Using guinea pig as a model for evaluation of equine influenza vaccine

Equine influenza is a highly contagious viral disease, specially among 1-5 years old naive horses. Vaccination is considered the best way to control the disease spread and outbreaks. Although foals are the main animal used for evaluation of equine influenza vaccines, guinea pigs were chosen as an alternative model in the present work, as they have a negligible antibody titer against equine influenza virus and are cheaper and easier to handle than foals. Five equine influenza vaccine batches were evaluated in two animal models, foals and guinea pigs, by injection of two doses/animal with 4 weeks apart using 2 mL/animal/dose and evaluation of immune responses by hemagglutination inhibition test and enzyme-linked immunosorbent assay. On the 7th week post vaccination, equine influenza antibodies titers reached maximum values of 9-10.2 and 8.7-10 hemagglutination inhibition units for foals and guinea pigs, respectively; sample/negative ratios were 0.126-0.464 and 0.128-0.445 for both animals, respectively. The use of guinea pigs as an animal model for the evaluation of equine influenza vaccines could be recommended instead of foals.

La gripe equina es una enfermedad viral muy contagiosa, especialmente entre los caballos jóvenes de 1 a 5 años de edad. La vacunación se considera la mejor forma de controlar la propagación y los brotes de la enfermedad. Aunque los potros son el principal animal utilizado para la evaluación de vacunas contra la gripe equina, en el presente trabajo se eligieron cobayos como modelo alternativo, ya que tienen un título insignificante de anticuerpos contra el virus de la gripe equina y son más baratos y fáciles de manejar que los potros. Se evaluaron cinco lotes de vacunas contra la gripe equina en dos modelos animales, potros y cobayos, mediante la inyección de dos dosis/animal con 4 semanas de intervalo utilizando 2 mL/animal/dosis y la evaluación de las respuestas inmunitarias mediante la prueba de inhibición de la hemaglutinación y el ensayo inmunoenzimático. En la 7ª semana posvacunación, los títulos de anticuerpos contra la gripe equina alcanzaron valores máximos de 9-10,2 y 8,7-10 unidades de inhibición de la hemaglutinación para potros y cobayos, respectivamente; las relaciones muestras/negativos fueron de 0,126-0,464 y 0,128-0,445 para ambos animales, respectivamente. Podría recomendarse el uso de cobayos como modelo animal para la evaluación de vacunas contra la gripe equina, en lugar de potros.

Preparation and evaluation of formalized bivalent Newcastle and Salmonella poultry vaccine

This study was conducted to prepare and evaluate the potency of different inactivated vaccine formulations that protect chickens against Salmonella Enteritidis and Newcastle disease virus using Montanide as adjuvant. Protection and the humoral immune response of prepared vaccines against Salmonella Enteritidis and Newcastle disease virus was evaluated and compared to imported vaccine. In this study, different formulae of Salmonella Enteritidis and Newcastle disease vaccines were prepared and compared with the imported one by measuring the antibody titer against Newcastle disease virus by hemagglutination inhibition test and the antibody titer against Salmonella Enteritidis using Enzyme Linked Immunosorbent Assay. On the other hand, the protection percentages against Newcastle disease and Salmonella Enteritidis were recorded to determine the best effective formula. The highest hemagglutination inhibition antibody level against NDV at first week was recorded for the prepared combined Newcastle disease and Salmonella Enteritidis vaccine (4.2 log2) followed by the prepared monovalent Newcastle disease (3.4 log2); the lowest antibody level (3.1 log2) was obtained with the imported vaccine. A gradual increase was observed in all groups to 7.1 log2, 6.8 log2 and 6.4 log2 at fourth week post vaccination, respectively. The antibody titer against Salmonella Enteritidis was 552 for the prepared combined Salmonella Enteritidis and Newcastle disease, followed by the prepared monovalent Salmonella Enteritidis (477) at first week post vaccination; the antibody titer obtained for the imported vaccine was 477. There was a gradual increase to 1456, 1406 and 1130 at fourth week post vaccination, respectively. Prepared combined vaccines gave the highest protection percentage, followed by prepared monovalent types and finally imported vaccines. Vaccination by the prepared combined Salmonella Enteritidis and Newcastle disease vaccine may be a way to increase the resistance of birds to Salmonella and Newcastle and to decrease the shedding rate(AU)

Este estudio se llevó a cabo para preparar y evaluar la potencia de diferentes formulaciones de vacunas inactivadas que protegen a los pollos contra Salmonella Enteritidis y el virus de la enfermedad de Newcastle utilizando Montanide como adyuvante. Se evaluó la protección y la respuesta inmune humoral de las vacunas preparadas contra Salmonella Enteritidis y el virus de la enfermedad de Newcastle y se comparó con la vacuna importada. En este estudio se prepararon diferentes fórmulas de vacunas contra Salmonella Enteritidis y la enfermedad de Newcastle y se compararon con la importada midiendo el título de anticuerpos contra el virus de la enfermedad de Newcastle mediante la prueba de inhibición de la hemaglutinación y el título de anticuerpos contra Salmonella Enteritidis mediante ELISA. Por otra parte, se registraron los porcentajes de protección contra la enfermedad de Newcastle y Salmonella Enteritidis para determinar la fórmula más eficaz. El mayor nivel de anticuerpos inhibidores de la hemaglutinación contra el virus de la enfermedad de Newcastle, en la primera semana, se registró con la vacuna combinada preparada contra la enfermedad de Newcastle y Salmonella Enteritidis (4,2 log2), seguida de la vacuna monovalente preparada contra la enfermedad de Newcastle (3,4 log2); el menor nivel de anticuerpos (3,1 log2) se obtuvo con la vacuna importada. Se observó un aumento gradual en todos los grupos hasta alcanzar 7,1 log2, 6,8 log2 y 6,4 log2 en la cuarta semana tras la vacunación, respectivamente. El título de anticuerpos contra Salmonella Enteritidis fue de 552 para la vacuna combinada preparada contra la Salmonella Enteritidis y enfermedad de Newcastle, seguida por la vacuna monovalente preparada contra Salmonella Enteritidis (477) en la primera semana después de la vacunación; el título de anticuerpos obtenido con la vacuna importada fue de 477. Hubo un aumento gradual hasta 1456, 1406 y 1130 en la cuarta semana después de la vacunación, respectivamente. Las vacunas combinadas preparadas dieron el mayor porcentaje de protección, seguidas por los tipos monovalentes preparados y, por último, por las vacunas importadas. La vacunación con la vacuna combinada preparada contra la Salmonella Enteritidis y la enfermedad de Newcastle puede ser una forma de aumentar la resistencia de las aves a la Salmonella y Newcastle y de disminuir la tasa de excreción(AU)

