Inmunoserología y métodos moleculares para el diagnóstico de Chagas: revisión sistemática rápida / Immunoserology and molecular techniques for diagnosis of Chagas´ disease: rapid systematic review / Imunoserologia e métodos moleculares para o diagnóstico de Chagas: revisão sistemática rápida

Con el objetivo de incrementar la precisión diagnóstica, la Organización Mundial de la Salud recomienda la realización de dos o más pruebas inmunoserológicas para el diagnóstico de la enfermedad de Chagas en etapa crónica. El objetivo de este trabajo fue realizar una revisión sistemática rápida acerca del desempeño de las técnicas inmunoserológicas y métodos moleculares en la población general. Se identificaron 178 estudios de los cuales fueron incluidos nueve. Las técnicas de ELISA mostraron la mayor sensibilidad (82-98%) y especificidad (96-100%). Los métodos rápidos mostraron valores de sensibilidad entre 88-93% y especificidad 97- 100%, mientras que los métodos moleculares (PCR) presentaron niveles muy variables de sensibilidad (22-92%) y especificidad (70-100%). Estos resultados muestran que las técnicas de ELISA cuentan con una sensibilidad y especificidad adecuadas. La PCR, al igual que los métodos rápidos, mostró una gran variabilidad en los resultados, debido principalmente a la heterogeneidad de la técnicas y profusión de métodos elaborados de manera in house.

In order to increase diagnostic accuracy, the World Health Organization recommends performing two or more immunoserological tests for the diagnosis of Chagas disease in chronic stage. The aim of this work was to make a rapid systematic review of the performance of immunoserological techniques and molecular methods in the general population. A total of 178 studies were identified, nine ofwhich were included. ELISA techniques showed the highest sensitivity (82-98%) and specificity (96-100%). Rapid methods presented values of sensitivity between 88-93% and 97-100% of specificity, while the molecular methods (PCR) showed highly variable levels of sensitivity (22-92%) and specificity (70-100%). These results indicate that ELISA techniques have adequate sensitivity and specificity. PCR, as well as rapid methods, showed great variability in the results, mainly due to the heterogeneity of the techniques and abundance of "in-house" methods.

Visando a aumentar a precisão do diagnóstico, a Organização Mundial da Saúde recomenda executar dois ou mais testes imunoserológicos para o diagnóstico na fase crônica da doença de Chagas. O objetivo deste trabalho foi fazer uma revisão sistemática rápida sobre o desempenho de técnicas imunoserológicas e métodos moleculares na população em geral. Foram identificados 178 estudos dos quais se incluíram nove. Técnicas de ELISA mostraram a maior sensibilidade (82-98%) e especificidade (96-100%). Métodos rápidos apresentaram valores de sensibilidade e especificidade de 88-93% e 97-100%, respectivamente enquanto que os métodos moleculares (PCR) tinham níveis extremamente variáveis de sensibilidade (22-92%) e especificidade (70-100%). Estes resultados mostram que as técnicas de ELISA possuem sensibilidade e especificidade adequadas. A PCR, bem como os métodos rápidos, mostrou grande variabilidade nos resultados, principalmente devido à heterogeneidade das técnicas e profusão de métodos desenvolvidos de modo in house.

Altered indirect hemagglutination method for easy serotyping of Haemophilus parasuis / Método de Hemaglutinação Indireta alterado para facilitar a sorotipificação de Haemophilus parasuis

Glässer's disease is an emergent bacterial disease that affects swine husbandries worldwide causing important economic losses. The aetiological agent, Haemophilus parasuis, is currently divided in fifteen serovars but an increasing number of non-typeable serovars have been reported. Indirect hemagglutination (IHA) is indicated as a serotyping method for H. parasuis. In the present study, we describe an additional step that aims to work around a possible obstacle in the original protocol that may compromise the outcome of this assay. We observed that the choice of anticoagulant for blood collection influences and/or impairs spontaneous adsorption of H. parasuis antigens on sheep red blood cells (SRBCs). However, regardless of the anticoagulant used, chemical treatment of SRBCs with tannic acid induces a stable antigen adsorption (sensitization step). The addition of 1% BSA to SRBCs washing buffer and to antisera dilution augments IHA specificity. Tannic acid treated SRBCs combined with thermo-resistant H. parasuis antigens increases the assay resolution. Thus, our results demonstrate an improvement in the technique of H. parasuis serotyping that will prove valuable to understand Glässer's disease epidemiology and to better characterize serovars involved in outbreaks.(AU)

