Résumé
RESUMO -RACIONAL: O adenocarcinoma ductal do pâncreas é a quarta causa de morte associada ao câncer mais comum no mundo ocidental. A presença de células tumorais circulantes (CTCs) pode ser considerada um potencial fator prognóstico, visto que essas células representam a progressão tumoral, permitindo o monitoramento da eficácia terapêutica. OBJETIVOS: explorar as características morfológicas, moleculares e fenotípicas das células tumorais circulantes (CTCs) do sangue de pacientes com carcinoma pancreático e correlacionar os achados com a resposta ao tratamento, sobrevida livre de progressão, sobrevida global (SG) e trombose venosa profunda (TVP). MÉTODOS: o sangue periférico (10mL) foi analisado antes do início do tratamento e após 60 e 120 dias. As CTCs foram detectadas pelo ISET® e caracterizadas por imunocitoquímica. Para análise de miRNAs, leucócitos periféricos dos mesmos pacientes e indivíduos saudáveis foram coletados em paralelo no início do estudo. A expressão de miRNAs foi avaliada usando TaqMan T Array Human MicroRNA Cards v2.0. RESULTADOS: foram incluídos 9 pacientes. As proteínas MMP2 e TGFß-RI foram altamente expressas (77,7%) nas CTCs no início do estudo. No primeiro acompanhamento, MMP2 era predominante (80%) e no segundo acompanhamento, MMP2 e vimentina eram predominantes (50%). Microêmbolos tumorais circulantes (MTC) foram encontrados em dois pacientes e ambos apresentavam TVP. O miR-203a-3p foi altamente expresso em CTCs. miR-203a-3p está envolvido na estimulação da transição epitelio-mesenquima (TEM) e relacionado a pior SG no câncer pancreático (dados TCGA). CONCLUSÃO: Devido ao baixo número de pacientes e curto seguimento, não observamos correlação entre CTCs e resposta ao tratamento. No entanto, houve uma correlação entre MTC e TVP. Além disso, miR-203a-3p foi altamente expresso em CTCs, corroborando os achados de proteínas EMT. Este estudo abre perspectivas sobre a mudança dinâmica no padrão de proteínas expressas ao longo do tratamento e a utilização de miRNAs como novos alvos no carcinoma pancreático.
ABSTRACT - BACKGROUND: Ductal adenocarcinoma of the pancreas is the fourth most common cancer-associated cause of death in the Western world. The presence of circulating tumor cells (CTCs) can be considered a potential prognostic factor, as these cells represent tumor progression, allowing monitoring of therapeutic efficacy. OBJECTIVES: The objectives of this study were to explore the morphological, molecular, and phenotypic characteristics of CTCs from the blood of patients with pancreatic carcinoma and to correlate the findings with response to treatment, progression-free survival, overall survival (OS), and deep vein thrombosis (DVT). METHODS: Peripheral blood (10 mL) was analyzed before the beginning of treatment after 60 and 120 days. CTCs were detected by using ISET® and characterized by immunocytochemistry. For microRNAs (miRNAs) analysis, peripheral leukocytes from the same patients and healthy individuals (controls) were collected in parallel at baseline. The expression of miRNAs was evaluated (in pool) using TaqMan® Array Human MicroRNA Cards v2.0. RESULTS: Only nine patients were included. The proteins, namely, matrix metalloproteinase-2 (MMP2) and TGFβ-RI, were highly expressed (77.7%) in CTCs at baseline; at the first follow-up, MMP2 was predominant (80%) and, at the second follow-up, MMP2 and vimentin were predominant (50%). Circulating tumor microemboli (CTMs) were found in two patients and both presented DVT. The miR-203a-3p was highly expressed in CTCs. The miR-203a-3p is involved in the stimulation of epithelial-to-mesenchymal transition (EMT) and is related to worse OS in pancreatic cancer (TCGA data). CONCLUSION: Due to the low number of patients and short follow-up, we did not observe a correlation between CTCs and response to treatment. However, there was a correlation between CTM and DVT and also miR-203a-3p was highly expressed in CTCs, corroborating the findings of EMT proteins. This study opens the perspectives concerning the dynamic change in the pattern of proteins expressed along with treatment and the use of miRNAs as new targets in pancreatic carcinoma.
