Immunohistochemistry in oral and maxillofacial pathology: The role and rational use of antibodies in the diagnosis of surgical lesions / Inmunohistoquímica en patología oral y maxilofacial: El rol y uso racional de anticuerpos en el diagnóstico de lesiones quirúrgicas

Background:Immunohistochemistry have had a huge impact on oral and maxillofacial pathology diagnosis. As a method it determines distribution and amount of certain cellular molecules via specific antigen-antibody reaction. Whereas in most cases a definitive diagnosis is achieved based on detailed hematoxylin and eosin cytomorphological analysis, along with clinical and radiological features, some challenging and equivocal neoplasms need to be further assessed with immunohistochemistry. Objective:This article reviews and updates immunohistochemistry technique fundamentals, its role and relevance in the diagnosis of common oral and maxillofacial lesions encountered in daily practice. Materials and methods: A literature review on the topic was carried out by searching pertinent and available papers on PubMed, ClinicalKey and Scielo platforms with no date restriction, up to 2022. Conclusion: Immunohistochemistry is an important tool that has been integrated into conventional histopathology and provides diagnostic assistance in the interpretation of common but equivocal neoplasms

Antecedentes: El uso de la inmunohistoquímica ha tenido un gran impacto en el diagnóstico de patología oral y maxilofacial. Como técnica, determina la distribución y la cantidad de ciertas moléculas celulares a través de una reacción antígeno-anticuerpo específica. Aunque en la mayoría de los casos se logra obtener un diagnóstico definitivo basado en el análisis cito morfológico con hematoxilina y eosina, junto con las características clínicas y radiológicas, algunas neoplasias microscópicamente equívocas deben evaluarsemás a fondo con inmunohistoquímica. Objetivo: Este artículo revisa los fundamentos básicos actuales de la técnica y su relevancia en el diagnóstico de algunas lesiones orales y maxilofaciales frecuentemente tratadas en la práctica clínica diaria. Materiales y Métodos: Se realizó una búsqueda y revisión de artículos científicos relacionados con el uso immunohistoquímica en patología oral y maxilofacial en PubMed, ClinicalKey y Scielo. Conclusión: La immunohistoquimica es una herramienta importante que ha sido integrada a la histopatología convencional y brinda asistencia diagnostica en la interpretación de neoplasias comunes pero equívocas

Relato de caso: linfoma de células t/nk extranodal tipo nasal / Case Report: Extranodal Nk/T-Cell Lymphoma, N a s a l Ty p e / Reporte de caso: linfoma extranodal de células t/nk de tipo nasal

Introdução: O linfoma não-Hodgkin é dividido em linfomas de células B e linfomas de células T, e o linfoma extranodal de células T / NK do tipo nasal está dentro do último grupo.Relato de caso: Paciente do sexo masculino de 30 anos, relata que há 6 meses, de forma progressiva e de início insidioso, apresenta tumor cervical à direita de crescimento progressivo, pelo qual foi encaminhado ao ambulatório de cabeça e pescoço onde apresentou seus principais sinais e sintomas adenopatia cervical direita, sintoma B e tumoração ao nível da nasofaringe, envolvendo o teto, parede posterior e face lateral; se movimenta com auxílio, com extenso conglomerado linfonodal supraclavicular direito, eritematoso, com calor local, além de áreas de ulceração e secreção serosa.Conclusão: O diagnóstico e tratamento precoces desta doença são as únicas ferramentas para melhorar o mau prognóstico e o grave impacto na qualidade de vida dos pacientes que a padecem

Introduction: Non-Hodgkin's lymphomas are divided into B-cell lymphomas and T-cell lymphomas, and extranodal NK/T-cell lymphoma, nasal type, is in the latter group.Case report: A 30-year-old male patient, for six months, progressively and with an insidious onset, has had a right-sided cervical tumor with progressive growth. He came to a head and neck outpatient clinic where the main signs and symptoms detected were right cervical lymphadenopathy, B-symptoms, and a tumor in the nasopharynx affecting the roof, posterior wall, and lateral wall. The patient moves with assistance and has an enlarged, erythematous warm right supraclavicular lymph node conglomerate. In addition, he has some ulcerated areas with serous drainage.Conclusion: Early diagnosis and treatment of this disease are the only tools to improve these patients' poor prognosis and severely deteriorated quality of life.