Antígeno nativo y no nativo para determinar la seroprevalencia de Trypanosoma cruzi en mujeres embarazadas en el estado de Morelos, México / Native and non-native antigen to determine the seroprevalence of Trypanosoma cruzi in pregnant women from the state of Morelos, Mexico

INTRODUCCIÓN: La enfermedad de Chagas es una infección parasitaria crónica sistémica, de importancia global, causada por Trypanosoma cruzi. OBJETIVO: Determinar la prevalencia de anticuerpos contra T cruzi en mujeres embarazadas en el estado de Morelos, México. MATERIALES Y MÉTODOS: Se analizaron 1.620 sueros de mujeres embarazadas mediante dos pruebas serológicas: ELISAc (antígeno crudo nativo) y ELISAr (antígeno recombinante, no nativo). Las muestras reactivas se analizaron posteriormente mediante hemaglutinación indirecta (HAI). Se utilizaron dos enfoques de detección, en paralelo (son positivas las muestras reactivas por cualquier método) y en serie (son positivas las muestras confirmadas por HAI). Se evaluaron factores sociodemográficos y de salud asociados a la presencia de anticuerpos contra T. cruzi mediante razones de momios al 95%. RESULTADOS: Se obtuvo una seroprevalencia de 4,87% con el diagnóstico en paralelo y de 0,43% en serie. A partir de los resultados en paralelo las mujeres que fueron atendidas en los hospitales generales de Tetecala y Jojutla tuvieron, respectivamente, 2,2 y 2,0 veces mayor posibilidad de presentar anticuerpos contra T cruzi con respecto a las mujeres que fueron atendidas en el Hospital General de Cuautla. CONCLUSIÓN: La prevalencia de anticuerpos contra T cruzi en mujeres embarazadas en el estado de Morelos fluctuó entre 0,43 y 4,87%, según el antígeno y el abordaje utilizado. Es necesario continuar con la vigilancia de la seroprevalencia de anticuerpos contra T cruzi en mujeres embarazadas en el estado de Morelos, México, con las técnicas de mayor sensibilidad y especificidad disponibles.

BACKGROUND: Chagas disease is a globally important chronic systemic parasitic infection caused by Trypanosoma cruzi. AIM: To determine the prevalence of antibodies against T cruzi in pregnant women from the state of Morelos, México. METHODS: 1,620 sera from pregnant women were analyzed using two serological tests: ELISAc (native crude antigen) and ELISAr (recombinant, non-native antigen). Reactive samples were subsequently analyzed by indirect hemagglutination (IHA). Two detection approaches were used, in parallel (reactive samples by any method are positive) and serial (samples confirmed by IHA are positive). Sociodemographic and health factors associated with the presence of antibodies against T cruzi were evaluated using 95% odds ratios. RESULTS: A seroprevalence of 4.87% was obtained with parallel diagnosis and 0.43% in series. From the parallel results, the women who were attended at the general hospitals of Tetecala and Jojutla had respectively 2.2 and 2.0 times greater chance of presenting antibodies against T cruzi compared to the women who were attended at the General Hospital of Cuautla. CONCLUSION: The prevalence of antibodies against T cruzi in pregnant women from the state of Morelos fluctuated between 0.43 and 4.87%, depending on the antigen and the approach used. It is necessary to continue with the surveillance of the seroprevalence of antibodies against T cruzi in pregnant women from the state of Morelos, Mexico, using the techniques with the highest sensitivity and specificity available.

Cepario autóctono de leptospiras en la prueba de micro - aglutinación / Micro - agglutination test of Autogenous leptospirosis

Introducción: leptospirosis. Zoonosis más frecuente en Cuba, como enfermedad infecto-contagiosa. Objetivos: identificar las cepas de leptospiras aisladas localmente, para ser empleadas en la prueba de microaglutinación. Apreciar su comportamiento serológico frente a las cepas de referencia. Método: estudio experimental, de sueros de pacientes presuntivos de padecer Leptospirosis, con 60 muestras, en el Instituto Carlos J. Finlay, de La Habana. Identificación de 40 sueros reactores a la hemaglutinación pasiva. Identificación de 34 cepas, de un total de 250 aislamientos, a partir de hemocultivos, de pacientes con antisueros policlonales a serogrupos y anticuerpos monoclonales a serovar. Se conformaron cinco cepasrepresentativas de los serovares: Ballum Ballum, Canicola Canicola, Pomona Pomona, Hebdomadis Wolffi e Icterohaemorrhagiae Copenhageni, como las de mayor circulación en la región. Se realizó la prueba de microaglutinación con las cepas aisladas localmente, y las de referencia de forma paralela. Resultados: mayor reactividad con las cepas locales, y conformación de cinco cepas representantes de los serovares: Ballum Ballum, Canicola Canicola, Pomona Pomona, Hebdomadis Wolffi e Icterohaemorrhagiae Copenhageni, como las de mayor circulación en la región. Se encontró una concordancia de 86,36% en la reactividad. Conclusiones: los resultados mostraron mayor reactividad con las cepas locales que con las de referencia, elevada concordancia e incremento de los títulos de anticuerpos de los sueros reactores usando cepas locales, y disminución del promedio de las reacciones cruzadas cuando se utilizaron las cepas locales. Se demostró su utilidad en la evaluación de estudios inmunológicos.