A Doença de Glässer é uma doença bacteriana emergente que afeta a produção de suínos em todo o mundo e causa importantes perdas econômicas. O agente etiológico, Haemophilus parasuis, é atualmente dividido em quinze sorovares; no entanto, um número crescente de cepas não tipificáveis tem sido relatado. O teste de hemaglutinação indireta (IHA) tem sido utilizado para a sorotipificação de H. parasuis. Neste estudo, descrevemos uma alteração no protocolo original de IHA e que supera uma limitação específica que pode comprometer o uso geral deste ensaio. Descobrimos que o tipo de anticoagulante utilizado para coletar os eritrócitos ovinos (SRBCs) pode comprometer a adsorção espontânea dos antígenos do H. parasuis. Por outro lado, o tratamento químico dos SRBCs com ácido tânico promove uma adsorção antigênica estável (passo de sensibilização) e independente do anticoagulante utilizado. O uso de 1% de BSA durante as lavagens dos SRBCs e na diluição dos antissoros incrementa a especificidade da IHA e, a combinação dos SRBCs tratados quimicamente com antígenos de H. parasuis termo-resistentes aumentam a resolução da IHA. Nossos resultados destacam uma melhoria na principal técnica de sorotipificação de H. parasuis, que auxiliará diretamente no entendimento da epidemiologia da Doença de Glässer e na caracterização dos sorovares envolvidos em surtos da doença.(AU)

Seroprevalence of Toxoplasma gondii in cats (Felis catus, Linnaeus 1758) living in Lima, Peru / Soroprevalência de Toxoplasma gondii em gatos (Felis catus, Linnaeus 1758) residentes em Lima, Peru

The aim of this study was to determine the frequency of infection by T. gondii in cats, by examining serum and fecal samples from animals attended at veterinary clinics in the Metropolitan Region of Lima, Peru. We collected and analyzed 154 cat serum samples and 50 fecal samples, regardless of the age, gender or breed. In parallel with the sample collections, the owners answered an epidemiological questionnaire that investigated the following variables: age group, gender, lifestyle (confined, semi-confined or free-living animals), feeding and hunting habits. The serum and fecal samples were analyzed using indirect hemagglutination (IHA) and coproparasitological tests, respectively. IHA showed that the frequency of cat exposure to T. gondii was 11%. Age and gender showed no association with exposure to the parasite. Exposure among the cats was associated with hunting (x2 = 4.98, p = 0.016) and feeding habits (x2 = 13.34, p = 0.001): those fed with raw meat were more exposed than those fed with commercial cat food (x2 = 9.50, p = 0.004) or with homemade food (x2 = 4.1, p = 0.027). The frequency of cats diagnosed in the chronic phase of T. gondii infection was 88% (15/17). No T. gondii oocysts were found in any of the 50 fecal samples examined.

O objetivo do presente trabalho foi determinar a frequência sorológica e coproparasitológica da toxoplasmose em gatos atendidos em clínicas veterinárias na região metropolitana de Lima, Peru. Foram analisadas 154 amostras de soros de gatos e 50 amostras de fezes de gato, independentemente da idade, gênero ou raça. Paralelamente ao ato da coleta, os proprietários responderam a um questionário epidemiológico onde foram tratadas as seguintes variáveis: faixa etária, gênero, estilo de vida (animais confinados, semiconfinados o de vida livre), hábitos alimentares e de caça. Os soros e amostras fecais foram analisados pelos testes de hemaglutinação indireta (HAI) e coproparasitológico, respectivamente. A frequência de gatos expostos foi 11,0%, segundo HAI. As variáveis de faixa etária e sexo não mostraram associação com a exposição ao parasito. A exposição dos animais mostrou associação com hábitos de caçar (x2 = 4.98, p = 0.016) e alimentação (x2 = 13.34, p = 0.001), sendo aqueles alimentados com carne crua os mais expostos, quando comparados aos alimentados com ração (x2 = 9.50, p = 0.004) ou com comida caseira (x2 = 4.1, p = 0.027). A frequência de gatos na fase crônica da infecção por T. gondii foi 88% (15/17). Não foram achados oocistos de Toxoplasma gondii em nenhuma das 50 amostras de fezes.

