Toxocara canis y asma bronquial / Toxocara canis and bronchial asthma

A fin de evaluar la relación entre la infección por Toxocara canis y los síntomas del asma bronquial en niños de una región subtropical con alta prevalencia de toxocariosis, se estudiaron 47 niños con asma y 53 sin asma como grupo control. Se efectuó el examen físico completo, registrándose datos clínicos y epidemiológicos. En los niños con asma se categorizó el patrón de presentación, frecuencia y gravedad de los síntomas con una escala de I a IV. Se investigó la presencia de anticuerpos anti-Toxocara canis en ambos grupos mediante el método de ELISA en fase sólida, empleando antígeno de excreción/secreción y se efectuó dosaje de Ig E total. Los resultados muestran una seropositividad del 55% en el total de los niños, del 57.4% en los niños con asma y del 52.8% en los controles. En los niños con sintomatología más grave (grado II, III y IV) hubo un 67.7% de seropositivos, mientras que en los niños con síntomas de grado I la seropositividad fue de 37.5% (p = 0.0470). La infección por T. canis actuaría como un co-factor agravante de los síntomas del asma bronquial.

In order to evaluate the association between the infection by Toxocara canis and the symptoms of asthma in children from a subtropical region with high prevalence of toxocariasis, 47 asthmatic children and 53 non-asthmatics as a control group were studied. A complete physical examination was performed and clinical and epidemiological data were registered. In asthmatic children the frequency and severity of symptoms were classified in grades I to IV. The presence of anti-Toxocara canis antibodies in both groups was evaluated employing a solid phase ELISA method with excretion/secretion antigens, and total Ig E was also measured. Results showed a total seropositivity of 55%, 57.4% in children with asthma and 52.8% in the control group. Among asthmatics with severe symptoms (grade II, III and IV), there was a 67.7% of seropositivity while in children with symptoms of grade I there was a 37.5% (p = 0.0470). The infection with T. canis could act as a co-factor increasing the severity of the symptoms of bronchial asthma.

Evaluación de un nuevo inmunoensayo para detectar anticuerpos contra el virus de la hepatitis C / Evaluation of new immunoassay for detection of antibodies against hepatitis C virus

Se evaluó el desempeño de un nuevo inmunoensayo de tercera generación para la detección de anticuerpos contra el virus de la Hepatitis C, HCV ELISA 3ª generación (Wiener-lab. Rosario. Argentina). Este equipo presenta reactivos coloreados para permitir el monitoreo de adición de muestras y control de procesos. Se evaluó la sensibilidad, especificidad y precisión de HCV ELISA 3ª generación mediante 5 paneles de seroconversión, 8 paneles de desempeño, 1 panel de sensibilidad para diferentes genotipos de HCV, 23 muestras de pacientes infectados con diferentes genotipos de HCV, 546 muestras de pacientes infectados, 556 muestras que contenían interferentes potenciales y 3.024 muestras de individuos no infectados. La sensibilidad en paneles de desempeño y en pacientes infectados fue 99,72%, y en muestras de pacientes infectados con diferentes genotipos fue 100%. La especificidad obtenida en muestras de donantes de sangre y Centros de Salud fue 99,50%. Finalmente, en los estudios de precisión se observó un coeficiente de variación intraensayo menor al 10%, e interensayo menor al 15% para muestras reactivas débiles. HCV ELISA 3ª generación, desarrollado por Wiener-lab, presenta un desempeño adecuado para el diagnóstico de la infección por HCV en el laboratorio serológico y en el tamizaje de donantes de sangre.

The performance of a new third-generation Anti-HCV, HCV ELISA third-generation (Wiener-lab. Rosario. Argentina), was evaluated. This kit presents sample addition monitoring and process control. Sensibility, specificity and precision of HCV ELISA 3ª generation were evaluated by means of 5 seroconversion panels, 8 performance panels, 1 worldwide HCV performance panel (which includes different HCV genotypes), on 546 samples of patients infected with HCV, 556 samples containing potentially interfering substances, and 3024 samples of persons not infected with HCV. Sensibility was 99.72% on performance panels and samples of HCV infected patients, and 100% on samples of patients infected with different genotypes. The specificity obtained from samples from blood donors and health centers was 99.50%. Finally, in precision studies the intra-assay coefficient of variation found was smaller than 10% and the inter-assay CV was smaller than 15% for weak reactive samples. In summary, HCV ELISA 3ª generation developed by Wiener-lab presents an adequate performance for the diagnosis of hepatitis C virus infection in clinical laboratory and blood donations screening.

