Sujets)
Mâle , Femelle , Humains , Carcinome épidermoïde , Oesophage , Papillome , Infections à papillomavirusRésumé
O câncer de esôfago encontra-se entre os dez tipos de câncer mais incidentes no mundo, sendo o sexto tipo mais mortal. Fatores genéticos, como mutações no gene TP53, e epigenéticos como, por exemplo, a hipermetilação das ilhotas CpG na região promotora de determinados genes, são eventos importantes no desenvolvimento do câncer e podem causar a inativação de genes supressores de tumor. Neste trabalho, avaliamos o perfil de mutação no gene TP53 em 101 pacientes com carcinoma epidermóide de esôfago (CEE) residentes na região sudeste do Brasil. Destes pacientes, 33,7% apresentaram mutações nos éxons 5, 6, 7 e 8 com prevalência nos códons 248, 179 e 220. A metilação das citosinas das ilhotas CpG resulta da atividade de uma família de enzimas, as DNA metiltransferases (DNMTs). A hipermetilação destas ilhotas leva à formação de um complexo de proteínas incluindo proteínas que têm afinidade por CpG metilado (MBDs e MeCP) impedindo que ocorra a transcrição. Neste trabalho nós investigamos, por RT-PCR semi-quantitativo, a expressão das DNMT1, DNMT3A, DNMT3B, MBD1, MBD3, MDB4 e MeCP2 em mucosa esofágica normal. Em seguida, analisamos a expressão das DNMTs, MBDs esofagina, p14ARF, p16INK4a e E-caderina em 17 amostras pareadas, tecidos normal e tumoral, de pacientes com carcinoma epidermóide de esôfago (CEE). Todas as enzimas foram constitutivamente expressas na mucosa esofágica normal. Nos tumores, foi observado um aumento significativo na expressão da DNMT3B (p=0,0038) e da MBD4 (p=0,0197) em relação à mucosa normal adjacente. A expressão dos genes esofagina, p14ARF e p16INK4a, no tecido tumoral, foi ausente ou reduzida em 64,7%, 52,9% e 58,8% das amostras, respectivamente. Apenas 11,7% das amostras de CEE mostraram níveis reduzidos de E-caderina. Quando a correlação entre a expressão da DNMTs com esofagina, p14ARF, p16INK4a e E-caderina, foi analisada pelo teste de Spearman foi observada uma correlação inversamente proporcional entre a expressão de DNMT3B e esofagina...
Esophageal cancer is one of the ten most common malignancies and it is the sixth cause of cancer-related death in the world. Genetic alterations, such as TP53 mutations and epigenetic modifications, such as the hypermethylation of CpG islands, are important events in cancer development and are a common way of inactivating tumor suppressor genes. in this study, we analyzed the spectrum of TP53 mutations in 101 patients with esophageal squamous cell carcinoma (ESCC) living in Southeastern Brazil. Among those patients, 33.7% showed mutations in exons 5, 6, 7 e 8 and these alterations are prevalent in codons 248, 179 and 220. Cytosine methylation is established and maintained by a family of DNA methiltransferase enzymes (DNMTs). Hypermethylation of CpG dinucleotides initiates the formation of a protein complex, including proteins who bind these methylated residues (MBDs and MeCP2), leading to transcriptional repression. We investigated, by RT-PCR, the expression of human DNMT1, DNMT3A, DNMT3B, MBD1, MBD2, MBD3, MBD4 and MeCP2 in normal esophageal mucosa. Then, we analyzed the mRNA expression of these DNMTs, MBDs, esophagin, p14ARF, p16INK4a and E-cacherin in 17 esophageal squamous cell carcinoma (ESCC) samples as well as their adjacent normal epithelial tissues. The expression of esophagin, p14ARF and p16INK4a was absent of reduced in 64.7%, 52.9% and 58.8% of the ESCC samples, respectively. Only 11.7% of the ESCC samples showed reduced levels of E-cadherin mRNA. When the correlation between mRNA expression of the DNMTs and these genes was analyzed by the Spearman rank test we observed that it was inversely correlated for DNMT3B and esophagin (p=0.0112), p14ARF (p=0.0384) and p16INK4a (p=0.0378). The results suggest that DMNT3B overexpression may be involved in the suppression or in the lower expression of p14ARF and p16INK4a seen in esophageal ESCC. Consequently, we selected DNMY3B, MBD4, p14ARF e p16 INK4a to be analyzed by real time PCR...
