Résumé
The aim of this study was to determine the effect of the auxin 2,4-D (2,4-dichlorophenoxyacetic) in calli formation from leaf and nodal segments of genipap and to characterize its growth curve. Explants obtained from shoots previously established from in vitro seedlings were used for calli induction. The experimental design was completely randomized in a 3x5x2 factorial with three accessions (NB, SA, SAL), five concentrations of 2,4-D (0.0; 2.0; 4.0, 6.0 or 8.0 mg L-1) and two times of measurement for calli fresh weight (30 and 60 days). There was callus formation in all treatments tested. It was observed that the best response for callus induction from leaf segments was with 2.0 mg L-1 of 2,4-D. For the nodal segment, the response among the accessions was different due to 2,4-D concentrations. The growth curve was plotted according to the fresh weight of callus obtained at intervals of 10 days up to 60 days. Through the established growth curve, the nodal-derived calli from accession SA should be transferred to a new medium, after 40 days of culture.
O objetivo desse trabalho foi determinar o efeito da auxina 2,4-D (ácido diclorofenoxiacético) na calogênese de segmentos foliar e nodal de jenipapeiro e caracterizar sua curva de crescimento. Explantes obtidos de brotações pré-estabelecidas a partir de plântulas in vitro foram utilizados na indução de calos. O delineamento experimental utilizado foi o inteiramente casualizado em esquema fatorial 3x5x2, com três acessos (NB, SA e SAL), cinco concentrações de 2,4-D (0,0; 2,0; 4,0; 6,0 ou 8,0 mg L-1) e dois tempos de avaliação (30 e 60 dias) da massa fresca de calos. Houve formação de calos em todos os tratamentos testados. Observou-se que a melhor resposta de indução ocorreu na concentração de 2,0 mg L-1 para calos oriundos de segmentos foliares. Para o segmento nodal a resposta entre os acessos foi diferenciada em função das concentrações de 2,4-D. A curva de crescimento foi plotada a partir da massa fresca dos calos obtida em intervalos de 10 dias até os 60 dias. Através da curva de crescimento estabelecida, os calos derivados de segmentos nodais do acesso SA devem ser transferidos para um novo meio de cultura, 40 dias após à inoculação.
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Rubiaceae , Plant , Courbes de croissanceRésumé
ABSTRACT Piper permucronatum is a perennial shrub, a medicinal plant native to the Amazon Rainforest. Traditionally, the tea of its leaves is used to combat menstrual and intestinal cramps, stomach pain, digestive problems, diarrhea, hemorrhage, and nausea. Its leaf’s essential oil is effective against Aedes aegypti larvae; its flavones and flavanones have a fungicidal effect against Clamidosporium cladosporioides and C. sphaerospermum; its hexanic extract is effective against Leishmania amazonensis. The objective of this study was to provide a protocol for callus induction from P. permucronatum leaves and an identification of the callus growth pattern, focusing on the deceleration phase, when the callus cells must be subcultured into liquid medium in order to produce a cell suspension cultures. Leaf explants were inoculated in a solid MS medium supplemented with factorial combinations of 2,4-D, BA, NAA and GA3. Callus formation was evaluated weekly until the 49th day. Subsequently, new explants were inoculated at the hormonal combination that resulted in the highest callus cell proliferation and, every seven days during a period of 70 days, samples were dried and weighed to determine the callus growth pattern. NAA and GA3 were not effective for callus induction. Combinations of 2,4-D and BA resulted in callus induction and proliferation. The highest percentage of callus induction was observed with the combination of 4.52 µM 2,4-D and 4.44 µM BA. The calluses thereby produced were friable and whitish. The callus growth pattern followed a sigmoid shape. The deceleration phase started on the 56th day of culture.