Infection by Toxoplasma gondii in Neotropical non-human primates / Infecção por Toxoplasma gondii em primatas neotropicais não-humanos

Toxoplasma gondii (Nicolle et Manceaux, 1909) is an obligatory intracellular protozoan parasite of warm animals, including human and non-human primates. Domestic and wild felids are considered definitive hosts. Several authors have already identified lesions in New World primates caused by T. gondii. Nevertheless, little is known about serological studies on those animals. With this reason, New World non-human primates of the genera Cebus and Callithrix that were apprehended by governmental authorities and sent to the Wildlife Screening Center (Cetas)/IBAMA, at the municipality of Seropédica, state of Rio Janeiro, were bled and sera were submitted to the indirect hemagglutination test for detection of anti-T. gondii antibodies. From 21 sera of Cebus primates, 76.19% (16/21) had anti-T. gondii antibodies. Titles varied from 16 to 2048. In samples from 21 Callithrix, only 4.5% (1/22) had anti-T. gondii antibodies. Only one animal had a title of 32. During all the time those animals were clinical evaluated until sample was collected; none of them had any clinical sign or sequel related to infection by T. gondii. The fact that the origin of these primates is unknown and that there is no information about their feeding habits before captivity makes it difficult to determine the source of T. gondii infection.

Toxoplasma gondii (Nicolle et Manceaux, 1909) é um protozoário parasita intracelular obrigatório de animais homeotérmicos, incluindo primatas humanos e não humanos, e que tem felídeos domésticos e silvestres como hospedeiros definitivos. Inúmeros trabalhos já identificaram lesões causadas por T. gondii em primatas neotropicais, entretanto, poucos estudos abordando a resposta sorológica destes animais ao parasito foram feitos. Com este intuito, primatas neotropicais do gênero Cebus e Callithrix apreendidos por órgãos governamentais e enviados ao Centro de Triagem de Animais Silvestres (Cetas)/IBAMA, no município de Seropédica/RJ, tiveram amostras de sangue coletadas e as alíquotas séricas submetidas ao teste de hemaglutinação indireta para detecção de anticorpos anti-T. gondii. Dos 21 animais do gênero Cebus avaliados, em 76,19% (16/21) das amostras foram identificados anticorpos hemaglutinantes anti-T. gondii. Os títulos hemaglutinantes variaram desde 16 até 2048. Por outro lado, dos 22 primatas do gênero Callithrix cujas amostras séricas foram testadas, apenas 4,5% (1/22) apresentaram anticorpos anti-T. gondii. Apenas o título de 32 foi identificado em um único animal. Durante a avaliação clínica e o tempo em que os animais permaneceram no CETAS, desde a chegada, em nenhum animal foram observados sinais clínicos ou sequelas condizentes com a infecção por T. gondii. O desconhecimento sobre a verdadeira procedência desses símios, bem como os aspectos sanitários relativos à alimentação deles dificulta a determinação da fonte de infecção por T. gondii.

Comparação de técnicas imunológicas in-house empregadas na rotina diagnóstica de cisticercose humana / Comparative analysis on in-house immunologic assays used for performing the routine laboratorial diagnosis of human cysticercosis

Neste estudo foram analisados os resultados obtidos do diagnóstico de cisticercose no Centro de Imunologia do Instituto Adolfo Lutz (IAL), no período de março/2007 a julho/2010. A detecção de anticorpos específicos em 522 amostras de soro e líquido cefalorraquidiano (LCR)foi realizada pelas técnicas de imunofluorescência indireta (IFI) e hemaglutinação indireta (HAI). A frequência de amostras reagentes foi de 11,0% no LCR e 8,2% no soro. Em 50% das amostras não houve informações sobre suspeita clínica de neurocisticercose dos pacientes, sendo disponíveis nos18,3% e 16,4%, em amostras, respectivamente, de LCR e soro. Nas amostras de paciente com suspeita de neurocisticercose, a positividade foi de 22,6% (LCR) e de 18,4% (soro). Houve associação entre a suspeita clínica e a positividade dos testes (p>0.05). A maioria das amostras testadas foi proveniente do Estado de São Paulo, e 16,9% de amostras de LCR e 35,9% de amostras séricas foram enviados de outros Estados do país. Os ensaios de IFI e HAI apresentaram teste de concordância Kappa de 86%. Pela indisponibilidade de kits de reagentes diagnósticos de cisticercose em amostras de LCR no mercado, os testes in-house produzidos no IAL têm sido de grande relevância para os serviços de saúde pública.