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Humains , Tumeurs du pancréas/génétique , Matrix metalloproteinase 2/génétique , microARN/génétique , Cellules tumorales circulantesRésumé
Introdução: O câncer de mama é a neoplasia mais comum em mulheres. A maioria deles é diagnosticada em estágios iniciais, quando o tratamento visa a cura. Mas apesar dos avanços no tratamento, metástases à distância podem ocorrer. A biópsia das lesões metastáticas é recomendada para confirmar o status do receptor de estrogênio (RE), receptor de progesterona (RP) e receptor do fator de crescimento epidérmico humano 2 (HER2), por ocorrerem discrepâncias nesses padrões entre tumores primários e metástases em até 40% dos casos. As células tumorais circulantes (CTCs) estão relacionadas às evoluções clínicas do câncer de mama e podem potencialmente desempenhar um papel substituto aos procedimentos invasivos de rebiópsia de metástase. A tecnologia ISET® (Isolation by SizE of Tumor Cells, Rarecells-Diagnostics, Paris, França) não é usualmente empregada para detectar CTCs em pacientes com câncer de mama, embora seja reconhecida como uma ferramenta útil em alguns outros tumores. Existem dados emergentes de que a caracterização da expressão proteica das CTC pode refinar seu valor prognóstico. Sabe-se que o fator de transformação de crescimento (TGF-ß) desempenha um papel na progressão e invasividade do câncer de mama. Objetivos: Comparar a expressão de RE, RP e HER2 em tumores primários, CTCs, metástases e avaliar a expressão do receptor TGF-ß tipo 1 (TGF-ß RI) em CTCs como fator prognóstico para sobrevida global. Metodologia: Estudo realizado no A.C.Camargo Cancer Center, Brasil. As amostras de sangue foram coletadas antes da biópsia guiada por tomografia computadorizada de lesões metastáticas suspeitas e processadas pela metodologia ISET®. Os níveis de expressão proteica das CTCs foram comparados aos de tumores primários e metástases e correlacionados aos resultados clínicos. Todos os dados clínicopatológicos foram obtidos dos prontuários médicos. Resultados: Dos 39 pacientes inicialmente incluídos, 27 tiveram tanto a biópsia de metástases quanto a coleta de sangue e foram considerados para análise. As taxas de concordância para a expressão de RE, RP e HER2 entre tumores primários e metástases foram altas. Não foi observada nenhuma perda de expressão de HER2 nas metástases e os tumores triplo negativos mantiveram o mesmo padrão em todas as metástases (p <0,0001). Quando as metástases e CTCs foram classificadas como triplo negativo (TN) ou não TN, as CTCs determinaram alta especificidade (93%), acurácia (84,2%) e valor preditivo negativo (88%). A sobrevida global mediana de pacientes sem expressão de TGF-ß RI em CTCs foi de 42,6 x 20,8 meses para os positivos, clinicamente relevante, porém sem significância estatística (p> 0,05). Conclusões: No câncer de mama, o papel das CTCs detectadas pelo ISET® ainda não está estabelecido. Com este estudo, sugerimos que esta metodologia possa ser útil para avaliar metástases em casos de tumores não TN, assim como a expressão de TGF-ß RI em CTCs, o que pode impactar a sobrevida. Devido à limitação da amostra, estudos futuros devem se concentrar em subtipos específicos de câncer de mama, ampliando a coorte.