Introduction: leptospirosis, a contagious infectious disease considered the most common zoonosis in Cuba. Objectives: to identify locally isolated leptospirosis strains for micro- agglutination test. To evaluate their serological behavior against the reference strains. Method: an experimental study of 60 presumptive Leptospirosis patients' serum samples. Forty sera reactive to passive hemagglutination. To isolate 250 blood cultures of patients. To show 34 strains identified at the Carlos J. Finlay Institute, with polyclonal antisera to serogroups and monoclonal antibodies to serovar. Five strains represented by the serovars: Ballum Ballum, Canicola Canicola, Pomona Pomona, Hebdomadis Wolffi and Icterohaemorrhagiae Copenhageni, were the most circulating strains in the region. The microagglutination test was performed in parallel form to locally isolated strains and reference strains Results: greater reactivity with the local strains. Five strains representing the serovars: Ballum Ballum, Canicola Canicola, Pomona Pomona, Hebdomadis Wolffi and Icterohaemorrhagiae copenhageni as the most circulating in the region. The reactivity showed 86.36% concordance. Conclusions: there was greater reactivity with the local strains than the reference strains. A higher concordance increased the titers of antibodies of the reactive sera, by the use of local strains. The average of cross reactions decreased when the local strains were used. The evaluation of immunological studies was demonstrated.

Anticuerpos anti-Trypanosoma cruzi en migrantes latinoamericanos en tránsito por el cruce fronterizo entre México y los Estados Unidos / Anti-Trypanosoma cruzi antibodies in Latin American migrants in transit through the México-USA border

Resumen Introducción. En los últimos años, la tripanosomiasis americana se ha convertido en un problema de salud pública emergente en países receptores de poblaciones migrantes, como México, Estados Unidos, Canadá y los países europeos. Objetivo. Analizar la prevalencia de anticuerpos anti-Trypanosoma cruzi mediante técnicas serológicas, en los migrantes latinos en su paso hacia Estados Unidos y Canadá. Materiales y métodos. Se hicieron análisis serológicos mediante ELISA y la prueba de hemaglutinación indirecta (HAI) para detectar anticuerpos anti-T. cruzi, y encuestas socioeconómicas para determinar los factores asociados a los casos seropositivos que favorecieron la transmisión en el país de origen de los migrantes. Resultados. La seroprevalencia total en la población estudiada fue del 20 % (24/120). La prevalencia más alta se encontró en migrantes de Guatemala, con 37,5 % (6/16), seguidos de los de Honduras (22,6 %; 12/53), El Salvador (16 %; 4/25) y México (8,7 %; 3/23). De los 120 migrantes encuestados, 105 (87,5 %) reconocieron el vector y 62 (59 %) afirmaron haber sido picados por este. La asociación de la infección con los materiales de construcción de las paredes de las viviendas, así como con la presencia de mascotas (perros) en los hogares, fue muy significativa (p≤0,01). La asociación con el material de construcción del patio, los servicios básicos precarios, así como la cría de animales dentro de corrales en la periferia de los hogares, también fue significativa (p≤0,05). Conclusión. Los países no endémicos que reciben migrantes de zonas endémicas deben mejorar o desarrollar políticas de salud para prevenir la transmisión del parásito por transfusión o por vía congénita.

Abstract Introduction: In recent years, American trypanosomiasis has become an emergent public health problem in countries receiving migrant populations such as México, USA, Canada or those in Europe. Objective: To analyze the prevalence of anti-Trypanosoma cruzi antibodies in Latin American migrants on their way to USA and Canada by means of serological techniques. Material and methods: ELISA and IHA were performed to detect anti-T. cruzi antibodies. Also, each participant filled out a socioeconomic questionnaire to determine the associated factors with seropositive cases, which could facilitate the transmission in the migrants' country of origin. Results: Total seroprevalence among the studied population was 20% (24/120). The highest prevalence was found in migrants from Guatemala with 37.5% (6/16), followed by Honduras (22.6%; 12/53), El Salvador (16%; 4/25), and México (8.7%, 3/23). From the total 120 surveyed migrants, 105 (87.5%) recognized the vector of Chagas' disease, and 62 (59%) assured having been bitten by it. Highly significant statistical associations were found between infection and the construction materials for walls and the presence of pets (dogs) inside houses (p≤0.01), as well as with the building materials for backyards, inadequate basic services, and animal breeding inside corrals built around dwellings (p≤0.05). Conclusion: Non-endemic countries receiving migrants from endemic areas should enhance or develop better health policies to prevent transfusion-transmitted Chagas or congenital parasite transmission.

