Bioactive metabolites in of Ginkgo biloba leaves: variations by seasonal, meteorological and soil / Metabólitos bioativos em folhas de Ginkgo biloba: variações sazonais, meteorológicas e do solo

Abstract Ginkgo biloba is a traditional Chinese herbal medicine containing multiple components that contribute to its notable bioactivities. Variations of seasonal, meteorological and planting soil on the phytochemicals contents in G. biloba leaves due to the effects of growth meteorological and soil parameters were investigated in this study. The leaves of G. biloba were collected from different months and place in Zhejiang province, the contents of flavones (quercetin, kaempferol and isorhamnetin) and terpene lactones (bilobalide, ginkgolides A, B and C) were quantified by high performance liquid chromatography (HPLC) and the evaporative light scattering detector (ELSD) method. The established methods were validated with good linearity, precision, repeatability, stability, and recovery. Comprehensive analysis suggested the proper harvest time for G. biloba was in October of Zhejiang province. The result of correlation analysis with meteorological factors shows that the temperature and precipitation have non-significant effect on the main components of G. biloba. In addition, the type and content (Mn and Zn) of the soil showed significantly effect on the content of flavonoids and terpene lactones. This study enriched the knowledge on the development and utilization value of the G. biloba leaves and was useful for determining the optimal harvest time and growing condition.

Resumo Ginkgo biloba é um fitoterápico tradicional da medicina chinesa que contém vários componentes que contribuem para suas notáveis bioatividades. Variações sazonais, meteorológicos e de plantio do solo sobre os teores fitoquímicos em folhas de G. biloba, devido aos efeitos do crescimento meteorológico e parâmetros do solo, foram investigadas neste estudo. As folhas de G. biloba foram coletadas em diferentes meses e na província de Zhejiang, os teores de flavonas (quercetina, kaempferol e isorhamnetina) e lactonas terpênicas (bilobalida, ginkgolídeos A, B e C) foram quantificados por Cromatografia Líquida de Alta Eficiência (CLAE) e pelo método do detector de dispersão da luz por evaporação. Os métodos estabelecidos foram validados com boa linearidade, precisão, repetibilidade, estabilidade e recuperação. Uma análise abrangente sugeriu que o tempo de colheita adequado para G. biloba foi em outubro na província de Zhejiang. O resultado da análise de correlação com fatores meteorológicos mostra que a temperatura e a precipitação não têm efeito significativo sobre os principais componentes de G. biloba. Além disso, o tipo e composição (Mn e Zn) do solo apresentaram efeito significativo sobre o teor de flavonoides e lactonas terpênicas. Este estudo enriqueceu o conhecimento sobre o valor de desenvolvimento e utilização das folhas de G. biloba e foi útil para determinar o melhor tempo de colheita e condição de crescimento.

Bioactive metabolites in of Ginkgo biloba leaves: variations by seasonal, meteorological and soil

Abstract Ginkgo biloba is a traditional Chinese herbal medicine containing multiple components that contribute to its notable bioactivities. Variations of seasonal, meteorological and planting soil on the phytochemicals contents in G. biloba leaves due to the effects of growth meteorological and soil parameters were investigated in this study. The leaves of G. biloba were collected from different months and place in Zhejiang province, the contents of flavones (quercetin, kaempferol and isorhamnetin) and terpene lactones (bilobalide, ginkgolides A, B and C) were quantified by high performance liquid chromatography (HPLC) and the evaporative light scattering detector (ELSD) method. The established methods were validated with good linearity, precision, repeatability, stability, and recovery. Comprehensive analysis suggested the proper harvest time for G. biloba was in October of Zhejiang province. The result of correlation analysis with meteorological factors shows that the temperature and precipitation have non-significant effect on the main components of G. biloba. In addition, the type and content (Mn and Zn) of the soil showed significantly effect on the content of flavonoids and terpene lactones. This study enriched the knowledge on the development and utilization value of the G. biloba leaves and was useful for determining the optimal harvest time and growing condition.

Resumo Ginkgo biloba é um fitoterápico tradicional da medicina chinesa que contém vários componentes que contribuem para suas notáveis bioatividades. Variações sazonais, meteorológicos e de plantio do solo sobre os teores fitoquímicos em folhas de G. biloba, devido aos efeitos do crescimento meteorológico e parâmetros do solo, foram investigadas neste estudo. As folhas de G. biloba foram coletadas em diferentes meses e na província de Zhejiang, os teores de flavonas (quercetina, kaempferol e isorhamnetina) e lactonas terpênicas (bilobalida, ginkgolídeos A, B e C) foram quantificados por Cromatografia Líquida de Alta Eficiência (CLAE) e pelo método do detector de dispersão da luz por evaporação. Os métodos estabelecidos foram validados com boa linearidade, precisão, repetibilidade, estabilidade e recuperação. Uma análise abrangente sugeriu que o tempo de colheita adequado para G. biloba foi em outubro na província de Zhejiang. O resultado da análise de correlação com fatores meteorológicos mostra que a temperatura e a precipitação não têm efeito significativo sobre os principais componentes de G. biloba. Além disso, o tipo e composição (Mn e Zn) do solo apresentaram efeito significativo sobre o teor de flavonoides e lactonas terpênicas. Este estudo enriqueceu o conhecimento sobre o valor de desenvolvimento e utilização das folhas de G. biloba e foi útil para determinar o melhor tempo de colheita e condição de crescimento.