Sujets)
Humains , Carcinome épidermoïde/génétique , /analyse , /génétique , Épigenèse génétique , Extinction de l'expression des gènes , /génétique , Méthylation de l'ADN/génétique , Tumeurs de l'oesophage/génétique , ADN tumoral/génétique , Analyse de séquence d'ADNRésumé
RACIONAL: O câncer de esôfago está entre as seis neoplasias malignas mais comuns do mundo. Devido à sua grande agressividade clínica, o subtipo carcinoma epidermóide constitui um dos tumores de pior prognóstico, com alto índice de morbi-mortalidade. Marcadores de biologia molecular tem sido apontados como forte coadjuvante no diagnóstico e graduação de tumores. A angiogênese, evento essencial para a progressão tumoral, pode ser estudada pelo marcador CD34. OBJETIVO: Determinar por citofotometria, usando o sistema SAMBA 4000, a expressão do marcador CD34 no carcinoma epidermóide de esôfago e, correlacioná-los com dados clínico-patológicos (idade, sexo, grau de diferenciação do tumor, estadio, tamanho, localização, profundidade e acometimento de linfonodos). MÉTODOS: Avaliaram-se 29 amostras teciduais de carcinoma epidermóide de esôfago utilizando-se coloração imunoistoquímica com marcador anti-CD34. A quantificação da expressão deste marcador foi realizada por citometria de imagem, pelo sistema SAMBA 4000 nas variáveis índice de marcagem e densidade óptica. A correlação entre subgrupos e análise estatística dos resultados foi realizada com o programa SPSS. RESULTADOS: A expressão média do marcador CD34 foi de 73,40% + 15,20 no índice de marcagem e 56,10 + 23,54 na densidae óptica. O CD34 não apresenta correlação estatisticamente significativa com as características clínico-histopatológicas estudadas (idade, sexo, grau de diferenciação do tumor, estadio, tamanho, localização, profundidade e acometimento de linfonodos). CONCLUSÃO: O marcador CD34 apresenta expressão no carcinoma epidermóide de esôfago, com maior valor no índice de marcagem em relação à densidade óptica. Ele4 não apresenta correlação com as características clínico-histopatológicas estudadas.
BACKGROUND: Esophagus carcinoma is rated among the six more common malignant neoplasias in the world. Due to its aggressive clinical presentation, squamous cell carcinoma of the esophagus is well known to have one of the poorest prognoses, exhibiting high morbid-mortality rates. Molecular biology markers have been pointed out as great predictors in tumors diagnoses and staging. Angiogenesis, an essential event for tumor progression, can be studied using CD34 marker. AIM: To determine, by computerized image cytophotometric study, using SAMBA 4000, the expression of CD34 in squamous cell carcinoma of the esophagus and correlate the results with the clinical-pathological data (age, gender, differentiation tumor graduation, staging, size, tumor localization, depth, and lymph node metastases). METHODS: Twenty-nine recovery of sampled-tissue squamous cell carcinoma of the esophagus were evaluated using immunohistochemistry staining with anti-CD34 marker. Analysis of tumor expression marker was submitted to SAMBA reading using the following parameters: labeling index and optical density. Correlations among samples and statistical analysis were possible using SPSS program. RESULTS: The average labeling index for CD34 was 73,40% + 15,20 and as for optical density was 56,10 + 23,54 pixels. CD34 doe not show significant statistical correlation with clinical-pathological features considered (age, gender, differentiation tumor graduation, staging, size, tumor localization, depth, and lymph node metastases). CONCLUSION: CD34 marker demonstrates expression in squamous cell carcinoma of the esophagus, presenting a greater labeling index value than optical density. The respective tumor marker does not show correlation with the clinical-pathological features considered in the study.
Résumé
RACIONAL: O carcinoma epidermóide do esôfago apresenta alta mortalidade, baixo índice de diagnóstico precoce e altos custos nos tratamentos, com resultados freqüentemente desapontadores e prognóstico sombrio. O melhor entendimento das técnicas de biologia molecular com citofotometria de imagem, permitiu avançar no conhecimento das alterações na expressão das proteínas desse câncer. OBJETIVOS: Quantificar a expressão das proteínas envolvidas na angiogênese e correlacioná-las com variáveis clínico-patológicas. MÉTODOS: Com o uso da técnica de imunoistoquímica, citofotometria de imagem pelo sistema SAMBA, foram analisadas 29 amostras de carcinoma epidermóide do esôfago incluídas em blocos de parafina. Critérios clínicos como idade, sexo e histopatológicos do grau de diferenciação tumoral, tamanho e localização do tumor foram analisados. Os parâmetros analisados foram o índice de marcagem e a densidade óptica. O marcador utilizado foi o anticorpo anti-Fator VIII. RESULTADOS: Foi possível verificar que as expressões médias do marcador no índice de marcagem foram maiores que as da densidade óptica. Fator VIII apresentou leituras homogêneas. O índice de marcagem foi de 80,17+/-10,40 com P=0,073 e a densidade óptica 51,25+/-11,02 com P=0,245. CONCLUSÃO: A análise quantificação da expressão das proteínas envolvidas na angiogênese permite definir subgrupos de acordo com a diferenciação do carcinoma, estágio tumoral, tamanho e localização do tumor, porém não associa-se com o sexo e a idade dos pacientes, e a densidade óptica do Fator VIII não tem expressão significativa em nenhum dos subgrupos analisados.