Introduction: Breast cancer (BC) is the most common neoplasm in women. Most of BC are diagnosed in early stages, when treatment aims cure. Despite advances in BC treatment, distant metastases may develop. Biopsy of metastatic lesions is recommended to confirm estrogen receptor (ER), progesterone receptor (PR) and human epidermal growth factor receptor 2 (HER2) status, due to discrepancies in these patterns between primary tumors/metastasis in up to 40% of cases. Circulating Tumor Cells (CTCs) are related to breast cancer outcomes and could potentially play a role surrogating invasive procedures of metastasis rebiopsy. ISET® (Isolation by SizE of Tumor Cells, Rarecells-Diagnostics, Paris, France) technology is not currently employed to detect CTCs in breast cancer patients, although recognized as a useful tool in some other tumors. There are emerging data that characterization of CTC protein expression can refine its prognostic value. Transforming growth factor (TGF)-ß play a role in progression/invasiveness of BC. Objectives: To compare ER, PR and HER2 expression in primary tumors, CTCs, metastases and to evaluate TGF-ß type 1 receptor (TGF- ß RI) expression in CTCs as prognostic factor for overall survival. Methods: Study conducted at the A.C.Camargo Cancer Center, Brazil. Blood samples were processed in ISET® before computed tomographyguided biopsy of suspected metastatic lesions. Protein expression levels in CTCs were compared to those in primary tumors/metastases and correlated to clinical outcomes. All clinicopathological data were obtained from medical records. Results: From the 39 patients initially included, 27 had both biopsy of metastases and blood collection and were considered for analysis. Concordance rates for ER, PR and HER2 expression between primary tumors/metastases were high. No loss of HER2 expression at any metastasis site and retention of the same pattern in all triplenegative (TN) tumors (p <0.0001) were observed. When metastases/CTCs were classified as TN/nonTN, CTCs showed high specificity (93%), accuracy (84.2%) and negative predictive value (88%). The median overall survival of patients with no TGF-ß RI expression in CTCs was 42.6 x 20.8 months for positive ones, clinically relevant but not statistically significant (p>0.05). Conclusions: In BC, the role of CTCs detected by ISET® is not yet established. Here, we could suggest that this methodology may be useful to evaluate metastasis in non-TN cases as also TGF-ß RI expression in CTCs, which may impact survival. Due to sample limitation, future studies must focus on specific subtypes of BC, expanding the cohort.
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Femelle , Tumeurs du sein , Récepteurs ErbB , Cellules tumorales circulantes , Métastase tumorale , Pronostic , Récepteurs à la progestérone , Récepteurs des oestrogènes , Analyse de survie , Facteur de croissance transformant bêta-1Résumé
INTRODUÇÃO: A quimiorradioterapia neoadjuvante (QRTN) consolidou-se como a principal estratégia para o tratamento do câncer de reto localmente avançado (CRLA). No entanto, respostas heterogêneas são observadas com o tratamento neoadjuvante, com apenas 15-20% dos pacientes com resposta patológica completa (RPC). Diante da necessidade de estratificar os pacientes em respondedores e não respondedores à QRTN antes do seu início, com o objetivo de aprimorar a seleção daqueles com maior probabilidade de obter uma RPC, vários estudos avaliam a identificação de possíveis biomarcadores. O objetivo primário deste estudo prospectivo foi analisar se a ausência da expressão do homólogo B de RAD23 (RAD23B) e da timidilato sintase (TYMS) nas células tumorais circulantes (CTCs) se correlacionaria com a RPC para os pacientes submetidos à QRTN e, assim, identificar possíveis respondedores ao tratamento. Os desfechos secundários foram avaliar a cinética das CTCs antes (C1) e após QRTN (C2), além da correlação da expressão de marcadores de resposta imune, como o Tumor Growth Factor ß Receptor I (TGF-ßRI) e Programmed Death ligand-1 (PD-L1) com a sobrevida livre de doença (SLD) e sobrevida global (SG). MÉTODOS: Entre 2016 e 2020, 63 pacientes com CRLA (cT3/T4 e/ou N+) submetidos a QRTN foram incluídos no estudo. As CTCs foram isoladas por ISETï¢ e avaliadas por imunocitoquímica. A expressão de RAD23B, TYMS, PD-L1 e TGF-ßRI foi avaliada nesta ordem de prioridade de acordo com o objetivo primário do estudo em cada momento de coleta e a disponibilidade de células (contagem de CTCs > 0) na