Ivermectin resistance of three Rhipicephalus microplus populations using the larval immersion test / Resistencia de tres poblaciones de Rhipicephalus microplus a la ivermectina por el ensayo de inmersión de larvas / Resistência de três populações de Rhipicephalus microplus à ivermectina pelo teste de imersão de larvas

Background: in Colombia, the control of tick infestation in cattle is almost exclusively performed with chemical acaricides. It is important to determine the degree of resistance of Riphicephalus microplus field populations to ivermectins (IVM) as the first step to design strategies to increase the useful life of acaricides and decrease the reliance on chemical controls. Objective: to test the degree of resistance to IVM. Methods: three cattle farms in Antioquia (Colombia) where IVM had previously failed to control infestations of R. microplus ticks were studied. Ticks were collected several months apart in 2013, and the larval immersion test (LIT) was performed on the progeny of the adult females. Concentration-mortality data were subjected to probit analysis. Results: the three populations showed lethal concentrations (LC) 50 and 99 of ≥ 30 ppm and ≥ 400 ppm, respectively. There was no difference observed in the LC at different times of collection for each population studied. Such high values for LC, together with very low regression slopes (≤ 2), indicated a very heterogeneous response to increasing concentrations of IVM, which is common for resistant populations. At two farms, subcutaneous injection with a long-acting formulation of IVM at a dosage of 630 μg/Kg was ineffective at eliminating existing infestations and protecting against reinfestations, confirming farmer suspicions of lost efficacy. Conclusion: epidemiological studies are necessary to assess the current status of resistance to IVM in this region of Colombia, and it is likely that the intensive use of IVM will aggravate this situation in the future.

Antecedentes: en Colombia, el control de la infestación de garrapatas en el ganado se ha realizado casi exclusivamente con acaricidas químicos y es importante determinar el grado de resistencia de las poblaciones de campo de Riphicephalus microplus a ivermectinas (IVM) como el primer paso para diseñar tácticas que aumenten su vida útil y disminuyan la dependencia de los controles químicos. Objetivo: probar el grado de resistencia a IVM. Métodos: se evaluó la resistencia de R. microplus a IVM en tres fincas ganaderas en Antioquia (Colombia) donde se sospechaba que productos con IVM estaban fracasando para controlar infestaciones por garrapatas. Se recolectaron garrapatas con varios meses de diferencia durante el año 2013 y se empleó la prueba de inmersión de larvas (LIT) con la descendencia de las hembras adultas. Los datos de concentraciónmortalidad fueron sometidos a análisis probit. Resultados: los resultados para las tres poblaciones estudiadas mostraron concentraciones letales (LC) 50 y 99 de ≥ 30 ppm y ≥ 400 ppm, respectivamente. No se observó diferencia en las LC obtenidas en diferentes momentos de recogida para cada población estudiada. Los altos valores de LC, junto con pendientes muy bajas en las rectas de regresión (≤ 2), indicaron una respuesta muy heterogénea a concentraciones crecientes de IVM, propio de poblaciones resistentes. En dos de las granjas, la administración de inyecciones subcutáneas con una formulación de acción prolongada de la IVM a dosis de 630 μg/Kg fue incapaz de eliminar las infestaciones y proteger frente a reinfestaciones, confirmando las sospechas de los ganaderos de pérdida de eficacia. Conclusión: estudios epidemiológicos son necesarios para evaluar el estado actual de la resistencia a IVM en esta región de Colombia, y es probable que el uso intensivo de IVM agrave esta situación en el futuro.

Antecedentes: na Colômbia, o controle de infestação com carrapatos em bovinos tem sido realizado quase exclusivamente com acaricidas químicos pelo qual se faz importante para determinar o grau de resistência de populações de campo de Rhipicephalus microplus a uma das drogas antiparasitárias de maior uso no manejo de gado, a ivermectina (IVM), como o primeiro passo para projetar táticas para aumentar a sua vida útil e diminuir a dependência de controles químicos. Objetivo: testar o grau de resistência à ivermectina. Método: foi avaliada a resistência de R. microplus à ivermectina em três fazendas de gado leiteiro localizadas no departamento de Antioquia (Colômbia) com suspeita de que o controle dos carrapatos com a utilização deste produto não estava sendo efetivo. Coletaram-se carrapatos em diferentes meses durante o ano 2013, e foi utilizado o teste de imersão de larvas (LIT) na descendência das fêmeas adultas, como método para detecção da resistência. Os dados de concentração-mortalidade foram submetidos à análise Probit. Resultados: todas as três populações avaliadas mostraram concentrações letais (LC) 50 de ≥ 30 ppm, e LC 99 de ≥ 400 ppm. Não foram observadas diferenças na LC entre as coletas feitas nos diferentes meses, em cada população amostrada. Os altos valores de LC encontrados junto com uma baixa regressão linear (≤ 2), indicam uma resposta muito heterogênea as concentrações crescentes de ivermectina, próprio de populações resistentes. Em duas das fazendas, a administração de injeções subcutâneas de ivermectina com uma formulação de longa ação, em doses de 630 μg/Kg, não foram capazes de eliminar as infestações e proteger contra a reinfestação, confirmando as reclamações dos fazendeiros para a perda de eficácia da droga antiparasitária. Conclusões: os estudos epidemiológicos são necessários para avaliar o estado atual da resistência à ivermectina nesta região da Colômbia, e é provável que o uso intensivo da ivermectina agrave ainda mais esta situação no futuro.