BACKGROUND: Squamous cell carcinoma of the esophagus exhibits high mortality rate, rare precocious diagnosis, and expensive treatments, presenting frequently disappointed results and poor prognosis. The better understanding about Molecular Biology techniques using cytophotometric imaging allowed to progress knowledge on protein expression alterations for such neoplasia. AIM: To quantify protein expression implicated in the angiogenesis process and correlate to clinical-pathological features. METHODS: Using immunohistochemistry procedure, cytophotometric imaging by SAMBA, 29 sampled-tissue embedded in paraffin blocks of squamous cell carcinoma of the esophagus were analyzed. Clinical criteria, such as age and gender, as well as histophatological criteria, such as differentiated grade features, size and tumor location, were considered. Parameters evaluated were labeling index and optical density. The marker used in the present study was antifactor VIII. RESULTS: Verification on the expression of the marker in labeling index parameter was greater than optical density. Factor VIII presented homogeneous reading out. Labeling index was 80,17 + 10,40 (P=0,073) and optical density 51,25 + 11,02 (P=0,245). CONCLUSION: Protein expression reading analysis involved in angiogenesis process allows to define subgroups according to differentiated grade carcinoma, tumoral staging, size and tumor localization, although it does not allow association with gender and patient age. Optical density for factor VIII does not have statistical significant expression in any subgroup evaluated.
Résumé
INTRODUÇÃO: O carcinoma epidermóide de esôfago (CEE) possui alta incidência em nosso país, com altas taxas de mortalidade. A família dos receptores do fator epitelial de crescimento (EGFR) é composta por quatro membros, e muitos estudos têm sido direcionados para a expressão de EGFR e c-erbB-2, com implicações terapêuticas. OBJETIVO: Investigar as expressões imuno-histoquímicas de EGFR e c-erbB-2 e correlacioná-las a aspectos clinicopatológicos em casos de CEE. MATERIAL E MÉTODOS: Para esse estudo, dados clinicopatológicos de 613 CEE foram revistos. A imunoistoquímica foi feita utilizando anticorpo policlonal para c-erbB-2 e monoclonal para EGFR em 597 e 585 casos, respectivamente. Os casos representados por peças cirúrgicas foram distribuídos em três blocos de parafina de tissue microarray (TMA), inseridos em duplicata; aqueles com biópsias foram analisados em corte convencional. Todos foram classificados de acordo com intensidade e padrão de marcação de membrana das células tumorais. RESULTADOS: As expressões de c-erbB-2 e EGFR foram observadas em 42,4 por cento e 77,6 por cento dos casos, respectivamente. Observou-se correlação estatisticamente significativa entre as expressões de c-erbB-2 (p = 0,04) e EGFR (p = 0,01) e grau histológico. Ambos os marcadores foram significativamente mais expressos em casos bem/moderadamente diferenciados do que nos pouco diferenciados/indiferenciados. Embora não tenha sido significativa, houve uma tendência de associação entre superexpressão de c-erbB-2 e sítio do tumor, em que casos positivos ocorreram com mais freqüência no terço médio do esôfago. Nenhuma correlação significativa foi verificada entre essas proteínas e sobrevida global. CONCLUSÃO: Os resultados podem sugerir um papel primordial para essas proteínas na diferenciação tumoral em CEE.
INTRODUCTION: Esophageal squamous cell carcinoma (ESCC) is highly prevalent in Brazil, and responsible for high mortality index. The epidermal growth factor receptor (EGFR) family has four members and much attention has been focused on the expressions of EGFR and c-erbB-2 with therapeutic implications. OBJECTIVE: The aim of the present study was to investigate immunohistochemical expressions of c-erbB-2 and EGFR in ESCC, and correlate them with clinicopathological data. MATERIAL AND METHODS: Medical records of 613 patients with ESCC were reviewed. Immunohistochemistry was carried out using polyclonal c-erbB-2 and monoclonal EGFR in 597 and 585 cases, respectively. Cases represented by surgical resections were performed in three tissue microarray (TMA) paraffin blocks spotted in duplicate; those with small biopsies without surgical resections were performed individually. All cases were scored according to intensity and pattern of membrane staining of tumor cells. RESULTS: The expressions of c-erbB-2 and EGFR were observed in 42.4 percent and 77.6 percent of the cases, respectively. A significant correlation was found between c-erbB-2 (p = 0.04) and EGFR (p = 0.01) expressions and histological grade. Both markers were significantly more expressed in well/moderate differentiated ESCC than in poorly differentiated ESCC. Although it was not significant, there was a tendency of association between c-erbB-2 overexpression and tumor location, in which positive cases occurred more frequently in the middle third of the esophagus. There was no correlation with overall survival. CONCLUSION: The results may suggest a role for these markers in tumoral differentiation in ESCC.