Inmunoserología y métodos moleculares para el diagnóstico de Chagas: revisión sistemática rápida / Immunoserology and molecular techniques for diagnosis of Chagas´ disease: rapid systematic review / Imunoserologia e métodos moleculares para o diagnóstico de Chagas: revisão sistemática rápida

Con el objetivo de incrementar la precisión diagnóstica, la Organización Mundial de la Salud recomienda la realización de dos o más pruebas inmunoserológicas para el diagnóstico de la enfermedad de Chagas en etapa crónica. El objetivo de este trabajo fue realizar una revisión sistemática rápida acerca del desempeño de las técnicas inmunoserológicas y métodos moleculares en la población general. Se identificaron 178 estudios de los cuales fueron incluidos nueve. Las técnicas de ELISA mostraron la mayor sensibilidad (82-98%) y especificidad (96-100%). Los métodos rápidos mostraron valores de sensibilidad entre 88-93% y especificidad 97- 100%, mientras que los métodos moleculares (PCR) presentaron niveles muy variables de sensibilidad (22-92%) y especificidad (70-100%). Estos resultados muestran que las técnicas de ELISA cuentan con una sensibilidad y especificidad adecuadas. La PCR, al igual que los métodos rápidos, mostró una gran variabilidad en los resultados, debido principalmente a la heterogeneidad de la técnicas y profusión de métodos elaborados de manera in house.

In order to increase diagnostic accuracy, the World Health Organization recommends performing two or more immunoserological tests for the diagnosis of Chagas disease in chronic stage. The aim of this work was to make a rapid systematic review of the performance of immunoserological techniques and molecular methods in the general population. A total of 178 studies were identified, nine ofwhich were included. ELISA techniques showed the highest sensitivity (82-98%) and specificity (96-100%). Rapid methods presented values of sensitivity between 88-93% and 97-100% of specificity, while the molecular methods (PCR) showed highly variable levels of sensitivity (22-92%) and specificity (70-100%). These results indicate that ELISA techniques have adequate sensitivity and specificity. PCR, as well as rapid methods, showed great variability in the results, mainly due to the heterogeneity of the techniques and abundance of "in-house" methods.

Visando a aumentar a precisão do diagnóstico, a Organização Mundial da Saúde recomenda executar dois ou mais testes imunoserológicos para o diagnóstico na fase crônica da doença de Chagas. O objetivo deste trabalho foi fazer uma revisão sistemática rápida sobre o desempenho de técnicas imunoserológicas e métodos moleculares na população em geral. Foram identificados 178 estudos dos quais se incluíram nove. Técnicas de ELISA mostraram a maior sensibilidade (82-98%) e especificidade (96-100%). Métodos rápidos apresentaram valores de sensibilidade e especificidade de 88-93% e 97-100%, respectivamente enquanto que os métodos moleculares (PCR) tinham níveis extremamente variáveis de sensibilidade (22-92%) e especificidade (70-100%). Estes resultados mostram que as técnicas de ELISA possuem sensibilidade e especificidade adequadas. A PCR, bem como os métodos rápidos, mostrou grande variabilidade nos resultados, principalmente devido à heterogeneidade das técnicas e profusão de métodos desenvolvidos de modo in house.

Acción virucida directa sobre el virus influenza de un extracto de Punica granatum L (granada) / Direct virucidal action against influenza virus of an extract of Punica granatum L (granada)

INTRODUCCIÓN: la especie vegetal Punica granatum L. se conoce en Cuba como granada. A esta planta se le atribuye acción anticatarral en la medicina tradicional, entre otras propiedades. En estudios previos realizados al extracto hidroalcohólico liofilizado preparado con el fruto de esta planta, se informaron la presencia de numerosos componentes químicos, la mayoría flavonoides. Estos compuestos, unidos a la variedad de metabolitos secundarios detectados, le confieren a este liofilizado la posibilidad de poseer acción antiinfluenza, tal como ha sido demostrado en estudios previos del mismo. OBJETIVO: evaluar la acción virucida directa del extracto hidroalcohólico liofilizado de P. granatum frente a la cepa Influenza A/Mississippi/1/85 (H3N2), con diferentes variantes de tratamiento. MÉTODOS: las variantes de tratamiento directo se realizaron en 27 combinaciones de las variables; tiempo de contacto de: 60, 30 y 15 minutos; concentración del extracto de: 1000, 200 y 125 µg/mL y temperatura de incubación de la mezcla extracto-virus: 4, 25 y 37 0C. La presencia o no de la hemaglutinina del virus influenza en cada una de las muestras tratadas, se midió por la titulación de la Inhibición de la Hemaglutinación (IHA) y el título infectivo viral (DIE50). RESULTADOS: la concentración mínima efectiva para ejercer el extracto liofilizado, la acción virucida directa, in vitro, fue 125 µg/mL, a los 15 minutos. La acción virucida directa de éste extracto estuvo siempre presente en las diferentes temperaturas y tiempos de exposición ensayados. CONCLUSIONES: la variante de ensayo que utilizó 125 µg/mL, con independencia del tiempo y la temperatura de tratamiento, resultó suficiente efectiva para reducir la presencia de hemaglutinina del virus influenza.

INTRODUCTION: Punica granatum L. is known in Cuba as grenade. In traditional medicine, among other properties, antiflu action is attributed to this plant. In previous studies with the hydroalcoholic lyophilized extract, prepared with the fruit of this specie, several chemical compounds were reported, specially the presence of flavonoids. The variety of secondary metabolites detected for this lyophilized extract, added to a flavonoid fraction confers a high possibility of anti-influenza activity, as has been demonstrated in previous studies. OBJECTIVE: to evaluate the virucidal activity of the hydroalcoholic lyophilized extract of P. granatum against Influenza A/Mississippi/1/85 (H3N2), with different schemes of treatments. METHODS: the different schemes of treatments included 27 variants of the variables such as contact time of 60, 30 and 15 minutes; extract concentration of 1000, 200 and 125 µg/mL; an incubation temperature of the mix extract-virus of 4, 25 and 37 0C; and the corresponding replicas. The presence or not of hemaglutinin of influenza virus in each one of the treated samples, was measured by titration of Hemaglutination Inhibition (HAI) and the Embryo Infection Doses (EID50). RESULTS: the minimal effective concentration to show in the hydroalcoholic lyophilized extract the direct virucidal action in vitro was 125 µg/mL, in 15 minutes of contact. This virucidal action was always present in the different assessed temperature and time exposures. CONCLUSIONS: the treatment of 125 µg/mL, regardless of time and temperature of treatment, was effective enough to reduce the presence of hemaglutinin of the influenza virus.