Resistência de Haemonchus placei, Cooperia punctata e Oesophagostomum radiatum à ivermectina pour-on a 500mcgkg-1 em rebanhos bovinos no Brasil / Haemonchus placei, Cooperia punctata and Oesophagostomum radiatum resistant to ivermectin pour-on 500mcgkg-1 in cattle from Brazil

O amplo espectro de ação dos endectocidas e a praticidade de aplicação das suas formulações pour-on são fatores que têm estimulado uma maior frequência de utilização destes produtos na criação de bovinos. Neste estudo, avaliou-se a eficácia anti-helmíntica da ivermectina, administrada via pour-on, 500mcgkg-1, contra nematódeos de bovinos provenientes de diferentes rebanhos. Foram adquiridos 12 bezerros de cada um dos quatro rebanhos selecionados. Todos os 48 bezerros utilizados apresentavam médias de ovos por grama de fezes (OPG) maiores que 500, considerando-se três contagens consecutivas. Na sequencia, os animais de cada rebanho foram divididos em dois grupos de seis bovinos cada, sendo um tratado com ivermectina 500mcgkg-1 via pour-on e outro mantido como controle. Quatorze dias depois do tratamento, os bovinos foram submetidos à eutanásia para contagem de endoparasitas. A ivermectina demonstrou resultados nulos de eficácia contra H. placei nos quatro rebanhos. Contra C. punctata, tal formulação teve eficácia nula nos rebanhos provenientes de Jaboticabal,SP, e de Formiga,MG, e eficácias de 75,8% e 58,4% nos rebanhos provenientes de São José do Rio Pardo,SP, e de São Sebastião do Paraíso,MG, respectivamente. Valores de eficácia de 94,2% (Jaboticabal), 0,0% (São José do Rio Pardo), 94,2% (Formiga) e 39,2% (São Sebastião do Paraíso) foram detectados contra O. radiatum. Com base nos resultados encontrados, pode-se concluir que as quatro populações de Haemonchus placei e de Cooperia punctata avaliadas foram resistentes à ivermectina, administrada via pour-on, 500mcgkg-1. Foram observadas cepas de Oesophagostomum radiatum resistentes à ivermectina em dois dos quatro rebanhos testados.

The broad spectrum of endectocides and the easy use mode of their pour-on formulations are factors that have stimulated a higher frequency of use these drugs in cattle. In this study was evaluated the efficacy of ivermectin pour-on using the dose of 500mcgkg-1, against nematodes in naturally infected cattle from different herds. Twelve calves were brought from each of the four farms selected. All the 48 calves used showed mean of eggs per gram of feces (EPG) greater than 500 considering three consecutive counts. Subsequently, animals from each herd were divided into two groups of six animals each, one treated pour-on with ivermectin 500mcgkg-1 and other kept as untreated control. Calves were euthanized 14 days after treatment for counting the endoparasites. Ivermectin showed null effect against H. placei in all the herds evaluated. The drug was also ineffective against C. punctata in the herds from Jaboticabal,SP and Formiga,MG, and reached efficacy of 75.8% and 58.4% in herds from São José do Rio Pardo,SP and São Sebastião do Paraíso,MG, respectively. Efficacies of 94.2% (Jaboticabal), 0.0% (São José do Rio Pardo), 94.2% (Formiga) and 39.2% (São Sebastião do Paraíso) were detectedagainst O. radiatum. Based on these results obtained on the present study, the four populations of Haemonchus placei and Cooperia punctata evaluated were resistant to ivermectin pour-on using a dose of 500mcgkg-1. Ivermectin-resistant strains of Oesophagostomum radiatum were found in two of the four herds evaluated.