amostra. RESULTADOS: Em C1, RAD23B foi detectado em 54,1% dos pacientes sem RPC e sua ausência em 91,7% dos pacientes com RPC (p = 0,014); Na segunda coleta, dos 13 pacientes com RPC, 10 não apresentaram expressão de RAD23B nas CTCs. Para os pacientes que não obtiveram RPC com QRTN, 51,7% apresentavam a expressão de RAD23B em CTC em C2 (p = 0,06). Na análise univariada (OR =0,077;IC 95%, 0,009-0,661; p = 0,019) e multivariada (OR= 0,064;CI 95%, 0,006-0,75; p = 0,029) para RPC, observamos que a expressão de RAD23B foi associado com menor chance de resposta em comparação com os pacientes com a ausência da expressão do RAD23B na C1. A ausência da expressão da TYMS foi observado em 90% dos pacientes com RPC e sua expressão em 51,7% sem RPC (p = 0,057). Na avaliação da cinética da CTCs pacientes com CTC2> CTC1 (cinética desfavorável) tiveram pior SLD (p = 0,00025) e SG (p = 0,0036) em comparação com aqueles com CTC2 ≤CTC1 (cinética favorável). A expressão de TGF-ßRI em qualquer momento das coletas correlacionou-se com pior SLD (p = 0,059). CONCLUSÃO: Demonstramos uma possível correlação entre a ausência de expressão de RAD23B e TYMS nas CTCs com a RPC, sendo um resultado importante para identificar os respondedores ao tratamento neoadjuvante, ajudando individualizar a abordagem terapêutica. Além disso, a cinética desfavorável e a expressão de TGF-ßRI nas CTCs se correlacionaram com pior sobrevida
INTRODUCTION: Neoadjuvant chemoradiotherapy (NCRT) has established itself as the main strategy for the treatment of locally advanced rectal cancer (LARC). However, heterogeneous responses are observed with neoadjuvant treatment, with only 15-20% of patients with complete pathological response (pCR). Given the need to stratify patients into responders and non-responders to NCRT prior to its initiation, in order to improve the selection of those most likely to obtain a pCR, several studies have assessed the identification of potential biomarkers capable of stratifying and monitoring the patient's response. The primary objective of this prospective study was to analyze whether the absence of RAD23 homolog B expression (RAD23B) and thymidylate synthase (TYMS) in circulating tumor cells (CTCs) would correlate with pCR for patients undergoing NCRT and thus identify possible responders to treatment. The secondary outcomes were to evaluate the kinetics of CTCs before (C1) and after NCRT (C2), in addition to the correlation of the expression of immune response markers, such as Tumor Growth Factor ß Receptor I (TGF-ßRI) and Programmed Death ligand- 1 (PD-L1) with clinical outcomes such as disease-free survival (DFS) and overall survival (OS). METHODS: Between 2016 and 2020, 63 patients (pts) with LARC (cT3 / T4 or N +) submitted to NCRT were included in the study. CTCs were isolated by ISETï¢ and evaluated by immunocytochemistry (protein expression). The expression of RAD23B, TYMS, PD-L1 and TGF-ßRI was evaluated in this order of priority according to the primary objective of the study at each time of collection (C1, C2 and C3) and the availability of cells (CTC count> 0) in the sample. RESULTS: In C1, RAD23B was detected in 54.1% of patients without pCR and its absence in 91.7% of patients with pCR (p = 0.014). In the second collection, of the 13 patients with pCR, 10 did not show RAD23B expression in the CTCs. For patients who did not obtain pCR with NCRT, 51.7% had RAD23B expression in CTC in C2 (p = 0.06). In the univariate (OR = 0.077; 95% CI, 0.009-0.661; p = 0.019) and multivariate (OR = 0.064; 95% CI, 0.006-0.75; p = 0.029) logistic regression models for pCR, we observed that the expression of RAD23B was associated with a lower chance of response compared to patients with the absence of RAD23B expression in C1. The absence of TYMS expression was observed in 90% of patients with pCR and its expression in 51.7% without pCR (p = 0.057). In the evaluation of CTCs kinetics patients with CTC2> CTC1 (unfavorable kinetics) had worse DFS (p = 0.00025) and overall survival (OS) (p = 0.0036) compared with those with CTC2 ≤CTC1 (favorable kinetics). TGF-ßRI expression at any time of the collections was correlated with worse DFS (p = 0.059). CONCLUSION: We demonstrated a possible correlation between the absence of RAD23B and TYMS expression in CTCs with pCR, being an important result to identify respondents to neoadjuvant treatment, helping to individualize the therapeutic approach. In addition, the unfavorable kinetics and expression of TGF-ßRI in CTCs correlated with worse survival.