Introducción:El linfoma no Hodgkin se divide en linfomas de células B y linfomas de células T; y en este último grupo se encuentra el linfoma extraganglionar de células T / NK de tipo nasal.Caso clínico: Un paciente masculino de 30 años refiere que durante 6 meses de forma progresiva, y con un início insidioso, presenta una tumoración cervical en el lado derecho de crecimiento progresivo, por lo que acude a la consulta externa de cabeza y cuello, donde los signos y síntomas principales fueron adenopatía cervical derecha, síntoma B, y una tumoración a nivel de nasofaringe, que afecta el techo, la pared posterior y la cara lateral. Se moviliza con ayuda, con un extenso conglomerado ganglionar supraclavicular derecho, eritematoso, con calor local. Además, también muestra algunas áreas de ulceración y secreción serosa. Conclusión: El diagnóstico y tratamiento precoz de esta enfermedad son las únicas herramientas para mejorar el mal pronóstico y el deterioro severo en la calidad de vida de los pacientes que la padecen

Scar-free wound healing following full-thickness cutaneous wounding in the tail and body of Scincella tsinlingensis / Cicatrización de heridas sin cicatrices luego de heridas cutáneas de espesor total en la cola y el cuerpo de Scincella tsinlingensis

SUMMARY: The cutaneous wounds of trunk and tail healing scar-free or with scar were different in lizard species. Full- thickness cutaneous injuries of tail and body of Scincella tsinlingensis were examined by histomorphological and immunohistochemistrical methods. The results showed that all injuries healed without scarring. The process of the wound healing of S. tsinlingensis involved hemostasis, re-epithelialization, proliferation and remodelling, which also could be further subdivided into six stages. Stage I, 0-2 day post wound (dpw), the blood oozed gradually, no obvious wound contraction, minimal blood loss. Stage II, 2-10 dpw, the wound bed covered by the fibrin clot of blood, tissue fluid and tissue debris. Stage III, 7d-15 dpw, the wrinkled wound epitheliums was gradually stratified, and its surface was keratinized and exfoliated. Stage IV, 10-28 dpw, pigment cells were distributed at the boundary between epidermis and dermis, with few blood vessels and no granulation tissue formation. Stage V, 20-70 dpw, opaque scales covered the wound epithelium with randomly scattered melanophores in the base of the epidermis. Stage VI, 45-135 dpw, the epidermis and dermis restored to the thickness of the original skin. Regenerated scales were similar to scales of the uninjured dermis. The positive immunostaining of matrix metalloproteinases-9, cytokeratin 6, alpha smooth muscle actin, caspase 3 and transforming growth factor-β3 showed the specificity of healing period and different stages, which participated in skin wounds healing of S. tsinlingensis.

RESUMEN: En las diferentes especies de lagartos las heridas cutáneas del tronco y la cola sin cicatrices, o con algún tipo de cicatriz son diversas. En este estudio se examinaron las heridas cutáneas de espesor total de la cola y el cuerpo de Scincella tsinlingensis mediante métodos histomorfológicos e inmunohistoquímicos. Los resultados indicaron que todas las lesiones sanaron sin cicatrices visibles. El proceso de cicatrización de heridas de S. tsinlingensis implicó hemostasia, reepitelización, proliferación y remodelación, que también podrían subdividirse en seis etapas. Etapa I, 0-2 días después de la herida (dph), la sangre filtraba gradualmente, sin contracción evidente de la herida, con pérdida mínima de sangre. Etapa II, 2-10 dph, el lecho de la herida estaba cubierto por el coágulo de sangre, líquido tisular y restos tisulares de fibrina. Etapa III, 7-15 dph, los epitelios de la herida se estratificaron gradualmente y su superficie se queratiniza y exfolia. Etapa IV, 10-28 dph, las células pigmentarias se distribuyeron en el límite entre la epidermis y la dermis, con pocos vasos sanguíneos y sin formación de tejido de granulación. Etapa V, 20-70 dph, escamas opacas cubrieron el epitelio de la herida con melanóforos dispersos al azar en la base de la epidermis. Etapa VI, 45-135 dph, la epidermis y la dermis restauradas al grosor de la piel original. Las escamas regeneradas eran similares a las escamas de la dermis sin herida. La inmunotinción positiva de metaloproteinasas- 9 de matriz, citoqueratina 6, actina de músculo liso alfa, caspasa 3 y factor de crecimiento transformante-β3 mostró la especificidad del período de curación y las diferentes etapas, que participaron en la curación de heridas cutáneas de S. tsinlingensis.