In Vitro Antitumor Activity of Sesquiterpene Lactones from Lychnophora trichocarpha / Atividade antitumoral in vitro de lactonas sesquiterpenicas de Lychnophora

The sesquiterpene lactones lychnopholide and eremantholide C were isolated from Lychnophora trichocarpha Spreng. (Asteraceae), which is a plant species native to the Brazilian Savannah or Cerrado and popularly known as arnica. Sesquiterpene lactones are known to present a variety of biological activities including antitumor activity. The present paper reports on the evaluation of the in vitro antitumor activity of lychnopholide and eremantholide C, in the National Cancer Institute, USA (NCI, USA), against a panel of 52 human tumor cell lines of major human tumors derived from nine cancer types. Lychnopholide disclosed significant activity against 30 cell lines of seven cancer types with IC100 (total growth concentration inhibition) values between 0.41 µM and 2.82 µM. Eremantholide C showed significant activity against 30 cell lines of eight cancer types with IC100 values between 21.40 µM and 53.70 µM. Lychnopholide showed values of lethal concentration 50% (LC50) for 30 human tumor cell lines between 0.72 and 10.00 µM, whereas eremantholide C presented values of LC50 for 21 human tumor cell lines between 52.50 and 91.20 µM. Lychnopholide showed an interesting profile of antitumor activity. The α-methylene-γ-lactone present in the structure of lychnopholide, besides two α,β- unsaturated carbonyl groups, might be responsible for the better activity and higher cytotoxicity of this compound in relation to eremantholide C.

As lactonas sesquiterpênicas licnofolida e eremantolida C foram isoladas de Lychnophora trichocarpha Spreng. (Asteraceae), espécie vegetal nativa do cerrado brasileiro e popularmente conhecida por arnica brasileira. As lactonas sesquiterpênicas são conhecidas por apresentarem variadas atividades biológicas, incluindo atividade antitumoral. O presente artigo relata a avaliação da atividade antitumoral in vitro de licnofolida e eremantolida C frente a um painel de 52 linhagens de células tumorais, provenientes de tumores humanos referentes a nove principais tipos de câncer. Os testes foram conduzidos no National Cancer Institute, USA (NCI, USA). Licnofolida apresentou atividade significativa frente a 30 linhagens de células tumorais referentes a sete tipos de câncer, com valores de CI100 (concentração que inibe 100% do crescimento celular) entre 0,41 µM e 2,82 µM. Eremantolida C mostrou atividade significativa frente a 30 linhagens de células tumorais referentes a oito tipos de câncer, com valores de CI100 entre 21,40 µM e 53,70 µM. Licnofolida apresentou valores de concentração letal 50% (CL50) para 30 linhagens de células tumorais humanas entre 0,72 e 10,00 µM, enquanto eremantolida C mostrou valores de CL50 para 21 linhagens entre 52,50 e 91,20 µM. Licnofolida apresentou um interessante perfil de atividade antitumoral. A presença na estrutura química da licnofolida de uma α-metileno-γ-lactona, além de dois grupos ésteres α,β-insaturados, podem ser responsáveis pela melhor atividade e maior citotoxicidade desta substância em relação à eremantolida C.

Evaluation of resistance in a selected field strain of Haemonchus contortus to ivermectin and moxidectin using the Larval Migration on Agar Test / Avaliação da resistência em um isolado de campo selecionado de Haemonchus contortus à ivermectina e moxidectina usando o Teste de Migração de Larvas em Ágar

Haemonchus contortus is one of the most common and economically significant causes of disease in small ruminants worldwide, and the control programs of parasitic nematodes - including H. contortus - rely mostly on the use of anthelmintic drugs. The consequence of the use of this, as the sole sanitary strategy to avoid parasite infections, was the reduction of the efficacy of all chemotherapeutic products with a heavy selection for resistance. The widespread of anthelmintic resistance and the difficulty of its early diagnosis has been a major concern for the sustainable parasite management on farms. The objective of this research was to determine and compare the ivermectin (IVM) and moxidectin (MOX) effect in a selected field strain of H. contortus with a known resistance status, using the in vitro larval migration on agar test (LMAT). Third stage larvae of the selected isolate were obtained from faecal cultures of experimentally infected sheep and incubated in eleven increasing diluted concentrations of IVM and MOX (6, 12, 24, 48, 96, 192, 384, 768, 1536, 3072 and 6144µg/mL). The dose-response sigmoidal curves were obtained using the R² value of >0.90 and the lethal concentration (LC50) dose for the tested anthelmintic drugs using a four-parameter logistic model. The LC50 value for MOX was significantly lower than IVM (1.253µg/mL and 91.06µg/mL), identifying the H. contortus isolate as considerably less susceptible to IVM compared to MOX. Furthermore, the LMAT showed a high consistency (p<0.0001) and provided to be a useful diagnostic tool for monitoring the resistance status of IVM and MOX in H. contortus field isolate, as well as it may be used for official routine drug monitoring programs under the Ministry of Agriculture (MAPA) guidance.