Obtención de sobrenadante de cultivo aglutinador de hematíes portadores del antígeno de grupo sanguíneo B / Obtention of cell culture supernatant for erythrocyte agglutination of blood group B antigen

Introducción: la obtención de anticuerpos monoclonales en líquido ascítico ha ido decayendo paulatinamente por la aparición de alternativas de producción in Vitro, que permiten alcanzar mayores volúmenes y un control más riguroso del proceso productivo, lo que incrementa la reproducibilidad de procesos y la calidad de los productos. Objetivo: evaluar dos métodos de producción de sobrenadante de cultivo rico en una inmunoglobulina de ratón del tipo IgG2b, aglutinadora de hematíes humanos portadores del antígeno del grupo sanguíneo B, según el sistema ABO; la cual es secretada por el hibridoma C6G4. Métodos: se evaluaron dos métodos de producción del anticuerpo con el empleo de un biorreactor CELLine, útil como modelo para la obtención de anticuerpos monoclonales en cultivos de alta densidad celular. Los métodos se diferenciaron esencialmente en la densidad celular de siembra en el biorreactor y en la duración del periodo de fermentación entre la siembra y la cosecha del caldo de cultivo rico en anticuerpos. Para cada método se determinó la concentración específica de anticuerpos y la potencia de aglutinación del sobrenadante, así como la densidad y la viabilidad celular del cultivo alcanzadas en el momento de la cosecha. Resultados: se observó que ambos métodos generaron sobrenadantes de cultivo con una potencia de aglutinación similar, a pesar de que se encontraron diferencias en el resto de las variables medidas. Si bien uno de los métodos produjo una mayor concentración de anticuerpos en el sobrenadante, no se observaron diferencias en la potencia de aglutinación de los sobrenadantes obtenidos por ambas alternativas. Conclusiones: los dos métodos estudiados permitieron obtener volúmenes semejantes de sobrenadante anti-B con diferentes concentraciones de anticuerpos, pero con una potencia de aglutinación similar. La principal diferencia residió en que uno de los métodos permitió obtener el mismo volumen del producto en un tiempo sensiblemente menor...

Introduction : the obtention of monoclonal antibodies in ascite fluid has been declining gradually due to the appearance of alternative in vitro production that achieve higher volumes and a more precise monitoring of the production process, which increases the reproducibility of processes and the quality of products. Objective : to evaluate two methods to make cell culture supernatant rich in murine monoclonal IgG2b type, with agglutinating activity against human red cell of blood group antigen B (ABO system), which is secreted by murine hybridoma C6G4. Methods : two methods were evaluated for antibody production in cell culture supernatant using as model a CELLine bioreactor for the production of monoclonal antibodies in high cell density culture. Both methods essentially differed in the seeding cell density in the bioreactor and the fermentation period between seeding and harvesting of the culture broth rich in antibodies. The specific antibody concentration and potency of agglutination was determined in the obtained supernatant and also the cell density and cell viability of the culture reached at the time of harvest. Results : both methods generated culture supernatants with similar agglutination strength despite differences found in the rest of the variables measured. Even when one of the methods produced a higher antibody concentration in the supernatants, no differences in potency of the supernatants agglutination obtained by both alternatives were observed. Conclusions : both methods generated supernatant anti-B with different concentrations of antibodies but similar potency of agglutination. The main difference was that with one of the methods the same volume of the product was obtained in a considerably minor time...

Comparación de la respuesta inmunológica frente a cepas de S. pneumoniae, evaluada por hemaglutinación, en niños inmunizados con vacuna neumocócica heptavalente (dos primovacunaciones con o sin refuerzo) / Comparison of the immune response against strains of S. pneumoniae, assessed by hemagglutination, in children immunized with heptavalent conjugated pneumococcal vaccine (two primary vaccinations with or without reinforcement)

Introducción. Diferentes esquemas de inmunización con la vacuna antineumocócica heptavalente han probado su eficacia. Aunque se recomiendan pautas vacunales de dos o tres primovacunaciones con su respectivo refuerzo adicional, aún hay niños con primovacunaciones sin refuerzo. El objetivo de este trabajo fue comparar la respuesta inmunológica contra S. pneumoniae en niños bajo distintos esquemas de inmunización (dos o tres dosis) con vacuna antineumocócica heptavalente. Métodos. Se realizó un estudio observacional y transversal para comparar la respuesta inmunológica entre los grupos A (dos primovacunaciones sin refuerzo) y B (dos primovacunaciones con refuerzo). Se analizó la respuesta inmunológica escasa por medio de hemaglutinación positiva (dilución ≤ 1:2). Se calculó la razón de momios (OR) y se aplicó la prueba exacta de Fisher. Resultados. No se encontraron diferencias clínicas entre los grupos A (n = 14) y B (n = 15). Hubo mayor proporción de respuesta inmunológica escasa en el grupo A [57% vs 13%; OR 8.7 (IC 95% 1.3-53.8); p = 0.017]. Conclusiones. La respuesta inmunológica escasa contra S. pneumoniae es mayor en los esquemas de dos dosis de primovacunación sin refuerzo que cuando se utilizan dos dosis de primovacunación con refuerzo.

