Comparación Histológica e Inmunohistoquimica de Muestras de Tejido Procesadas por la Técnica Convencional o por el Método Simplificado de Acetonas / Histological and Immunohistochemical Comparison of Tissue Samples Processed by the Conventional Technique or the Acetone Simplified Method

La técnica convencional (TC) que usa alcohol como agente deshidratante, es un método útil en los laboratorios de Histología y Anatomía Patológica. Recientemente, un nuevo método simplificado con acetona (TA) fué diseñado en un intento por reducir el tiempo de procesamiento de los tejidos (de 12 a 4 horas), el costo de reactivos, y como un factor importante para tener un diagnóstico veraz y rápido. En este trabajo se compararon los parámetros histológicos e inmunohistoquímicos en muestras de cáncer de mama, colon y riñón tratadas con ambos métodos. Los cortes fueron teñidos con H & E o tricrómico de Masson. También se llevó a cabo inmunohistoquímica con anticuerpos especificos para la identificación de citoqueratinas AE1/AE3, el receptor de estrógeno y receptor de progesterona. Se realizó un estudio ciego por tres especialistas en morfológía, quienes evaluaron la tinción nuclear, tinción del citoplasma y friabilidad o cambios en la estructura tisular. La especificidad y sensibilidad de la unión de los anticuerpos también fueron evaluadas. Los valores obtenidos para cada parámetro se analizaron estadísticamente con la prueba t de Student. Nuestros resultados muestran que los métodos de TC y TA no modificaron características histológicas como el patrón de tinción, ni se detectaron cambios tisulares. La positividad de la inmunohistoquímica fué similar para ambos métodos. No se observó diferencia estadística entre TC y TA. Nuestros resultados sugieren que la aplicación de la TA no modificó las propiedades histológicas e inmunohistoquímicas y que podría ser un método útil en el análisis morfológico.

The conventional technique (CT) using alcohol as a drying agent, is a useful method of histology and pathology in the laboratory. Recently, a new simplified method with acetone (TA) was designed in an attempt to reduce the processing time of the tissues (12 to 4 hours), the cost of reagents, and as an important factor to have an accurate and prompt diagnosis . This study compared the histological and immunohistochemical parameters in breast cancer, colon and kidney specimens treated with both methods. The sections were stained with H & E or Masson trichrome. Immunohistochemistry study with antibodies specific for the identification of cytokeratin AE1/AE3, the estrogen receptor and progesterone receptor was also carried out. Blind study was conducted by three specialists in morphology, who evaluated the nuclear staining, staining of the cytoplasm and friability or changes in tissue structure. The specificity and sensitivity of antibody binding were also evaluated. The values obtained for each parameter were statistically analyzed with Student t test. Our results show that the methods of CT and TA did not alter histological features as the pattern of staining, and tissue changes were detected. Immunohistochemical positivity was similar for both methods. There was no statistical difference between TC and TA. Our results suggest that implementation of the TA did not alter the histological and immunohistochemical properties and could be a useful method for morphological analysis.

Procesamientos histológicos convencional y en microondas: comparación histológica, histoquímica e inmunohistoquímica / Conventional and microwave histological processing: a histological, histochemical and inmunohistochemical comparison

El horno microondas (HM) fue introducido en Anatomía Patológica en los años 80, siendo utilizado en varios procesos dentro del laboratorio. Se realizó la comparación de algunos parámetros histológicos, histoquímicos e inmunohistoquímicos en muestras de tejido normal, procesados paralelamente de manera convencional y en HM. Se seleccionaron muestras en duplicado de diversos tejidos; se procesaron convencionalmente (PC) en un procesador automático y en HM utilizando un protocolo estandarizado previamente. Se realizaron tinciones histológicas e histoquímicas (H-E, PAS y Azul Alcián) e inmunohistoquímicas (CD45, CD3, CD20 Citoqueratinas AE1/AE3, 5/18, 20, S-100, Receptores de Estrógeno y Progesterona). Las técnicas se escogieron según tipo de tejido. Se evaluó la calidad de los preparados (tinción nuclear, tinción citoplasmática y calidad general), la intensidad de las tinciones histológicas, histoquímicas e inmunohistoquímica de marcadores escogidos. El HM posibilitó la entrega de la lámina histológica en un tiempo mucho menor que el PC, disminuyendo el tiempo de procesamiento de 12 a 1 hora. Se observó una contracción mayor en las muestras procesadas en HM que en sus pares procesadas convencionalmente: tonsila palatina (54,8 por ciento v/s 46,6 por ciento), intestino grueso (33,3 por ciento v/s 22,2 por ciento), piel (24,1 por ciento v/s 13,7 por ciento) y mama (15,1 por ciento v/s 26,3 por ciento). La calidad del corte histológico fue mayor en las muestras PC, observando en los tejidos HM una tinción menos homogénea, con agrietamientos y desprendimientos más notorios, siendo igualmente apropiadas para el diagnóstico histológico. En cuanto a las tinciones histoquímicas, no se observaron cambios significativos. Se observó una mayor intensidad de tinción inmunohistoquímica de proteína S-100 y citoqueratina AE1/AE3 en piel. Se concluyó que el HM convencional puede ser utilizado en el procesamiento de biopsias sin inconvenientes para el diagnóstico...

The microwave oven (MO) was introduced in Pathology practice in the eighties and has been used in several processes within the laboratory. It was achieved a comparison between conventional and microwave processing. Histological, histochemical and inmunohistochemical parameters were observed. Samples of four kinds of tissues were taken in duplicate, and were processed on an automatic processor and into a microwave oven using a previous used protocol. H-E, PAS and Alcian Blue stains ware used in addition to inmunohistochemicals stains (CD45, CD3, CD20, Keratins AE1/AE3, 5/18 and 20, S-100 protein and estrogens and progesterone receptors). Techniques were chosen according to the tissue. The slides were evaluated for two blind professionals, whom considered: nuclear and cytoplasm stain, specificity and intensity of histochemical and inmunohistochemical stains. MO made possible a quick delivery of the slides, shorting the time from 12 to 1 hour. Shrinking was observed to be higher in MO process than conventional process: tonsils (54.8 percent v/s 46.6 percent), intestine (33.3 percent v/s 22.2 percent), skin (24.1 percent v/s 13.7 percent) y breast (15.1 percent v/s 26.3 percent). Qualification was found lightly higher on conventional processing. No changes were observed on histochemicals stains. Higher intensity of inmunostains was observed just in AE1/AE3 and S100 protein. It was concluded that MO can be used without inconveniences in the Pathology Laboratory, allowing a rapid diagnose of biopsy samples.