Haemonchus contortus é uma das causas mais comuns e economicamente significativas de doença em produções de pequenos ruminantes em todo o mundo, e os programas de controle de parasitas nematoides - incluindo H. contortus - baseiam-se principalmente no uso de drogas anti-helmínticas. A consequência da utilização desses compostos, como sendo a única estratégia sanitária para evitar infecções por parasitas, tem sido a redução da eficácia de todos os produtos quimioterápicos, selecionando fortemente para resistência. O desenvolvimento generalizado da resistência anti-helmíntica e a dificuldade de seu diagnóstico precoce têm sido uma grande preocupação para o manejo sustentável de parasitas no campo. O objetivo desta pesquisa foi determinar e comparar o efeito da ivermectina (IVM) e da moxidectina (MOX) em um isolado de campo selecionado de H. contortus com um estado de resistência conhecido, utilizando o teste in vitro de migração de larvas em ágar (LMTA). Larvas de terceiro estágio de um isolado de H. contortus selecionado foram obtidas a partir de culturas de fezes de ovinos infectados experimentalmente e incubadas em onze concentrações diluídas crescentes de IVM e MOX (6, 12, 24, 48, 96, 192, 384, 768, 1536, 3072 e 6144µg/mL). As curvas sigmoides de dose-resposta foram obtidas utilizando o valor de R² >0,90 e a dose de concentração letal (CL50) para as drogas anti-helmínticas testadas, utilizando um modelo logístico de quatro parâmetros. O valor de CL50 para MOX foi significativamente menor do que para IVM (1,253µg/mL e 91,06µg/mL), identificando o isolado de H. contortus como consideravelmente menos suscetível à IVM em comparação à MOX. Além disso, o LMTA mostrou uma alta consistência (p<0,0001) e pode ser uma ferramenta útil de diagnóstico para monitorar o status de resistência de IVM e MOX em isolado de campo de H. contortus, assim como ser utilizado de forma oficial e em rotina para programas de monitoramento das drogas sob a demanda do Ministério da Agricultura (MAPA).

Anthelmintic resistance in a dairy cattle farm in the State of Minas Gerais / Resistência anti-helmíntica em uma propriedade de bovinos leiteiros em Minas Gerais

Eighty-four half-blood Gir × Holstein (F1) calves aged six months who were naturally infected by gastrointestinal helminths and maintained in rotational grazing received different anthelmintic treatments. Group A received anthelmintics according to the usual management in the property (eight treatments, seven including a macrocyclic lactone agent). Group B received strategic treatment (ivermectin 3.15 percent) at the beginning and at the end of the rainy period. Eggs per gram of feces (EPG) counts and genus of larvae from fecal cultures were determined on a monthly basis from April 2002 to December 2003. There was no significant reduction (p > 0.05) in EPG counts in any group after anthelminthic treatment, and the larvae in fecal cultures observed were Cooperia, Haemonchus, Oesophagostomum and a few Trichostrongylus. Cooperia was the most prevalent genus in the first four months of the experiment and Haemonchus in the following months. In 2003, tracer calves were introduced onto the pastures monthly and they showed high nematode burden many times throughout the year, and Cooperia punctata and Haemonchus contortus were the main species identified. The results suggest that there is anthelminthic resistance in this farm, mainly to macrocyclic lactones, and the development of immunity by crossbred animals was vital to reduce nematode burden.

Oitenta e quatro bezerras meio sangue Gir × holandês (F1) com seis meses de idade, naturalmente infectadas por helmintos gastrintestinais e mantidas em pastejo rotacionado receberam diferentes tratamentos anti-helmínticos. O grupo A recebeu anti-helmínticos segundo manejo empregado na propriedade (oito tratamentos, sete com produtos à base de lactonas macrocíclicas). O grupo B recebeu tratamento estratégico (ivermectina 3,15 por cento) no inicio e final de período chuvoso. Mensalmente, no período de abril de 2002 a dezembro de 2003, foram realizadas contagens de ovos por grama de fezes (OPG) e coproculturas. Não houve redução significativa (p > 0,05) nas contagens de OPG em nenhum dos grupos após os tratamentos anti-helmínticos, e as larvas encontradas na coprocultura foram Cooperia, Haemonchus, Oesophagostomum e poucos Trichostrongylus, com predominância de Cooperia nos quatro meses iniciais e Haemonchus nos meses seguintes. No ano de 2003, bezerros traçadores foram alocados mensalmente nos pastos, apresentando altas cargas parasitárias na maioria dos meses do ano, sendo as principais espécies identificadas: Cooperia punctata e Haemonchus contortus. Os resultados indicam que os nematódeos da fazenda apresentam resistência anti-helmíntica, principalmente às lactonas macrocíclicas, e o desenvolvimento de imunidade foi primordial para reduzir a carga parasitária dos animais mestiços.

Determinación de los grados de resistencia antihelmíntica que presentan los pequeños strongylus frente a las lactonas macrocíclicas, según el test de análisis del desarrollo de larvas (LDA) en equinos de las sabanas de Casanare / Determining the degree of anthelmintic resistance against macrocyclic lactones in small strongylus, based on the larvae development analysis (LDA) in horses from grasslands in the department of Casanare

El presente estudio se desarrolló en las sabanas de Casanare, a fin de determinar los grados de susceptibilidad o resistencia antihelmíntica que presentan las poblaciones de peque-ños Strongylus de esta región del país, frente a las lactonas macrocíclicas. Se muestrearon cuatro municipios del departamento: Aguazul, Paz de Ariporo, Maní y El Yopal, entre junio del 2006 y abril del 2007, recolectando en cada uno de los municipios diez muestras de materia fecal fresca, directamente de los potreros y completamente al azar. Las muestras fueron procesadas mediante la técnica coprológica de MacMaster, estableciendo el número de hpg de materia fecal por municipio. A las seis muestras con el conteo de hpg de materia fecal más alto, de cada predio se extrajeron larvas L3 mediante las técnicas de coprocultivo y Baermann-Wetzel con las cuales se corrió la prueba análisis del desarrollo de larvas (LDA), detectando poblaciones de pequeños Strongylus altamente susceptibles a la acción de las lactonas macrocíclicas (ivermectina).

