Comparison of different final irrigant agitation techniques for the removal of Enterococcus faecalis biofilms from root canals: an in vitro study / Comparação de diferentes técnicas finais de agitação de irrigantes para a remoção de biofilmes de Enterococcus faecalis de canais radiculares: estudo in vitro

Objective: The aim of this in vitro study was to compare the effectiveness of different final irrigant agitation techniques in the removal of Enterococcus faecalis biofilms from root canals. Material and Methods: In total, the root canals of 85 extracted single-rooted human maxillary incisors teeth were prepared using the Revo-S system to a 40/06 size. The apical foramen of each tooth was sealed by light-cured resin composite material to obstruct bacterial leakage. The specimens were sterilized in an autoclave at 121°C for 15 min and stored until further use. All teeth except five (negative control group) were inoculated with Enterococcus faecalis and incubated in a CO2 chamber at 37°C for 7 days; the trypticase soy broth was changed every 2 days. For the determination of possible biofilm formation, five of the 80 teeth were randomly selected as a positive control group; one tooth of positive control group was analysed for biofilm development by scanning electron microscope (SEM) and these teeth received no final irrigant agitation procedure. Then, the remaining 75 teeth were randomly divided into five test groups (n=15 each) and were sequentially irrigated with 5% sodium hypochlorite (NaOCl), 17% ethylenediaminetetraacetic acid and 5% NaOCl. Following each irrigant application, different final irrigant agitation techniques were introduced for 60 s (3×20-s sessions). Group 1 received manual­ dynamic agitation, group 2 received passive ultrasonic agitation (PUI), group 3 received EndoActivator agitation, group 4 received photoninitiated photoacoustic streaming (PIPS) with the Er:YAG laser and group 5 received conventional syringe irrigation. Colony-forming units (CFUs) were counted in samples from the positive control and test groups. Data were analysed using Kruskal­ Wallis and post-hoc Mann­Whitney U multiple comparison tests. Results: E. faecalis elimination was significantly better in the experimental groups than in the positive control groups (p < 0.001). Manual­dynamic agitation and conventional syringe irrigation, with no significant differences between the two groups. Conclusion: Essentially, CFU reduction was significantly greater in the PUI, EndoActivator and PIPS groups than in the manual­dynamic agitation and conventional syringe irrigation groups (p <0.001) , with no significant differences among the former three groups. (AU)

Objetivo: O objetivo deste estudo in vitro foi comparar a eficácia de diferentes técnicas finais de agitação de irrigantes na remoção de biofilmes de Enterococcus faecalis de canais radiculares. Material e Métodos: No total, os canais radiculares de 85 dentes incisivos superiores unirradiculares humanos extraídos foram preparados usando o sistema Revo-S para um tamanho 40/06. O forame apical de cada dente foi selado por material compósito de resina fotopolimerizável para obstruir o vazamento bacteriano. Os espécimes foram esterilizados em autoclave a 121 ° C por 15 min e armazenados até uso posterior. Todos os dentes, exceto cinco (grupo controle negativo), foram inoculados com Enterococcus faecalis e incubados em câmara de CO2 a 37 ° C por 7 dias; o caldo de soja tripticase foi trocado a cada 2 dias. Para a determinação da possível formação de biofilme, cinco dos 80 dentes foram selecionados aleatoriamente como grupo controle positivo; um dos dentes do grupo controle positivo foi analisado para o desenvolvimento do biofilme por microscopia eletrônica de varredura (MEV) e estes dentes não receberam nenhum procedimento final de agitação irrigante. Em seguida, os 75 dentes restantes foram aleatoriamente divididos em cinco gruposteste (n = 15 cada) e irrigados sequencialmente com hipoclorito de sódio a 5% (NaOCl), ácido etilenodiaminotetracético a 17% e NaOCl a 5%. Após cada aplicação de irrigantes, diferentes técnicas finais de agitação foram introduzidas por 60 s (3 x 20 s sessões). Grupo 1 recebeu agitação manual-dinâmica, grupo 2 recebeu agitação ultra-sônica passiva (PUI), grupo 3 recebeu agitação EndoActivator, grupo 4 recebeu fotoacústica iniciada por fóton (PIPS) com o laser Er: YAG e grupo 5 recebeu irrigação convencional com seringa. As unidades formadoras de colônia (CFUs) foram contadas em amostras dos grupos controle positivo e teste. Os dados foram analisados utilizando testes de comparação múltipla Kruskal-Wallis e post-hoc Mann-Whitney U. Resultados: A eliminação de E. faecalis foi significativamente melhor nos grupos experimentais do que nos grupos de controle positivo (p < 0,001). Agitação manual-dinâmica e irrigação com seringa convencional, sem diferenças significativas entre os dois grupos. Conclusão: Essencialmente, a redução de UFC foi significativamente maior nos grupos PUI, EndoActivator e PIPS do que nos grupos de agitação manual-dinâmica e de seringa convencional (p < 0,001), sem diferenças significativas entre os três grupos anteriores (AU)