Sujets)
Tumeurs du rectum , Traitement néoadjuvant , Cellules tumorales circulantes , Immunohistochimie , ChimioradiothérapieRésumé
ABSTRACT Background: Metastasis is common in the diagnosis of pancreatic cancer, and the presence of epithelial-mesenchymal transition markers in circulating tumor cells may suggest worse prognosis. Aim: To correlate the number of circulating tumor cells (CTCs) in the peripheral blood of patients with a locally advanced or metastatic pancreatic tumor and the protein expression involved in epithelial-mesenchymal transition (EMT) in CTCs with clinical characteristics, progression-free survival (PFS) and overall survival (OS). Method: This was a prospective study conducted using peripheral blood samples collected at three different times. CTCs were quantified by the ISET test and analyzed by immunocytochemistry. Proteins involved in EMT (vimentin, TGFß-RI and MMP2) were analyzed in all CTCs. Results: Twenty-one patients were included. Median CTCs detected were 22, 20 and 8 CTCs/8 ml blood at baseline, first and second follow-up, respectively. No statistically significant correlation was found in correlating the number of CTCs and the evaluated clinical characteristics, PFS, or OS. There was no difference in PFS and OS among the EMT markers in the groups with and without markers. Conclusion: CTC analysis was not relevant in this sample for comparing clinical findings, PFS and OS in patients with pancreatic cancer. However, marker analysis in CTCs could be useful for the MMP-2 and/or TGFß-RI expression, as observed by the separate PFS curve.
RESUMO Racional: A metástase é comum no diagnóstico de câncer de pâncreas; presença de marcadores de transição epitélio-mesenquimal nas células tumorais circulantes (CTCs) podem sugerir pior prognóstico. Objetivo: Correlacionar o número de CTCs no sangue periférico de pacientes com tumor de pâncreas localmente avançado ou metastático e expressão de proteínas envolvidas na transição epitélio-mesenquimal (TEM) nas CTCs com características clínicas, sobrevida livre de progressão (SLP) e global (SG). Método: Estudo prospectivo realizado por meio de coletas de sangue periférico em três tempos distintos. As CTCs foram quantificadas pelo sistema ISET e analisadas por imunocitoquímica. Proteínas envolvidas na TEM (vimentina, TGFß-RI e MMP2) foram analisadas em todas as CTCs. Resultados: Foram incluídos 21 pacientes. A mediana de CTCs detectadas foi de 22, 20 e 8 CTCs/8 ml de sangue no baseline, primeiro e segundo seguimentos, respectivamente. Na correlação entre número de CTCs e as características clínicas levantadas, SLP, SG não houve correlação estatisticamente significante. Nos marcadores de TEM não houve diferença de SLP e SG entre os grupos que apresentaram e não apresentaram marcação. Conclusão: As CTCs não se mostraram relevantes na comparação dos achados clínicos, SLP e SG em pacientes com câncer de pâncreas. No entretanto, pode ser que para a análise de marcador seja útil, como observado pelas curvas separadas de expressão de MMP-2 e TGFß-RI nas CTCs.