Background. Different patterns of heptavalent conjugated pneumococcal vaccine immunization have proven effective. Although three and four doses are recommended, there are still children who are administered schemes of two primary vaccination doses without reinforcement. The aim of this study was to compare the immune response against S. pneumoniae in children (group A and group B) submitted to different immunization schemes (two primary vaccination doses with or without reinforcement). Methods. We conducted an observational, cross-sectional study comparing the immune response between group A and group B, analyzing the weak immune response with positive hemagglutination dilution ≤1:2. Odds ratio (OR) and Fisher's exact test were used. Results. There were no clinical differences between group A (n = 14) and group B (n = 15). There was a higher proportion of weak immune response in group A (57% vs. 13%, OR 8.7 (95% CI 1.3-53.8, p = 0.017). Conclusions. Weak immune response against S. pneumoniae is higher in schemes primed with two doses of heptavalent conjugated pneumococcal vaccine without reinforcement than using the two-dose schedule + a booster of heptavalent conjugated pneumococcal vaccine.

Neosporosis y toxoplasmosis en la liebre europea (Lepus europaeus) en la provincia de La Pampa (Argentina) / Infectious diseases and reproductive status in european hare (Lepus europaeus) in La Pampa province (Argentina)

El objetivo de este trabajo fue determinar la prevalencia a Neospora caninum (Nc) y Toxoplasma gondii (Tg) y conocer el periodo reproductivo de la liebre europea (Lepus europaeus) en la provincia de La Pampa (Argentina). Para ello se muestrearon 106 liebres procedentes de acopiadores de la provincia de La Pampa. Los sueros fueron analizados por un ensayo inmunoenzimático de competición para determinar anticuerpos a Nc y para Tg se realizó una prueba de hemaglutinación indirecta. Se encontraron 66 hembras, de las cuales 13 estaban preñadas, y 40 machos (p=0,01). Sobre un total de 44 sueros analizados para Nc, 5 (11,4%) dieron positivo. De los 106 sueros estudiados para Tg ninguno fue positivo.

The objective of this study was to determine the prevalence of these diseases and to know the reproductive season of the European hare (Lepus europaeus) in the Province of La Pampa (Argentina). To that aim, 106 hares coming from different places from La Pampa province were sampled. .Nc antibody diagnosis was performed by means of a competitive enzimoimmunoassay (ELISA-c), and an hemo-agglutination indirect assay (HAI) for Tg were carried out to know the disease status. From the total of hares sampled, 40 were male, 66 female (p=0.01) and 13 (19.7%) of them were detected as pregnant. Nc sero-prevalence was 11.4% over a total of 44. From 106 sera analyzed by HAI no one was positive for Tg.

Normalización de un ELISA de captura para la detección de anticuerpos de tipo IgM al virus de la parotiditis / Standardization of a capture ELISA for detection of IgM antibodies to parotiditis virus

Introducción: la parotiditis es una enfermedad contagiosa aguda, que afecta fundamentalmente a los niños en edad escolar entre 5 y 14 años y requiere de técnicas rápidas para su diagnóstico. Objetivos: se normalizó un ELISA de captura para la detección de anticuerpos de tipo IgM al virus de la parotiditis y se comparó con la inhibición de la hemaglutinación. Métodos: se estudiaron 177 monosueros y 285 pares de suero que procedían de la vigilancia seroepidemiológica al virus de la parotiditis, enviados por las diferentes provincias del país en el período comprendido entre enero 2004-diciembre 2006. Fueron analizados con la técnica de inhibición de la hemaglutinación y se emplearon en la normalización del sistema. Se determinó la precisión del ensayo y se realizó el estudio de la reactividad cruzada a otros agentes virales. Resultados: al evaluar el sistema, se obtuvieron valores de sensibilidad de 98,9 por ciento, especificidad 98,5 por ciento y concordancia 98,7 por ciento; se encontró una buena relación en los valores del coeficiente de variación intraensayo e interensayo en todos los casos estudiados. No se observó reactividad cruzada con otros agentes infecciosos. Conclusiones: este sistema demostró ser de gran utilidad para el diagnóstico temprano de la parotiditis, resultó ser más sensible y rápido que la inhibición de la hemaglutinación.

Background: parotiditis is an acute contagious disease that mainly affects children aged 5-14 years and requires rapid diagnostic techniques. Objectives: a capture ELISA was standardized to detect IgM antibodies to parotiditis virus and this method was compared with hemagglutination inhibition. Methods: one hundred and seventy seven monosera and 285 serum pairs sent by the different provinces from January 2004 to December 2006, as part of the seroepidemiological surveillance of the parotiditis virus, were studied. They were analyzed by the hemagglutination inhibition technique and used for the system standardization. Accuracy of the test was determined and the cross reactivity to other viral agents was also studied. RESULTS: the system evaluation yielded 98.9 percent sensitivity, 98.5 percent specificity and 98.7 percent concordance; good relation was found in the variation coefficient values intra-assays and inter-assay for all the studied cases. No cross reactivity was observed with other infectious agents. Conclusions: this system proved to be useful for the early diagnosis of parotiditis, more sensitive and rapid than the hemagglutination inhibition.