Efeito antibacteriano in vitro das soluções tetraclean, MTAD e modificações: teste de contato direto e ação sobre o biofilme / In vitro antibacterial effect of tetraclean, MTAD and modifications: direct exposure test and effect on the biofilm

O objetivo deste estudo foi avaliar a atividade antibacteriana das soluções Tetraclean®, MTAD® e modificações desta formulação sobre uma cepa de Enterococcus faecalis pelo teste de contato direto e frente ao biofilme. Na metodologia de contato direto, uma suspensão de E. faecalis foi exposta às soluções irrigadoras, por períodos de 30 s, 1, 3 e 10 min, e um agente neutralizante foi utilizado. As colônias viáveis foram quantificadas após diluições seriadas e cultura em placas de ágar. Para determinação do número inicial de UFC, água esterilizada foi usada como controle. Para o crescimento do biofilme, amostras de biofilme dentário foram suspensas em BHI (Brain Heart Infusion), e incubadas por 14 dias em anaerobiose, tendo como substrato, discos de hidroxiapatita. Após o período de incubação, os biofilmes foram expostos às soluções irrigadoras por períodos de 30 s, 1 e 3 min. Os biofilmes corados com o Live/Dead Baclight stain (Molecular Probes, Europe BV), que diferencia células viáveis (verde) e células não-viáveis (vermelho) foram observados na microscopia confocal. As imagens do biofilme obtidas pelo software EZ-C1 for Nikon foram transferidas para análise quantitativa da proporção de células viáveis sobre o total de células do biofilme para o software Imaris 5.0. No teste de contato direto, o Tetraclean® eliminou completamente o E. faecalis em 30 s, enquanto o MTAD® e o MTAD® + CTR 0,01% eliminaram após 10 min, e o MTAD® + CTR 0,1% resultou em culturas negativas após 3 min de contato com a suspensão bacteriana. Quando removido o Tween 80 do MTAD®, e acrescida a CTR 0,01%, obteve-se culturas negativas após 1 minuto. Os resultados obtidos pelo método de exposição ao biofilme confirmaram os achados do teste de contato direto...

The aim of this study was to evaluate the antibacterial effect of MTAD® and Tetraclean®. The tests were performed on Enterococcus faecalis using the direct exposure test and an in vitro biofilm model. Alternative formulations to MTAD® were also included in the experiments: MTAD® + 0.01% cetrimide (CTR); MTAD® + 0.1% CTR; MTAC (the detergent Tween 80 was substituted for cetrimide) with 0.01% CTR and MTAC (0.1% CTR). In the direct exposure test, a bacterial suspension was mixed with the irrigation solutions. After 30 seconds, 1 minute, 3 minutes and 10 minutes, an inactivator agent was used. The number or viable colonies were calculated after serial 10-fold dilutions and culture in agar plates. To calculate the initial number of colonies, sterilized water was used as a control. Dental biofilm samples were suspended in BHI broth and incubated in anaerobic conditions in hidroxiapatite discs. After incubation for 14 days, the biofilms were exposed to the irrigation solutions for 30 seconds, 1 minute and 3 minutes. Live/Dead Baclight stain (Molecular Probes, Europe BV) was used to diferentiate viable cells (Green) and non viable cells (Red). The samples were observed in the Confocal Laser Microscope. The biofilm images in 3D obtained in the EZ-C1 for Nikon software were transfered to quantitative analysis in the Imaris 5.0 software. The software calculated the ratio of green cells. In the direct exposure test, Tetraclean® and MTAC (0.1% CTR) erradicated E. faecalis in 30 s. MTAD® and MTAD® + 0.01% CTR eliminated E. faecalis after 10 min. MTAD® + 0.1% CTR resulted in negative culture after 3 min. Negative cultures were obtained after 1 min when MTAC (0.01% CTR) was used. The findings from the biofilm exposure method confirmed the results from direct exposure test. The Kruskal-Wallis statistical analysis showed a significant difference in time exposure to irrigant (P<0.001)...