Determinación de anticuerpos IgG contra el ADN de doble cadena mediante ELISA utilizando como recubrimiento ADN xenógeno y alógeno / Determination of IgG antibodies to double-chain DNA by ELISA using the xenogenic and allogenic DNA as coat

El ADN xenógeno empleado como recubrimiento de un inmunoensayo enzimático indirecto, para la determinación de anticuerpos IgG contra el ADN de doble cadena, es de difícil obtención y muy costoso. Por tal motivo, el objetivo del presente trabajo es evaluar la utilidad del ADN alógeno como antígeno de recubrimiento para detectar estos anticuerpos. Se empleó como recubrimiento ADN de timo de ternera y ADN de 6 sujetos supuestamente sanos. El análisis de la presencia de los anticuerpos se realizó en suero de 16 individuos con diagnóstico de Lupus Eritematoso Sistémico. Se obtuvo un 100por ciento de coincidencia en los resultados, así como pocas diferencias en la capacidad de discriminación del método con el empleo de los dos tipos de ADN. Según lo anterior se concluye que el ADN humano es útil como recubrimiento de este enzimoinmunoensayo. La obtención de dicho antígeno es menos costosa que la del ADN de timo de ternera.

Obtaining of the xenogenic DNA used as coat of a indirect enzymoimmunoassay, to determine IgG antibodies to double-chain DNA is difficult, and also it is very expensive. Thus, aim of this paper is to valuate usefulness of allogenic DNA as coat antigen to detect these antibodies. As coat we used DNA from calf thymus, and DNA from 6 subjects supposedly healthy. Analysis of presence of antibodies war carried out in sera from 16 individuals with diagnosis of systemic lupus erythematosus. There was a 100 percent of coincidence in results, as well as a few differences in discrimination ability of method using the two types of DNA. According above mentioned, we conclude that human DNA is useful as coat of this enzymoimmunoassay. Achievement of such antigen is less expensive than that of DNA from calf thymus.

Evaluación de neoantígenos en concentrados de factor VIII analizados por enzimoinmunoensayo / Neoantigens evaluation on F VIII concentrates analyzed by enzymeimmunoassay (EIA)

El propósito de este estudio fue evaluar la inmunogenicidad de concentrados de factor VIII producidos en UNC-Hemoderivados antes y después del tratamiento térmico empleando un enzimoinmunoensayo (EIE) desarrollado en nuestro laboratorio. Materiales y método: Para ese propósito se obtuvieron anticuerpos contra factor VIII calentado y no-calentado por inmunización de conejos y la inmunoglobulina G específica fue aislada por afinidad a Proteína A-Sepharosa. El EIE fue realizado empleando como antígeno de captura el factor VIII con o sin tratamiento térmico (0.5 ug/pocillo), los sitios inespecíficos bloqueados con albúmina al 2 por ciento y el anticuerpo revelado con un anti-IgG de conejo conjugada a peroxidasa. La presencia de neoantígenos fue estudiada por incubar durante 2 hs a 37°C y luego a 4°C toda la noche, con cantidades crecientes de factor VIII antes y después del tratamiento térmico (0.03 a 600 ug de proteínas), con cantidades adecuadas de IgG anti-factor VIII calentado y no-calentado. Luego de centrifugar la muestra para la separación de los inmunocomplejos, se valoró la presencia de anticuerpos en el sobrenadante por EIE tanto para factor VIII calentado y no calentado. Resultados: Los resultados obtenidos permitieron observar que para ambos anticuerpos (calentado y no calentado) se neutralizaba la misma cantidad de factor VIII calentado y no calentado (0.30 ug) y además, se pudo comprobar que esta conducta se repetía cuando se empleaban en el EIE como antígeno de captura, factor VIII con y sin tratamiento térmico. Conclusiones: Los datos obtenidos de este estudio nos permiten concluir que el tratamiento térmico aplicado a los concentrados de factor VIII elaborados en la UNC-Hemoderivados no producen ninguna formación de neoantígenos. A juzgar por el sensible y específico EIE desarrollado en nuestro laboratorio.

Introduction: with the purpose of improving viral security, plasma-derived products are generally subjects of solvent/detergent and heating (100°C for 30 minutes) treatment which are introduced during the manufacturing process. The formation of neoantigens in factor VIII concentrates produced after the heat treatment could trigger an immune response against the modified protein and the native protein. Objetives: the purpose of this study was to evaluate the immunogenicity of factor VIII concentrates produced in UNC-Hemoderivados before and after heat treatment, using an EIA developed in our laboratory. Materials and methods: antibodies against factor VIII with and without heating treatment were obtained by rabbit immunization. The specific IgG was isolated by protein-A-Sepharose affinity chromatograpy. Two EIA plates were coated (0.5 ug/well) one with factor VIII heated (H) and the other one with factor VIII no-heat (no-H) and the antibodies detection were performed using rabbit anti-lgG peroxidase conjugated. The neoantigens were studied by incubation of increasing concentrations of factor VIII (0.03-600 ug of proteins) before and after heating treatment during 2 hours at 37 °C and overnight at 4 °C with adequate concentrations of anti-factor VIII IgG (with and without treatment). The immunocomplexes were removed by centrifugation and the free antibodies in the supernatant were measured by EIA in plates H and no-H. Results: the EIA showed a linear behavior between antibodies dilution ranged from 1/8000 to 1/512000. With these results we can conclude that the same concentration of factor VIII heated and unheated (0.30 ug) were neutralized with either antibodies (heated and unheated). These results were similar in both EIA plates coated with factor VIII H and no-H...