Immunolocalization of morphogen sonic Hedgehog in salmon fry (Salmo salar) / Inmunolocalización del morfógeno sonic Hedhehog en alevines de salmón (Salmo salar)

With the purpose of carrying out a diagnosis of the different pathologies that affect the salmon fry stage (Salmo salar) and analyze the regeneration phases of the organizational centers and subjacent tissue in case of an amputation, we realized a study that allowed identifying the temporary and spatial location of the Sonic Hedgehog (Shh) morphogen in hatched fry stage. Fifteen salmon fry (Salmo salar) were used. They were anesthetized with 5 % benzocaine (BZ-20®, Veterquímica), fixed in 10 % buffered formalin, and embedded in paraffin, Shh polyclonal antibody (Santa Cruz H-160, rabbit) was used diluted at 1/100. They were subsequently rinsed in PBS-1 % Triton and incubated with anti-rabbit conjugated polymer antibody and HRP for 10-15 min. The development was done with DAB (Vector) for 1-5 min. The negative control was incubated without primary antibody. As an internal positive control the notochord was considered. Serial sagittal sections were analyzed consigning tissues and organs marked positively and were described morphologically. The objective of recognizing the spatial and temporal location of Shh was achieved. The notochord, spinal cord neurons and ganglia, the basal layer of the skin and also the lepidotriquias escleroblastos were positively identified for Shh. Finally positivity was also observed in the intestine and renal tubules. The heterogeneity observed in the location of the Shh morphogen suggests its potential use as a marker of regulatory centers in Salmo salar, and a potential advantage in the diagnosis of malformations of salmon fry stage, in addition to a better understanding of tissue regeneration.

Con el fin de llevar a cabo un diagnóstico de las diferentes patologías que afectan a la etapa de alevín de salmón (Salmo salar) y analizar las fases de regeneración de los centros de organización y el tejido subyacente en caso de una amputación, se realizó un estudio que permitió identificar la ubicación temporal y espacial del morfógeno Sonic hedgehog (Shh) en la etapa de alevines eclosionados. Se utilizaron quince alevines de salmón (Salmo salar). Fueron anestesiados con benzocaína al 5% (BZ-20®, Veterquímica), se fijaron en formalina tamponada al 10%, e incluidos en paraplast. Se utilizó Shh anticuerpo policlonal (Santa Cruz H-160, conejo) dilución 1/100. Se enjuagaron posteriormente en PBS-1% Triton y se incubaron con anticuerpo conjugado con polímero anti-conejo y HRP durante 10-15 minutos. Se utilizó como sustrato DAB (Vector) durante 1-5 minutos. El control negativo se incubó sin anticuerpo primario. Como un control positivo interno se consideró la notocorda. Se analizaron secciones sagitales en serie consignando los tejidos y órganos marcados positivamente y se describieron morfológicamente. Se logró el objetivo de reconocer la localización espacial y temporal de Shh. La notocorda, las neuronas de la médula espinal y los ganglios, la capa basal de la piel y también los escleroblastos de las lepidotriquias fueron identificados positivamente para Shh. También se observó positivo el intestino y los túbulos renales. La heterogeneidad observada en la ubicación del morfógeno Shh sugiere su uso potencial como un marcador de los centros de regulación en Salmo salar, y una ventaja potencial en el diagnóstico de las malformaciones de la etapa de alevines de salmón, además de una mejor comprensión de la regeneración de tejidos.