RESUMO Indução e padrão de crescimento de calos de folhas de Piper permucronatum. Piper permucronatum é um arbusto perene, uma planta medicinal native da Floresta Amazônica. Tradicionalmente, o chá de suas folhas é usado em casos de cólicas menstruais e intestinais, dores de estômago, problemas digestivos, diarreia, hemorragia e náusea. O óleo essencial das folhas é efetivo contra a larva de Aedes aegypti; suas flavonas e flavanonas têm efeito fungicida contra Clamidosporium cladosporioides e C. sphaerospermum; seu extrato hexânico é efetivo contra Leishmania amazonensis. O objetivo deste trabalho foi determinar um protocolo para indução de calos em folhas de P. permucronatum e identificar o padrão de crescimento dos calos, com foco na fase de desaceleração, quando as células de calo devem ser subcultivadas em meio líquido para produzir culturas de células em suspensão. Explantes foliares foram inoculados em meio MS sólido suplementado com combinações fatoriais de 2,4-D, BAP, ANA e GA3. A formação de calos foi avaliada semanalmente até o 49º dia. Posteriormente, novos explantes foram inoculados na combinação hormonal que resultou na maior proliferação de células de calo e, a cada sete dias durante 70 dias, amostras foram secas e pesadas para determinar o padrão de crescimento dos calos. ANA e GA3 não foram efetivas para a indução de calos. Combinações de 2,4-D e BAP resultaram em indução e proliferação de calos. A maior porcentagem de indução de calos foi observada com a combinação de 4,52 µM de 2,4-D e 4,44 µM de BAP. Os calos produzidos eram friáveis e esbranquiçados. O crescimento dos calos seguiu um padrão sigmoide. A fase de desaceleração iniciou no 56º dia de cultivo.
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Facteur de croissance végétal/analyse , Piperaceae/classification , Plantes médicinales/classification , DécélérationRésumé
O objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito de BAP e AIB sobre a formação de calos a partir de explantes foliares de Jatropha curcas L. (acesso JCUFS-012), descrever a curva de crescimento e realizar análise histológica dos calos. O delineamento experimental foi o inteiramente casualizado, em esquema fatorial 5x4, com cinco concentrações de BAP (0,0; 0,5; 1,0; 2,0 e 3,0 mg.L-1) e quatro de AIB (0,0; 0,5; 0,75 e 1,0 mg.L-1). Durante o experimento, a curva de crescimento dos calos foi acompanhada e mensurada aos 0, 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60 dias de cultivo. A análise histológica foi realizada a partir de calos crescidos em meio MS acrescido de 1,0 mg.L-1 de BAP e 0,5 mg.L-1 de AIB, após 60 dias de cultivo. A interação dos reguladores de crescimento BAP e AIB proporcionou a formação de calos compactos e posterior regeneração de brotações. Um maior número médio (6,2) de brotos por calo foi observado quando se adicionou ao meio de cultivo 1,65 mg.L-1 de BAP. A curva de crescimento de calos apresentou cinco fases distintas: lag, exponencial, linear, estacionária e desaceleração. Na análise histológica dos calos de J. curcas fica evidenciado a organogênese indireta pela formação de brotos adventícios, que apresentam conexão cambial com os tecidos dos calos.
The aim of this study was to evaluate the effect of IBA and BAP on callus formation from leaf explants of Jatropha curcas L. (accession JCUFS-012), describing the growth curve and histological analysis of the callus. The experimental design was completely randomized in a 5x4 factorial design with five concentrations of BAP (0.0, 0.5, 1.0, 2.0 and 3.0 mg. L-1) and four of IBA (0.0, 0.5, 0.75 and 1.0 mg.L-1). During the experiment, the growth curve of the calli was monitored and measured at 0, 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60 days of cultivation. Histological analysis was performed from calli grown on MS medium supplemented with 1.0 mg.L-1 of BAP and 0.5 mg.L-1 of IBA after 60 days of cultivation. The interaction of the growth regulators BAP and IBA provided the formation of compact calli and subsequent regeneration of shoots. A higher number (6.2) of shoots per callus was observed when 1.65 mg.L-1 of BAP was added to the culture medium. The growth curve of calli showed five distinct phases: lag, exponential, linear, stationary and deceleration. On histological analysis of callus J. curcas, indirect organogenesis was evidenced by the formation of adventitious shoots, that presented cambial connection with the callus tissue.