This study was conducted in the grasslands of the Department of Casanare, seeking to determine the degree of anthelmintic susceptibility or resistance against macrocyclic lactones in small populations of Strongylus in this region of the country. Samples were taken from four municipalities in the department: Aguazul, Paz de Ariporo, Maní and El Yopal, between June, 2006 and April, 2007, where ten fresh fecal samples were collected in each municipality, directly from the field and in a completely random way. The samples were processed using the MacMaster coprological technique, thus determining the highest count of fecal epg by municipality. L3 larvae were extracted from each of the six samples with the highest count of fecal epg through the coprological and Baermann-Wetzel tests with which the Larvae Development Analysis (LDA) test was run, detecting Small Strongylus highly susceptible to the action of macrocyclic lactones (ivermectin).

Actividad fagodisuasiva de las plantas Tithonia diversifolia y Montanoa hibiscifolia (Asteraceae) sobre adultos del insecto plaga Bemisia tabaci (Homoptera: Aleyrodidae)

Phagodeterrent activity of the plants Tithonia diversifolia and Montanoa hibiscifolia (Asteraceae) on adults of the pest insect Bemisia tabaci (Homoptera: Aleyrodidae). Bemisia tabaci (Gennadius) is a polyphagous, cosmopolitan and worldwide relevant pest, mainly acting as a virus vector on many crops. A sound preventive approach to deal with it would be the application of repellent or deterrent substances hopefully present in tropical plants, which in turn may contribute to take advantage of the remarkable rich Mesoamerican biodiversity. Therefore, extracts of two wild plants belonging to family Asteraceae, titonia (Tithonia diversifolia) and "tora" (Montanoa hibiscifolia), were tested for phagodeterrence to B. tabaci adults. The crude leaf extract of each one, as well as four fractions thereof (hexane, dichlorometane, ethyl acetate, and methanol) were tested under greenhouse conditions; in addition, the extracts were submitted to a phytochemical screening to determine possible metabolites causing phagodeterrence. Both restricted-choice and unrestricted-choice experiments were conducted. In the former ones, each fraction was tested at four doses (0.1, 0.5, 1.0 and 1.5% v/v), which were compared with four control treatments: distilled water, endosulfan, an agricultural oil (Aceite Agrícola 81 SC), and the emulsifier Citowett. Tomato plants were sprayed and placed inside sleeve cages, where 50 B. tabaci adults were released. The criterion to appraise phagodeterrence was the number of landed adults on plants at 48h. For the unrestricted-choice experiments, only the two highest doses (1.0 and 1.5%) of the crude extracts of each species were tested, and compared to distilled water and the agricultural oil. The titonia and "tora" crude extracts caused phagodeterrence, and for both plant species the methanol fraction stood out. Results suggest that metabolites causing phagodeterrence are several sesquiterpenic lactones, polyphenolic compounds (flavonoids and tannins) and saponins. Rev. Biol. Trop. 57 (4): 1201-1215. Epub 2009 December 01.

Bemisia tabaci (Gennadius) (Homoptera: Aleyrodidae) es una plaga polífaga, cosmopolita y de gran relevancia mundial, sobre todo como vector de virus en numerosos cultivos, por lo que sería deseable un enfoque preventivo para su manejo. En tal sentido, podría recurrirse a la utilización de sustancias repelentes o disuasivas, algunas de ellas presentes en plantas tropicales, lo cual contribuiría al aprovechamiento de la rica biodiversidad mesoamericana. Por tanto, se evaluó la posible actividad fagodisuasiva sobre los adultos de B. tabaci de dos especies silvestres de la familia Asteraceae: titonia (Tithonia diversifolia (Hemsl.) A. Gray) y tora (Montanoa hibiscifolia Benth.). Para ello, en condiciones de invernadero se evaluaron los extractos crudos y cuatro fracciones (hexano, diclorometano, acetato de etilo y metanol) de ambas especies, a los cuales se les hizo un análisis fitoquímico (tamizaje) el cual permitió determinar cuáles metabolitos presentes en T. diversifolia y M. hibiscifolia podrían causar fagodisuasión en B. tabaci. Se realizaron dos tipos de experimentos: de escogencia restringida y de escogencia irrestricta. En los primeros, cada fracción se evaluó a cuatro dosis (0.1, 0.5, 1.0 y 1.5% v/v), y se comparó con cuatro tratamientos testigo: aceite agrícola, endosulfán, un emulsificante (Citowett) y un testigo absoluto (agua). Se asperjaron plantas de tomate colocadas dentro de jaulas de manga, donde se liberaron 50 adultos de B. tabaci. Para determinar si existía fagodisuasión se utilizó como criterio el número de adultos posados a las 48h. Para el experimento de escogencia irrestricta se utilizaron las dos concentraciones más altas (1.0 y 1.5%) del extracto crudo de cada especie y se compararon con el aceite agrícola y agua. Los extractos crudos de titonia y tora causaron fagodisuasión, y para ambas especies la fracción de metanol fue la que más sobresalió. En conclusión, los resultados obtenidos en los bioensayos junto con los obtenidos en el análisis de los componentes químicos presentes, sugieren que los metabolitos causantes de la fagodisuasión son algunas lactonas sesquiterpénicas, compuestos polifenólicos (flavonoides y taninos) y saponinas.