Contribuição da imuno-histoquímica no diagnóstico do câncer de próstata / Immunohistochemistry contribution to the diagnosis of prostate cancer

INTRODUCTION: Efforts for the identification of prostate cancer in the initial clinical and pathological stages led to an increase in the number of biopsies, sometimes making the histological diagnosis of adenocarcinoma difficult. This is due to the presence of minimal carcinoma or atypical glands suspicious for carcinoma, also known as atypical small acinar proliferation (ASAP). In these cases, the use of immunohistochemistry (IHC) has become a common practice in laboratories of pathology. OBJECTIVES: The aims of this study were to assess the incidence of diagnoses of ASAP and minimal adenocarcinoma in two laboratories of pathology and to evaluate the contribution of IHC and repeat biopsy to the diagnosis of prostate cancer. METHODS: We reviewed 641 sets of modified sextant needle biopsies of the prostate performed in two laboratories of pathology between January 2005 and December 2010. IHC using 34âE12 and p63 antibodies was performed on 35 of 73 (11.38%) cases diagnosed as ASAP and on 7 (1.1%) cases diagnosed as minimal adenocarcinoma. RESULTS: The incidence of ASAP diagnosis was 11.38% (n = 73). IHC was performed in 35 of the 73 ASAP cases and provided conclusive results in 31 cases (88.57%), resulting in a final diagnosis of adenocarcinoma in 19 patients (54.28%), benign lesions in 12 patients (34 28%); only 4 (11.42%) were inconclusive. CONCLUSION: The results suggest that IHC should be routinely used in evaluation of borderline biopsies and in ASAP cases. IHC strongly contributes to the diagnosis of prostate cancer.

INTRODUÇÃO: Os esforços de detecção precoce do câncer de próstata, identificados em fases clínicas e patológicas iniciais, levou ao aumento no número de biópsias e, por vezes, indefinição do diagnóstico histológico de adenocarcinoma devido à presença de carcinomas mínimos ou alterações pseudoneoplásicas, como proliferação atípica de pequenos ácinos (PAPA). Nesses casos, o uso da imuno-histoquímica (IMH) para evidenciar a presença de células basais tornou-se uma prática comum em laboratórios de patologia. OBJETIVOS: O presente estudo visa a avaliar a incidência de PAPA e de adenocarcinoma mínimo em dois laboratórios de patologia do interior, bem como avaliar a contribuição da IMH e da rebiópsia no diagnóstico do câncer de próstata. MÉTODOS: Foram revistas 641 biópsias de próstata por agulha realizadas entre janeiro de 2005 e dezembro de 2010. Dos 73 casos diagnosticados como PAPA (11,38%), 35 foram submetidos ao exame imuno-histoquímico, usando anticorpos anti-34ßE12 e p63, assim como sete casos diagnosticados como adenocarcinoma mínimo (1,1%). Resultados: Os resultados mostraram que a técnica foi conclusiva em 31 casos (88,57%), com diagnóstico final de adenocarcinoma em 19 pacientes (54,28%); 12 (34,28%) com lesões benignas; e apenas quatro (11,42%) inconclusivos (PAPA). CONCLUSÃO: Os resultados sugerem que IMH deve ser rotineiramente usada em biópsias limítrofes e casos de PAPA, pois contribui significativamente para o diagnóstico de câncer de próstata.

Detección por inmunohistoquímica de Leishmania infantum en hámster infectado experimentalmente / Detection of Leishmania infantum in an experimentally-infected hamster using immunohistochemistry

Introducción: la leishmaniasis visceral se considera la forma más severa de las leishmaniasis y puede llegar a ser fatal en ausencia de tratamiento oportuno. En América Latina la infección es causada por Leishmania infantum (syn. Leishmania chagasi). El diagnóstico inequívoco y la selección de un adecuado modelo experimental son una necesidad para emprender estudios con este agente biológico. Objetivo: determinar la utilidad de la técnica de inmunohistoquímica en la identificación de Leishmania. Métodos: los animales se inocularon con promastigotes de Leishmania infantum. Se monitoreó el peso corporal de cada animal y se determinó el peso relativo de bazos e hígados. Para la identificación de amastigotes se prepararon improntas coloreadas con Giemsa y se desarrolló un protocolo de inmunohistoquímica en tejido incluido en parafina. Resultados: se reprodujo la infección en el modelo experimental. La técnica de inmunohistoquímica fue positiva en los cortes de los animales infectados y no reactiva para el grupo control. Al comparar con la tinción mediante Giemsa, esta metodología facilitó la identificación, particularmente en órganos con escasos parásitos. Conclusiones: la inmunohistoquímica es una herramienta específica para la detección de Leishmania, facilita la observación y evita confusiones en la identificación del parásito, lo que mejora la calidad del diagnóstico.