Soroepidemiologia de Toxoplasma gondii em gatos domiciliados atendidos em clínicas particulares de Porto Alegre, RS, Brasil / Seroepidemiology of Toxoplasma gondii in domestic cats treated in private clinics of Porto Alegre, Brazil

Com o objetivo de contribuir com dados sobre freqüência de anticorpos para Toxoplasma em felinos domiciliados da cidade de Porto Alegre, Rio Grande do Sul, soros de 245 animais foram testados pelas técnicas sorológicas de Hemaglutinação Indireta (HAI) e Imunofluorescência Indireta (IFI). Informações sobre o animal, tais como raça, sexo, idade, acesso ou não à rua e tipo de alimentação, foram avaliadas por meio de questionário epidemiológico e análise estatística para correlacionar com os resultados obtidos na sorologia. Os resultados dos testes mostraram que os valores encontrados foram de 26,9 por cento (HAI) e 37,9 por cento (IFI), inferindo que esses gatos em algum momento de sua vida foram fonte de contaminação ambiental, sendo eliminadores potenciais de oocistos, principalmente aqueles que tiveram livre acesso à rua.

The sera of 245 cats from Porto Alegre, southern Brazil, were tested by indirect hemagglutination (IHA) and indirect immunofluorescence (IIF) in order to determine the frequency of Toxoplasma antibodies. Information such as breed, sex, age and access or not to the street and dietary habits were assessed using an epidemiological questionnaire and also statistical analysis for correlation with the serological results obtained. The test results showed rates of 26,9 and 37,9 percent for IHA and IIF, respectively, suggesting that these cats have acted as a source of environmental contamination at some time during the course of their lifetime, possibly shedding oocysts, especially those with free access to the street.

Frequência de anticorpos anti-Toxoplasma gondii em suínos abatidos sem inspeção em Belém / Serologic diagnosis of Toxoplasma gondii in swines slaughtered without inspection in Northern Brazil

To survey the occurrence of IgM and IgG anti-T. gondii antibodies in pigs slaughtered without inspection, 110 serum samples from different localities were submitted to indirect hemaglutination test. A frequency of 50.0% (confidence interval 40.7% /.../ 59.3%, 95% significance) of positive sera was detected, with a distribution of frequency of 1.83% and 1.83%, 6.36% and 15.45%, 20.0% and 25.4%, 17.3% and 7.3%, and 4.5% and 0.0% for IgM and IgG antibodies, respectively in 1:16, 1:64, 1:256, 1:1024, and 1:2048 serum dilutions. The toxoplasmic infection was present among pigs in the city of Belém.

Imunoglobulinas antitoxoplásmicas e retinocoroidite em suínos / Antitoxoplasmics imunoglubulins and retinochoroiditis in swine

Soro de 200 suínos abatidos em frigorífico, oriundos de rebanhos intensivos, híbridos, em idade de terminação, da região noroeste do RS, Brasil, foram coletados e testados para imunoglobulinas antitoxoplásmicas através da Hemaglutinação Indireta (HAI). Ao mesmo tempo, fez-se a relação entre soro positivos e a formação de lesões de retinocoroidite através de cortes histológicos em globos oculares, usando a coloração de Hematoxilina-Eosina (HE). A prevalência da infecção toxoplásmica, considerando títulos positivos a partir de 1:64, foi de 18 por cento. Os títulos ficaram entre 1:64 (39 por cento); 1:128 (5,5 por cento); 1:256 (39 por cento); 1:512 (5,5 por cento) e 1:1024 (11 por cento). Alterações histopatológicas encontradas em 3 amostras positivas foram: atrofia da retina (1:64 e 1:256) e hiperemia da mácula (1:256). Pelos resultados obtidos, não foi possível estabelecer uma relação entre retinocoroidite e sorologia positiva nestes animais estudados.

Sera samples derived from 200 finishing pigs from confinement herds, hibrids were used. The sera were collected in abattoirs of me North-west region of Rio Grande do Sul state, Brazil. Tested for antitoxoplasmics immunoglobulins using the Indirect Hemagglutination test (IHA). A relation of the positive sera samples and formation of retinochoroiditis in histological studies with Hematoxilin-Eosin (HE) staining was stablished. The prevalence rate of seropositivity toxoplasmic infection was 18 percent, starting from titers 1:64. The titer varied from 1:64 (39 percent); 1:128 (5.5 percent); 1:256 (39 percent); 1:512 (5.5 percent); 1:1024 (11 percent). Histophathogical alterations findings in 3 positive sera samples were: retinal atrophy (1:64; 1:256) and macular hiperemy (1:256). Retinochoroiditis lesions were not found in the present study.