesia inalatória com isoflurano. Os resultados das análises do líquido cefalorraquidiano demonstraram valores médios de proteína: 16,92mg/dL±9,84; glicose: 131,25mg/dL±106,7; pH: 8,37±0,69; células nucleadas: 0,5/mm³±0,75; hemácias: 49,37/mm³±111,76 e pressão: 7,37cm H2O±1,77. O trabalho demonstrou a segurança e a eficácia da colheita do líquido cefalorraquidiano na cisterna magna de Alouatta guariba e os valores de referência para a espécie.

This survey was conducted with the objective of developing and adapting diagnostic techniques in neurology for non-human primates, of the species Alouatta guariba Geoffroy Saint-Hilaire, 1812 (howler monkey) healthy and kept in captivity. Physical-chemical analyses were carried out in cerebrospinal fluid and its pressure measurement in the cisterna magna. Eight animals were used for the analysis of cerebrospinal fluid. In all procedures, were used chemical restraint and anesthesia with ketamine, xylazine and association of midazolam and inhalational anesthesia with isoflurane for carrying out the spinal tap. The cerebrospinal fluid analysis showed average values: protein: 16.92±9.84; glucose: 131.25mg/dL±106.7; pH: 8.37±0.69; nucleated cells: 0.5/mm³±0.75; red blood cells: 49.37/mm³±111.76 and CSF cisternal pressure: 7.37cm H2O±1.77. This study demonstrated the safety and efficacy of cerebrospinal fluid collection in the cisterna magna of Alouatta guariba, and the reference values for the specie.

Extra group copulation in alouatta caraya (primates, atelidae) living on an island of urban forest from southeast São Paulo, Brazil

Extra group copulations are rarely observed among the Alouatta genus, which lives in a fragmented area in Brazil. Here, we describe the second extra group copulation in A. caraya in literature, which was the first from Brazil. This happened in the southeast urban island forest, which measures 25 ha. In this forest there are two troops: one of them with thirteen howlers and the other with four. These howlers may be extinct in a few years since in the region there is only 3.89 % of native forests and high anthropic action due to agribusiness. We discuss the possible issues that led to the extra group copulation.

Cópulas extra grupo raramente são observados em animais do gênero Alouatta, que vivem em áreas fragmentadas do Brasil. Aqui, descrevemos a segunda cópula extra grupo em A. caraya na literatura, que foi a primeira do Brasil. Isso aconteceu na floresta ilha urbana sudeste, que mede 25 ha. Nesta floresta existem dois bandos: um deles com treze bugios e o outro com quatro. Estes bugios podem ser extintos em poucos anos, uma vez que na região há apenas 3,89% de florestas nativas e alta ação antrópica, devido ao agronegócio. Nós discutimos os possíveis aspectos que levaram à cópula extra grupo.

Comportamentos de hierarquia e dominância em grupos de bugios-ruivos, Alouatta guariba clamitans (Cabrera, 1940), em cativeiro / Hierarchy and dominance behaviors in brown howler monkey groups Alouatta guariba clamitans (Cabrera, 1940) in captivity

O estudo que segue foi realizado com dois grupos de bugios-ruivos (Alouatta guariba clamitans) em cativeiro, no Centro de Acolhimento de Primatas e Aves (PRIMAVES) com o objetivo de identificar comportamentos de hierarquia e dominância, através da quantificação e duração das condutas, comparando os dados obtidos com dados já descritos para o gênero Alouatta. Foram realizadas 172 horas de observação e a partir da quantificação das condutas catar (categoria social não-agonística), vocalizar (categoria social agonística), vigiar (categoria alerta) e comer (categoria alimentação). Ambos os grupos mostraram uma evidente dominância entre os indivíduos, com os machos juvenis apresentando certo grau de centralidade espacial, demonstrado através dos comportamentos de vocalização e vigiar. As fêmeas mostraram-se ativas nas funções de vigia e catação, evidenciando o seu importante papel na contribuição da estabilidade social, proporcionando ao grupo que vive em cativeiro uma relação apaziguadora entre os indivíduos.

This study was done with two groups of brown howler monkeys in captivity, at the Centro de Acolhimento de Primatas e Aves (PRIMAVES). The aim was to identify hierarchy and dominance behaviors through quantification and duration of conducts, comparing the data with information already described for Alouatta genus. A total of 172 hours of observations were carried out, and from the quantification of grooming (non-agonistic social category), roaring (agonistic social category), vigilance (alert category) and eating (feeding category), both groups showed an evident dominance between the individuals, with the youthful males performing a certain degree of spatial centralization, showed through roaring and vigilance behaviors. The females are active in vigilance and grooming, showing an important role in the maintenance of social stability, providing to the group that lives in captivity an appeasing relation between the individuals.

Valores hematológicos de bugios pretos (Alouatta caraya) de vida livre da região do Alto Rio Paraná, sul do Brasil / Hematologic values of free-ranging black-and-gold howlers monkeys (Alouatta caraya) from the region of Upper Paraná River, Southern Brazil

Descreveram-se os valores hematológicos de bugios pretos (Alouatta caraya) e estabeleceram-se diferenças entre sexo e idade, de 36 animais aparentemente saudáveis, de vida livre da região do Alto Rio Paraná, sul do Brasil. Os animais foram capturados e contidos quimicamente com cloridrato de tiletamina e cloridrato de zolazepam, na dose média de 5,5mg/kg, por via intramuscular. Na comparação entre os sexos, houve diferença para número de hemácias (4,48±1,36 e 3,58±0,91 x10(6)/mm³), maior nas fêmeas, e volume globular médio (90,99±27,65 e 118,36±44,63fL) e número de eosinófilos (0,30±0,24 e 0,76±0,85 x10³/mm³), maior nos machos. O volume globular (39,46±3,53 e 36,69±3,54 por cento) e a proteína total plasmática (7,91±0,53 e 7,40±0,63g/dL) foram significativamente mais baixos nos animais jovens.

The hematologic values and the influence of gender and age were described in 36 free-ranging healthy black-and-gold howler monkeys (Alouatta caraya) from the region of Paraná river, Southern Brazil. The animals were caught with trap models and intramuscularly anesthetized with 5.5mg/kg tilitamine/zolazepam hydrochlorides. The red blood cells were higher in females (4.48±1,36 vs. 3.58±0.91x10(6)/mm³) while mean corpuscular volume (90.99±27.65 and 118.36±44.63 fL) and eosinophils (0.30±0.24 and 0.76±0.85x10³/mm³) were significant higher in males. The packed cell volume (39.46±3.53 and 36.69±3.54 percent) and plasma total protein (7.91±0.53 and 7.40±0.63g/dL) were lower in juveniles.