Ascaris lumbricoides: epitopes del Sistema P por método de cinética de la hemaglutinación / Ascaris lumbricoides: P system epithopes by haemogglutination kinetics method

Experiencias previas demostraron epitopes P1 en Ascaris lumbricoides por inhibición de la aglutinación. La cinética de la hemaglutinación aplica la extinción óptica relativa producida por un haz de luz trasmitido a través de una suspensión de pequeñas partículas, y permite obtener una estimación paramétrica de la tasa de hemaglutinación. El objetivo de este trabajo fue utilizar este método para demostrar la presencia de epitopes del Sistema P en extractos de A. lumbricoides. La técnica de inhibición de la aglutinación permitió seleccionar 10 extractos: 3 con y 7 sin epitopes P1. Se registró la cinética de la reacción Control: anti- P1- eritrocitos - P1 y la cinética de la misma reacción, previo contacto del anticuerpo con el extracto. Se calcularon y se compararon los valores de ³ EOR % (variación en el porcentaje de extinción óptica relativa) para ambas reacciones. Los resultados evidenciaron la presencia de epitopes P1, que no habían sido detectados por inhibición de la aglutinación, en 3 extractos. Para los extractos restantes, hubo coincidencia entre los resultados obtenidos por los dos métodos. La cinética de la hemaglutinación es sencilla, rápida y fácilmente adaptable para las experiencias en que se necesite evaluar una reacción antígeno-anticuerpo a través de la hemaglutinación.

Summary Previous experiences have demonstrated P1 epithopes in Ascaris lumbricoides by inhibition agglutination. Haemogglutination kinetics applies the relative optical extinction produced on a light beam transmitted through a suspension of small particles, giving a parametric estimate of the haemagglutination rate.The aim was to use this method for the demonstration of P System epithopes presence in A. lumbricoides extracts. inhibition agglutination test enabled the selection of 10 extracts: 3 with and 7 without P1 epithopes. Kinetics of anti- P1 - P1 erythrocyte control reaction and kinectics of the same reaction with a previous contact between antibody and extract were registered. ³ EOR % values (relative optical extinction variation) for both reactions were calculated and compared between themselves. The results proved P1 epithopes presence in 3 extracts, which had not been detected by inhibition agglutination. The results coincided for the remaining extracts by both methods. Haemogglutination kinetics is simple and fast and it is easily adapted for experiences in which the investigator needs to assess the antibody-antigen reaction by haemogglutination.

Influenza vaccination of patients with systemic lupus erythematosus / Vacunación contra virus de la influenza en pacientes con lupus eritematoso sistémico

Objective. To determine the safety, the immunogenicity, and the increase of pre-existing autoantibodies in patients with systemic lupus erythematosus (SLE) following influenza vaccination. Patients and Methods. Eighteen women with SLE received an inactivated influenza vaccine. Antibody titers were measured before and 4 weeks after vaccination using a standardized hemagglutination inhibition (HAI) assay. Disease activity and antinuclear autoantibodies were determined at study entry, at 4 weeks, and at 8 weeks after vaccination. Results. After vaccination, the percentage of patients with anti-hemagglutinin antibody levels increased significantly but was lower than in healthy women. Mean antibody titer of patients increased significantly but also was lower than that of controls. Both the mean of disease activity and anti-ds DNA antibody decreased significantly. Adverse effects to the vaccine were mild. Conclusions. a) Influenza vaccination appears to be safe; b). Antibody response to influenza vaccination increases significantly for all 3 influenza antigens; c) Specific antibody response is not significantly affected by treatment, age, IgG levels, or disease activity.

Objetivo. Determinar la seguridad, la respuesta de anticuerpo y el aumento de autoanticuerpos preexistentes en pacientes con lupus después de la vacunación contra influenza. Métodos. Dieciocho mujeres con LES recibieron vacuna contra influenza inactivada. Se determinaron los títulos de anticuerpos antiinfluenza (prueba de inhibición de la hemaglutinación) antes y a las cuatro semanas después de la vacunación. Antes, a las cuatro y ocho semanas se midieron la actividad de la enfermedad y autoanticuerpos antinucleares. Resultados. Después de la vacunación, el porcentaje de pacientes con LES con títulos de anticuerpos antihemaglutinina aumentaron significativamente pero fueron bajos comparado con las mujeres sanas. La media de títulos de anticuerpos antiinfluenza aumentó significativamente a las cuatro semanas, pero fue más bajo que en los controles. La media de la actividad de la enfermedad y de anticuerpos antiDNA disminuyó significativamente. Los efectos colaterales fueron leves. Conclusiones. a) La vacuna contra influenza es segura; b) La respuesta de anticuerpos después de la vacunación aumenta significativamente; c) No hay correlación significativa entre la respuesta de anticuerpo con la edad, tratamiento, niveles de IgG o con la actividad de la enfermedad.

Evaluación de los reactivos hemoclasificadores monoclonales cubanos HEMO CIM ANTI-A y HEMO CIM ANTI-B en pacientes VIH/SIDA / Evaluation of the Cuban anti-A Hemo CIM and anti-B Hemo CIM monoclonal hemoclassifiers in HIV/AIDS patients

Se describe un estudio realizado con los hemoclasificadores monoclonales cubanos Hemo CIM anti-A y anti-B producidos por el Centro de Inmunología Molecular (CIM) y comercializados por CIMAB S.A, para ser evaluados en pacientes VIH/SIDA. Se analizaron un total de 130 pacientes en el Servicio de Transfusiones del Instituto "Pedro Kourí". Se utilizaron en paralelo los antisueros policlonales de producción nacional (Laboratorios Betera) y los reactivos monoclonales comerciales producidos y donados por International Blood Group Reference Laboratory; Bristol, UK. Se demostró que los reactivos Hemo CIM anti-A y Hemo CIM anti-B se comportaron de forma similar a sus homólogos comerciales y policlonales. Al comparar la efectividad de la aglutinación para los 3 reactivos pudimos comprobar que con el reactivo monoclonal, Hemo CIM anti-A y anti-B se obtuvieron los mejores resultados expresados en cruces.