Introduction: visceral leishmaniasis is considered the most severe form of this disease and can be fatal if not properly treated. In Latin America, the infection is caused by Leishmania infantum (syn. Leishmania chagasi). The unequivocal diagnosis and the selection of a suitable experimental model are required to undertake studies on this biologic agent. Objective: to determine the advantages of immunohistochemistry in identifying Leishmania. Methods: hamsters were inoculated with Leishmania infantum promastigotes. The body weights of every animal were monitored, and the relative weights of their spleens and livers were estimated. For identification of amastigotes, Giemsa-stained imprints and an immunohistochemistry protocol in paraffin-embedded tissues were developed. Results: the infection was reproduced in the experimental model. The immunohistochemistry was positive in infected animal sections and non-reactive for the control group. When compared with the Giemsa staining, this methodology facilitated the identification, particularly in organs infected with few parasites. Conclusions: immunohistochemistry is a specific tool for detection of Leishmania since it facilitates observation and eliminates any confusion in the identification of the parasite, thus improving the quality of diagnosis.

Inmunohistochemical evaluation of estrogen receptors alpha and beta in normal inferior turbinate mucosa / Evaluación inmunohistoquímica de los receptores de estrógenos alfa y beta en la mucosa normal de concha nasal inferior

It has been postulated that the nasal mucosa, like other human tissues, is affected by a complex interactive network of neuropeptides, cytokines, allergic and inflammatory mediators and hormones such as estrogen, in which associations between symptoms (e.g. nasal stuffiness and coryza) and hormonal variations deriving from pregnancy, use of hormonal contraceptives and menstrual cycle phases are observed. The objective is evaluating the presence of specific estrogen receptors (types alpha and beta) in inferior turbinate mucosa in healthy subjects without nasal symptoms. Samples of nasal inferior turbinate were removed from patients undergoing aesthetic nasal surgery, and analyzed using hematoxylin-eosin staining, followed by immunohistochemical preparations on paraffin-embedded sections from the material sample, to detect estrogen receptors alpha and beta. Positive immunohistochemical reactions for both beta and alpha receptors were found in various regions of the inferior nasal turbinate. In conclusion both alpha and beta receptors were found, though the expression of beta was greater and more intense in the anterior portion of the inferior turbinate. No difference was found between male and female patients regarding the intensity of expression of receptors in the inferior turbinate.

Se ha postulado que la mucosa nasal, al igual que otros tejidos humanos, se ve afectada por una compleja red interactiva de neuropéptidos, citoquinas, mediadores alérgicos e inflamatorios, y hormonas como el estrógeno, en el que las asociaciones entre los síntomas (por ejemplo, congestión nasal y catarro) y hormonales las variaciones derivadas del embarazo, se observó el uso de anticonceptivos hormonales y las fases del ciclo menstrual. El objetivo es evaluar la presencia de receptores de estrógenos específicos (tipos de alfa y beta) en la mucosa de la concha nasal inferior en sujetos sanos sin síntomas nasales. Las muestras de la concha nasal inferior fueron retirados de los pacientes sometidos a cirugía nasal estética y analizados mediante hematoxilina-eosina, seguidos de cortes de preparados de inmunohistoquímica incluídos en parafina de la muestra de material, para detectar los receptores de estrógenos alfa y beta. Las reacciones de inmunohistoquímica fueron positiva para ambos receptores alfa y beta, éstas se encuentran en diversas regiones del cornete nasal inferior. En conclusión, tanto los receptores alfa y beta se encuentran, aunque la expresión de la beta fue mayor y más intensa en la porción anterior de la concha nasal inferior. No se encontraron diferencias entre pacientes hombres y mujeres en relación con la intensidad de la expresión de los receptores en el concha nasal inferior.