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Facteur de croissance végétal , Jatropha , Organogenèse des plantesRésumé
A aroeira-do-sertão (Myracrodruon urundeuva Fr. All.) é espécie arbórea que apresenta grande valor econômico devido às propriedades químicas da casca com elevado teor de taninos. Em decorrência da exploração predatória encontra-se inserida na lista oficial de espécies da flora brasileira ameaçadas de extinção na categoria vulnerável. A micropropagação vem sendo colocada como importante forma de multiplicação dessa espécie, na busca de alternativa para a exploração sustentável. Este trabalho foi realizado com o objetivo de induzir calos a partir de segmentos foliares usando 2,4-D e caracterizá-los quanto aos aspectos morfológicos e bioquímicos. Os resultados obtidos indicam que é possível induzir calos a partir de segmentos foliares de aroeira-do-sertão utilizando-se 2,4-diclorofenoxiacético (2,4-D). Os calos obtidos foram compactos e não-embriogênicos, apresentando valores médios de 43,32 mg g-1 de açúcares solúveis totais; 23,62 mg g-1 de açúcares redutores; 3,157 mg g-1 de proteína total; 3,147 mg g-1 de aminoácidos livres e 0,914 mg g-1 de compostos fenólicos totais na matéria fresca.
"Aroeira-do-sertão" (Myracrodruon urundeuva Fr. All.) is a tree species that has great economic value due to the chemical properties of its bark, which has high tannin content. On account of the predatory exploitation it has been placed in the official list of threatened species of the Brazilian flora, in the vulnerable category. Micropropagation has been considered an important form of multiplication of this species in the search for an alternative for its sustainable exploitation. This study was conducted with the aim of inducing callus from leaf segments using 2,4-D and characterizing them according to their morphological and biochemical aspects. The obtained results indicate that it is possible to induce callus from leaf segments of M. urundeuva using 2,4-dichlorophenoxyacetic (2,4-D). The obtained calluses were compact and non-embryogenic, with average values of 43.32 mg g-1 total soluble sugars, 23.62 mg g-1 reducing sugars, 3.157 mg g-1 total protein, 3.147 mg g-1 free-form amino acids and 0.914 mg g-1 phenolic compounds in the fresh matter.
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Biochimie , Bursera/croissance et développement , Microscopie électronique à balayage/méthodes , Amélioration des plantesRésumé
Os objetivos deste trabalho foram: desenvolver um protocolo de desinfestação superficial de sementes, selecionar uma metodologia de germinação in vitro, avaliar o potencial de regeneração no cultivo in vitro e a influência do tempo de cultivo no tipo de calo formado e na regeneração a partir de calos de calêndula. Para a desinfestação superficial, foram testados diferentes tempos de imersão em solução de hipoclorito de sódio a 2,5 por cento. Na germinação in vitro, foram testados: imersão em ácido sulfúrico absoluto; imersão em ácido clorídrico absoluto; retirada do tegumento e embebição das sementes; e embebição das sementes sem a retirada do tegumento. Para avaliar o potencial de regeneração in vitro, foram testadas diferentes concentrações de 6-benzilaminopurina (BAP) e ácido alfa-naftaleno acético (ANA) e tempos de cultivo. A imersão em solução de hipoclorito de sódio a 2,5 por cento por 30 minutos aliada à remoção do tegumento promove a germinação in vitro de sementes de calêndula, efetuando uma desinfestação superficial satisfatória. Para a regeneração de partes aéreas e raízes a partir de sementes de calêndula não é necessária a suplementação com fitorreguladores. Na presença de BAP, independentemente da presença ou não de ANA, calos primários induzem à formação de calos esponjosos e friáveis e de calos verdes e rígidos, estes em menor número; na ausência de BAP é induzida a formação de calos pequenos. Calos jovens são mais eficientes em regenerar partes aéreas em calêndula.