A study conducted with the Cuban anti-A and anti-B Hemo CIM monoclonal hemoclassifiers produced by the Center of Molecular Immunology (CMI) and commercialized by CIMAB S.A. to be evaluated in HIV/AIDS patients is described. 130 patients were analyzed at the Service of Transfusions of "Pedro Kouri" Institute. The polyclonal antisera of national production (Betera Laboratories) and the commercial monoclonal reagents produced and donated by the International Blood Group Reference Laboratory; Bristol, UK, were used at the same time. It was proved that the anti-A Hemo CIM and anti-B Hemo CIM reagents behaved similarly to their commercial and polyclonal homologues. On comparing the effectiveness of the agglutination for the 3 reagents, we were able to verify that the best results expressed in crosses were obtained with the anti-A and anti-B Hemo CIM monoclonal reagents.

Inmunovaloración de anticuerpos IgM en muestras sospechosas de sarampión clínicamente

Se realiza el estudio de 60 sueros pareados sospechosos de Sarampión clínicamente llegados al Laboratorio Diagnóstico del Instituto de Medicina Tropical "Pedro Kourí" entre enero y mayo de 1996, procedentes de la vigilancia seroepidemiológica de la vacuna triple viral (sarampion, rubéola y parotiditis), a los cuales se les realizó la detección de anticuerpos hemaglutinantes a sarampión y rubéola, así como de IgM, con el estuche diagnóstico Clark Laboratories INC Measles IgM ELISA. Los casos positivos se confirmaron por las técnicas de inmunofluorescencia indirecta-IgM y neutralización. Se obtuvieron por inhibición de la hemaglutinación, 3 casos positivos a sarampión y rubéola, los cuales negativos a IgM de sarampión y a los que se les determinaron anticuerpos a Epstein Barr, Citomegalovirus y al virus herpes simple mediante inmunifluorescencia indirecta (IFI) la capacidad de estos virus de inducir respuesta policlonal. Por medio del ELISA IgM Clark se detectaron 6 casos positivos los cuales resultaron negativos por IFI.

60 matched sera clinically syspicious of measles that were received at the Diagnostic Laboratory of the "Pedro Kourí" Tropical Medicine Institute between January and May, 1996, coming from the seroepidemiological surveillance of the MPR vaccine were studied. The detection of measles and rubella hemagglutinant antibodies, as well as of IgM, was carried out with the Clark Laboratories INC. Measles IgM ELISA diagnostic kit. The positive cases were confirmed by the IgM-indirect immunofluorescence and neutralization. 3 positive cases to measles and rubella, which were negative to measles IgM, were obtained by hemagglutination inhibition. Antibodies against Epstein Barr, cytomegalovirus and herpes simplex virus were also determined by indirect immunofluorescence (IIF) due to the capacity of these viruses to induces polyclonal responses. 6 positive cases, which were negative by IIF, were detected by means of the above mentioned diagnostic kit.

Utilización de hematíes de primates sudamericanos en la prueba inhibición de hemaglutinación para el diagnóstico del Virus del Sarampión

La utilidad del empleo de hematíes de especies sudamericanas de primates no humanos durante pruebas de hemaglutinación e inhibición de la hemaglutinación con virus sarampión ha sido evaluada. El estudio se Ilevó a cabo en 18 meses, habiéndose iniciado a fines de 1995 y terminado a comienzos de 1997. Se obtuvo muestras de sangre de primates en solución citratada, en la sede del Instituto de Investigaciones Tropicales y de Altura en Iquitos (IVITA) y en el Parque de las Leyendas en Lima; el procesamiento se realizó en el Laboratorio de Virología del Instituto Nacional de Salud. Se analizaron muestras de 22 primates de 8 especies de la Amazonía peruana, probándolos en paralelo con hematíes patrón de monos Rhesus y Cercophitecus, por hemaglutinación con antígeno purificado de virus sarampión. Las especies Saimiri boliviensis peruvianus y Sanguinus mystax exhibieron afinidad hemaglutinante con el virus, siendo ésta parcial o incompleta y no persistente, con elusión espontánea a los 30 minutos. Se hizo ensayos de inhibición de hemaglutinación con sueros pareados de personas que estuvieron con infección sarampionosa 10 a 15 días antes de obtener la segunda muestra. No se recomienda su empleo rutinario durante encuestas serológicas por IHA, dados los sesgos en lecturas e interpretación que podrián presentarse.

The usefullness of red blood cells (rbc) of south-american non-human primates in hamegglutination and the hemagglunation inhibition with measles virus was evaluated in an 18 months study finished at the earlier's in 1997 Primate blood samples were obtained in a citrated solution at the Instituto de Investigaciones Tropicales y de Altura (IVITA) in Iquitos, and at the Parque Las Leyendas Zoo in Lima. Samples obtained from 22 monkeys of 8 different species from the Peruvian Amazon Region were tested in parallel with standard rbc of Rhesus an Cercopithecus monkeys through hemagglutination with measles virus purified antigen. Rbc of the species Saimiri boliviensis and Sanguinus mystax showed hemagglutinant affinity with the virus, being this partial or incomplete and nonpersistent, with spontaneous elution after 30 minutes. Hemagglutination inhibition assays were performed with paired sera samples obtainet from patients suffering measles infection with a 10 to 15 days interval. The utilization of Peruvian non-human primates rbc in IHA used for serological surveys is not recommended due to the possible blases in reading and interpretation of results.