Sarna demodécica canina e suas novas perspectivas de tratamento- Revisão / Sarna demodécica canina y sus nuevas perspectivas de tratamiento- Revisión / Canine dermodicosis and new treatment perspectives: Review

A sarna demodécica canina, também chamada de demodicose canina ou demodicidose canina, é uma das dermatopatias mais comumente encontradas na clínica veterinária, sendo uma das mais sérias enfermidades encontradas nos cães.O tratamento pode ser insatisfatório e frustrante, fazendo com que muitos cães sejam submetidos a eutanásia, tanto em função da pouca eficácia dos acaricidas disponíveis, quanto de consecutivas recidivas. Atualmente, depois de mais de 20 anos de primazia do ectocida tópico amitraz como droga de eleição para tratamento de cães parasitados pelo Demodex canis, uma nova classe de fármacos de ação sistêmica vem ganhando a confiança dos clínicos e revolucionando conceitos terapêuticos. As lactonas macrocíclicas dividem-se em milbemicinas, como milbemicina oxima e moxidectina, e em avermectinas, como ivermectina, doramectina e abamectina. Algumas delas apresentam grande potencial, e há grande quantidade de relatos positivos sobre seu emprego. Entretanto, a falta de padronização para estudos sobre seu sucesso terapêutico limita a recomendação de protocolos definitivos, de forma que alguns ainda indicam opção primária pelo uso de amitraz, para só depois lançar mão de uma das lactonas macrocíclicas. Novos estudos e novas estratégicas para delineamento de protocolos terapêuticos, como oemprego de cálculos de extrapolação alométrica, podem contribuir grandemente para que essa linha de trabalho continue a evoluir, trazendo os esperados benefícios para médicos veterinários, clientes e pacientes.

Demodicosis, also named demodectic mange, is one of the most common dermatologic diseases in veterinary practice, and its generalized presentation is one of the most severe diseases in dogs. Therapy may be unsatisfactory and frustrating, causing the euthanasia of a lot of dogs because of acaricid inefficacy and consecutive recurrences. Nowadays, after more than 20 years of primacy of the topical ectocide amitraz as drug of choice for demodicosis, a new class of systemic drugs is gaining practitioners’ confidence and revolutionizing therapeutic concepts. Macrocyclic lactones are divided into mylbemycins such as mylbemycin oxime and moxydectin, and avermectins such as ivermectin, doramectin e abamectin. Some of them present great potential and there are a lot of positive reports with respect to their use. However, the lack of patterns for the study of their therapeutic success still limits the indication of definitive protocols, leading some clinicians to indicate the amitraz as their first option, making use of macrocyclic lactones at a later time. New studies and strategies in designing therapeutic protocols, as the use of allometric scaling calculations, may contribute decisively for the evolution of this working line, leading to the expected benefits for veterinarians, clients, and patients.

La sarna demodécica canina, también llamada demodicosis canina o demodicidosis canina, es una de las máscomunes dermatopatias encontradas en la clínica veterinaria, siendo una de las más serias enfermedades encontradas en losperros. El tratamiento puede ser insatisfactorio y frustrante, haciendo con que muchos perros sean sometidos a eutanasia,tanto en función de poca eficacia de los acaricidas disponibles, cuanto de consecutivas recidivas. Actualmente, después demás de 20 años de primacía del ectocida tópico amitraz como droga de elección para tratamiento de perros parasitados por el Demodex canis, una nueva clase de fármacos de acción sistémica viene ganando la confianza de los clínicos y revolucionando conceptos terapéuticos. Las lactonas macrocíclicas se dividen en milbemicinas, como milbemicina oxima y moxidectina, y en avermectinas, como ivermectina, doramectina y abamectina. Algunas de ellas presentan gran potencial, y hay gran cantidad de relatos positivos sobre su empleo. Entretanto, la falta de estandarización para estudios sobre su eficacia terapéutica limitala recomendación de protocolos definitivos, de manera que algunos aún indican opción primaria por el uso de amitraz, para solamente después emplear las lactonas macrocíclicas. Nuevos estudios y nuevas estratégicas para planteamiento de protocolos terapéuticos, como el empleo de cálculos de extrapolación alométrica, pueden contribuir grandemente para que esa líneade trabajo continúe a evolucionar, trayendo los esperados beneficios para médicos veterinarios, clientes y pacientes.