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Humains , Mâle , Femelle , Adulte , Adulte d'âge moyen , Sujet âgé , Sujet âgé de 80 ans ou plus , Tumeurs du pancréas/sang , Adénocarcinome/sang , Matrix metalloproteinase 2/sang , Récepteur de type I du facteur de croissance transformant bêta/sang , Cellules tumorales circulantes/composition chimique , Tumeurs du pancréas/anatomopathologie , Valeurs de référence , Facteurs temps , Vimentine/sang , Adénocarcinome/anatomopathologie , Marqueurs biologiques tumoraux/sang , Études prospectives , Évolution de la maladie , Charge tumorale , Estimation de Kaplan-Meier , Transition épithélio-mésenchymateuse , Grading des tumeurs , Cellules tumorales circulantes/anatomopathologie , Stadification tumoraleRésumé
Resumen Generalmente la embolia pulmonar puede ser resultado de una trombosis, sin embargo, existen otros tipos de embolismos pulmonares. Se describe el caso de una paciente de 44 años de edad con artritis reumatoide, uso de terapia biológica y sin diagnóstico previo de cáncer, que presentó embolismo pulmonar en el contexto de trombosis venosa en miembros inferiores sin respuesta a la anticoagulación por lo que se estudiaron otras posibles etiologías, documentando finalmente embolismo tumoral por adenocarcinoma de origen desconocido posiblemente de mama. La posibilidad de embolia pulmonar tumoral se debe considerar ante la no respuesta al tratamiento con anticoagulación.
Abstract Pulmonary embolism is usually caused by thrombosis; however there are other types of pulmonary embolisms. The case is presented of a 44 year-old patient with rheumatoid arthritis on biological therapy, with no previous diagnosis of cancer. The patient had a pulmonary embolism in the context of venous thrombosis in the lower limbs, with no response to anticoagulation treatment. It was finally documented as a tumour embolism due to adenocarcinoma of unknown origin, possibly of the breast. The possibility of a pulmonary tumour embolism should be considered in the absence of a response to anticoagulation therapy.
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Humains , Embolie pulmonaire , Cellules tumorales circulantes , EmbolieRésumé
OBJETIVO: Avaliar a possibilidade de identificação de células malignas circulantes nas amostras de sangue periférico de pacientes brasileiros com melanoma maligno de coróide enviadas para análise no exterior. MÉTODOS: Os marcadores melan-A e tirosinase foram usados para detectar a presença de células malignas circulantes, pela transcrição reversa seguida de reação em cadeia da polimerase e análise seqüencial de DNA (RT-nested-PCR), em seis pacientes com melanoma maligno de coróide, diagnosticados no Brasil. RESULTADOS: Cinco pacientes deste grupo (83,33 por cento) foram considerados positivos. A reação de RT-nested-PCR foi positiva para melan-A em quatro (66,7 por cento) e positiva para tirosinase em quatro (66,7 por cento) dos seis pacientes testados. Três (50 por cento) pacientes foram positivos para os dois marcadores. Um (16,7 por cento) paciente foi negativo para ambos marcadores. CONCLUSÃO: A pesquisa de células malignas circulantes usando RT-nested-PCR, foi positiva na maioria dos pacientes estudados. A qualidade das amostras de sangue periférico dos pacientes brasileiros foi mantida no material preservado mesmo após ter sido enviado ao exterior.
PURPOSE: The purpose of our study was to detect circulating malignant cells (CMCs) in oversea-shipped blood samples of patients with uveal melanoma diagnosed in Brazil. METHODOS: Melan-A and tyrosinase were the two markers used for the detection of CMCs, using reverse transcriptase nested polymerase chain reaction (RT-nested-PCR) in 6 patients with uveal melanoma. The expression of beta-actin and GAPDH were used to assess the quality of the material. RESULTS: Five patients (83.33 percent) tested positive for the presence of CMCs. The RT-nested-PCR was positive for melan-A in 4 patients (66.7 percent) and positive for tyrosinase in 4 (66.7 percent) of the 6 patients. Three (50 percent) patients were positive for both markers. One (16.7 percent) patient was negative for both markers. All negative controls were negative. CONCLUSION: The quality of the blood samples shipped overseas, from patients with uveal melanoma, was preserved. The detection of CMCs using RT-nested-PCR was positive in the majority of the patients.