The aims of this paper were: to develop a protocol of superficial disinfestation of marigold seeds; to select a methodology of germination in vitro of marigold seeds; to evaluate the potential regeneration of in vitro culture of marigold; and the influence of in vitro culture time in the kind of callus formed. The superficial disinfestation was perfomed by different times of immersion in 2.5 percent sodium hypoclorite solution. The methodology was tested by immersion in sulfuric acid; immersion in chloridric acid; removal of tegument and soaking of seeds; and just seeds soaking. To evaluate the potential of in vitro regeneration were tested different concentrations of growth regulators and culture times. The immersion in 2.5 percent sodium hypochlorite solutions for 30min coupled with the removal of tegument promote the in vitro germination and superficial disinfestation of marigold seeds satisfactorily. Primary calli in BAP presence, with or without ANA, induce formation of spongy and friable calli and of green and hard calli, these are in least amount. Young calli are more efficient to regenerate aerial parts.
Résumé
Sideroxylon obtusifolium belongs to the family Sapotaceae which occurs in the Southwest and Northeast of Brazil. It is used in folk medicine due to its anti-inflammatory and hypoglycemic properties. The intense use of its barks and the lack of cultivation of the plant made rare its occurrence in the natural habitat. This study was performed in order to get information about the biomass production of this native species using the techniques of plant tissues culture. The Murashige & Skoog (1962) and Gamborg et al. (1968) culture media containing auxin 2,4-dichlorophenoxyacetic and kinetin kin were used for callus induction. Fragments of leaves were used as explants and sterilized with sodium hypochlorite for 40 minutes. The best outcome for callus induction was obtained with concentrations of auxin/kinetin of 0.1 mg/L / 1 mg/L in the Murashige & Skoog culture medium.
Sideroxylon obtusifolium é uma planta medicinal pertencente à família Sapotaceae que ocorre no Sudoeste e Nordeste do Brasil, utilizada por possuir propriedades antiinflamatórias e hipoglicêmicas. O uso intenso das cascas e a falta de cultivo da planta tornaram rara sua ocorrência no habitat natural. O objetivo deste estudo foi obter informações sobre a produção de biomassa desta espécie nativa utilizando as técnicas da cultura de tecidos vegetais. Foram utilizados os meios de cultura de Murashige & Skoog (1962) e o de Gamborg et al. (1968) adicionados de auxina 2,4-diclorofenoxiacético e cinetina kin, para a indução da calogênese. Fragmentos de folhas foram usados como explantes, esterilizados com solução de hipoclorito de sódio por 40 minutos. Este estudo demonstrou que o melhor resultado para a calogênese foi obtido com as concentrações de auxina/cinetina de 0,1 mg/L / 1mg/L em meio de cultura de Murashige & Skoog.
Résumé
Croton urucurana Baill., a species belonging to the family Euphorbiaceae, can be useful in the recovery of degraded riparian areas. In the traditional medicine, it is widely used as cicatrizant and in the treatment of rheumatism. However, its seeds present dormancy and low viability, making the propagation of this species a challenge. With the objective of establishing an alternative route for the propagation, the effect of different concentrations of 2,4-D (2,4- dichlorophenoxyacetic acid) with BAP (6-benzylaminopurine) or TDZ (thidiazuron) and of NAA (1-naphthaleneacetic acid) with BAP and their possible combinations were evaluated for callus induction in leaf segments. Callus fresh mass was evaluated forty-five days after inoculation. The isolated use of BAP and the combination of NAA with BAP did not promote calogenesis in leaf segments. Even though the combination of 2,4-D with BAP or TDZ had induced the formation of callus, it was the isolated use of 2,4-D that provided the highest callus fresh mass.
A sangra d'água, espécie pertencente à família Euphorbiaceae, apresenta potencial na recuperação de matas ciliares degradadas e é extensamente utilizada na medicina tradicional, como cicatrizante e no tratamento de reumatismos. Entretanto, suas sementes apresentam dormência e baixa viabilidade, dificultando a propagação desta espécie. Avaliou-se o efeito de diferentes concentrações de 2,4-D e BAP ou TDZ e de ANA e BAP, com suas possíveis combinações, na indução de calos em segmentos foliares de sangra d'água. Quarenta e cinco dias após a inoculação, foi avaliado o peso fresco dos calos. O uso de BAP isoladamente e a combinação entre ANA e BAP não promoveram calogênese em segmentos foliares de sangra d'água. Embora a combinação de 2,4-D e BAP ou TDZ tenha induzido a formação de calos, o uso isolado de 2,4-D proporcionou o maior peso fresco destes.