Retinoides (RARβ y CRBP1) en carcinoma de pulmón a células no pequeñas / Retinoid expression (RARβ and CRBP1) in non-small-cell lung carcinoma

Aunque los pacientes con cáncer de pulmón a células no pequeñas en estadios tempranos (NSCLC) tienen buen pronóstico, el 20-30% recae, siendo relevante la identificación de biomarcadores pronósticos. Los retinoides regulan crecimiento y diferenciación, y pueden antagonizar la progresión tumoral. Su efecto depende del transporte citosólico mediado por moléculas como CRBP1, y de la unión a receptores específicos (RARβ). Alteraciones en esta vía se asociaron con cáncer. Nuestro objetivo fue estudiar la expresión, mediante inmunohistoquímica, de RARβ y CRBP1 en el tejido tumoral de 49 pacientes NSCLC Estadio I/II, obtenido durante la cirugía. La supervivencia se analizó mediante los test Log Rank y multivariado de Cox. El 44.9% de los tumores fueron positivos para RARβ con expresión a nivel citoplasmático, mientras que el 34.7% lo expresó a nivel nuclear. La tinción para CRBP1 se observó en el 61.2% de los tumores. No se encontró asociación entre la expresión de ambas moléculas y las características clinicopatológicas (sexo, tamaño tumoral, nódulos línfáticos comprometidos, histopatología y p53). Tampoco se encontró asociación con el hábito de fu-mar. La presencia de células tumorales en el lavado pleural se asoció significativamente con la expresión de CRBP1. Por otro lado, se demostró asociación entre la expresión elevada de RARβ citoplasmático y menor supervivencia global (LR 4.17, p=0.0412). El análisis multivariado no mostró asociación con otras variables de pronóstico en NSCLC. En conclusión, en este grupo de pacientes NSCLC Estadio I/II, RARβ pareciera predecir la supervivencia global en forma independiente.

Although early-stage non-small-cell lung carcinoma (NSCLC) patients have a relative by favorable prognosis, the risk of a bad outcome remains substantial. Identification of reliable prognostic markers for disease recurrence and death has meaningful clinical application. Retinoids are involved in cell growth and differentiation and may antagonize cancer progression. Their effects are mediated through nuclear receptors called Retinoic Acid Receptor (RAR) and regulated by molecules such as Cellular Retinol-Binding Protein 1 (CRBP1) that function in retinol storage. The aim of this work was to analyze by immunohistochemistry the expression patterns of RARβ and CRBP1, involved in retinoid-mediated signaling, in the tumoral tissue of a cohort of stage I/II NSCLC patients (n=49) who underwent a successful surgical resection. Prognostic evaluation was performed with the multivariate Cox proportional hazard model: 44.9% of tumors were positive for RARβ staining at cytoplasmic level, while 34.7% showed nuclear staining. CRBP1 staining was observed in 61.2% of the lung tumors. No relationship was found between the number of cells expressing the studied molecules and clinical pathological features, including sex, T and N (stage), histopathology and p53 expression. Univariate analysis showed a significant association between positive cytoplasmatic expression of RARβ with shorter overall survival (Log-rank test 4.17, p=0.0412). Multivariate studies indicated that RARβ expression was not influenced by other clinical pathological parameters. In conclusion, in this cohort of stage I and II NSCLC, only the expression of RARβ at cytoplasmatic level is a significant independent unfavorable prognostic factor.

Citología de impresión una técnica novedosa y sencilla para el diagnostico de alteraciones de la superficie ocular / Cytology of impression, a new and simple technique for the diagnosis of alterations in the ocular surface

El presente artículo es una revisión de la técnica de citología de impresión como herramienta diagnóstica para las alteraciones de la superficie ocular. Se han utilizado un amplio rango de técnicas adaptadas a la citología de impresión de conjuntiva y cornea, como son, diferentes coloraciones para observar las muestras en microscopio óptico, microscopia electrónica, inmunofluorescencia, inmunohistoquimica, reacción en cadena de la polimerasa (PCR) y citometría de flujo. Actualmente, esta técnica es muy utilizada como una alternativa no invasiva para obtener “biopsias” muy delgadas y células epiteliales de la superficie ocular, especialmente porque no presenta efectos colaterales o contraindicaciones. Ha sido demostrado que es una ayuda diagnostica muy utilizada en optometría y oftalmología, en una gran variedad de procesos a nivel ocular. Durante la última década, su uso como herramienta de investigación y diagnóstico ha experimentado un enorme crecimiento y ha contribuido ampliamente en el conocimiento de las patologías de la superficie ocular.