Lactonas sesquiterpénicas de las plantas Viguiera sylvatica y Decachaeta thieleana (Asteraceae) modulan la producción de óxido nítrico y la fagocitosis de macrófagos RAW

Sesquiterpene lactones of the plants Viguiera sylvatica and Decachaeta thieleana (Asteraceae) modulate nitric oxide production and phagocytosis of macrophages cell line RAW. Different species of the Asteraceae family are a potential source of sesquiterpene lactones with anti-inflammatory properties. Macrophages play a central role in the regulation of immune responses. In the present study, the in vitro effect of two sesquiterpene lactones, a millerenolide and a thieleanin, was assessed by measuring the production of nitric oxide (NO) by cell line RAW (murine macrophages) using the Griess reagent. Additionally, the effect of these sesquiterpene lactones on phagocytic capacity of latex particles and the reduction of nitroblue tetrazolium (NBT) were evaluated microscopically. Treatment of macrophages with >2.5 µg/ml of both sesquiterpene lactones, reduced the production of NO. A decreased number of macrophages able to reduce NBT were observed when these cells were treated with 3 µg/ml of millerenolide or 7.5 µg/ml of thieleanin. Treatment of macrophages with 4 µg/ml of millerenolide or 7.5 µg/ml of thieleanin, reduced the phagocytic capacity of macrophages. Cytotoxic effects on the macrophages were only observed when the concentration was increased to 8 µg/ml of millerenolide or 25 µg/ml of thieleanin. Our results suggest that these sesquiterpene lactones could be useful compounds in the elaboration of anti-inflammatory drugs. Rev. Biol. Trop. 56 (3): 1063-1073. Epub 2008 September 30.

Las plantas de la familia Asteraceae son una fuente potencial de lactonas sesquiterpénicas con propiedades antiinflamatorias. Los macrófagos son células que desempeñan una función central en la regulación de la respuesta inmune. Este estudio evaluó el efecto in vitro de dos lactonas sesquiterpénicas, un millerenólido y thieleanina, sobre la producción de óxido nítrico (NO) en una línea celular de macrófagos de ratón (RAW), utilizando el reactivo de Griess. Además, se estudió el efecto sobre la capacidad fagocítica de RAW, evaluando al microscopio la fagocitosis de partículas inertes de látex y la reducción de nitroazul de tetrazolio (NBT). Se observó que los macrófagos tratados con lactona sesquiterpénica (>2.5 µg/ml) disminuyeron la producción de NO. Además, se observó una disminución de la cantidad de macrófagos capaces de reducir NBT, después que fueron tratados con millerenólido (3 µg/ml) o thieleanina (7.5 µg/ ml). Por otro lado, la exposición a 4 µg/ml de millerenólido ó 7.5 µg/ml de thieleanina redujo la cantidad promedio de partículas de látex fagocitadas. No se observaron diferencias entre tratamientos y control en cuanto al porcentaje de células fagocíticas. Sólo se observaron efectos citotóxicos sobre los macrófagos, cuando la concentración de millerenólido se incrementó a 8 µg/ml o la de thieleanina se aumentó a 25 µg/ml. Estos resultados sugieren que el millerenólido y la thieleanina podrían ser compuestos útiles en la elaboración de drogas antiinflamatorias.

Atividade antibacteriana de furanoeliangólidos / Antibacterial activity of furanoeliangolides

As lactonas sesquiterpênicas licnofólido (1) e eremantólido C (2) e alguns derivados: 1 ,2 -epóxieremantólido C (3), 1 β -hidróxi-2,3-diidroeremantólido C (4), 3 - hidróxieremantólido C (5), cloreto de 4,5-diidroeremantólido-5-n-propilamônio (6) e 1 β -hidróxi- 2,3-diidrolicnofólido (7) foram testadas contra as bactérias Enterococus faecalis S48, Bacillus subtilis CECT 397, Staphylococus aureus ATCC 8, Salmonella typhymurium LT2, Escherichia coli U9 e Proteus sp. Os compostos 1, 4, 5 e 7 apresentaram atividade antibacteriana.

Sesquiterpene lactones lychnopholide (1) and eremantholide C (2) and some derivatives: 1 ,2 -epoxyeremantholide C (3), 1 β -hidroxy-2,3-dihydroeremantolide C (4), 3 -hydroxyeremantholide C (5), 5-n- propylamonium- 4,5-dihydroeremantholide C chloride (6) and 1 β -hydroxy-2,3- dihydrolychnopholide (7) were tested against Enterococus faecalis S48, Bacillus subtilis CECT 397, Staphylococus aureus ATCC 8, Salmonella typhymurium LT2, Escherichia coli U9 e Proteus sp. Compounds 1, 4, 5 and 7 showed activity.