Susceptibilidad in vitro a antifúngicos de especies de Cándida / In vitro antifungal susceptibility of Candida spp

Resumen Objetivo. Analizar la susceptibilidad in vitro de aislamientos de Candida spp. provenientes de onicomicosis obtenidos entre 2016 y 2019, para contribuir con el conocimiento sobre la necesidad o no de realizar pruebas de susceptibilidad a los microorganismos aislados antes de prescribir el tratamiento. Métodos. El estudio consistió en identificar 23 aislamientos de Candida spp. utilizando el sistema automatizado Vitek2® (bioMérieux, Francia). Se determinó la susceptibilidad in vitro de estos aislamientos ante dos antifúngicos tópicos (amorolfina y ciclopirox) y dos antifúngicos sistémicos (fluconazol e itraconazol) por el método de microdilución en caldo M27-A3 del Instituto Estándares para el Laboratorio Clínico (CLSI por sus siglas en inglés) de los Estados Unidos de América. Resultados. La mayoría de los aislamientos correspondieron a Candida parapsilosis (34,8 %), seguido por C. albicans (30,3 %), C. guilliermondii (17,4 %), C. tropicalis (8,7 %), C. dubliniensis (4,4 %) y C. krusei (4,4 %). No se encontraron diferencias estadísticamente significativas entre las CIMs de los diferentes antifúngicos y en promedio hubo susceptibilidad para todos los antifúngicos analizados. Sin embargo, para fluconazol se encontró un aislamiento con CIM alta de C. guilliermondii y un aislamiento resistente de C. parapsilosis. Conclusiones. Las directrices internacionales recomiendan pruebas de susceptibilidad para Candida spp. de hemocultivos o tejidos tras infecciones sistémicas. En todas las demás candidiasis se identifica la especie y se revisan sus patrones de susceptibilidad en la literatura. Por lo tanto, es de importancia conocer que aislamientos de onicomicosis de Candida no-albicans, especialmente de C. guilliermondii y C. parapsilosis, presentan una susceptibilidad disminuida a ciertos antifúngicos que se utilizan como tratamiento, por lo que se recomienda realizar pruebas de susceptibilidad en caso de no tener una buena respuesta al tratamiento en casos de onicomicosis por estas levaduras.

Abstract Aim. The purpose of this investigation was to determine the in vitro susceptibility patterns of Candida spp. isolated from onychomycosis, in order to contribute with strategies for optimal clinical laboratory management of patients with onychomycosis infected with these yeasts. Methods . A total of 23 isolates of Candida spp. were identified with the automatized system Vitek®2 (system bioMérieux, France). In vitro susceptibility patterns were evaluated with two topic antifungals (amorolfine and ciclopirox) and two systemic antifungals (fluconazole and itraconazole) using the Clinical Laboratory and Standards Institute (CLSI) broth microdilution M27-A3 guidelines. Results . Most of the isolates were identified as Candida parapsilosis (34,8 %), followed by C. albicans (30,3 %), C. guilliermondii (17,4 %), C. tropicalis (8,7 %), C. dubliniensis (4,4 %) and C. krusei (4,4 %). There were no statistically significant differences among the MICs of the antifungals tested. However, there was one isolate of C. guilliermondii with high MIC for fluconazole and one fluconazole resistant isolate of C. parapsilosis. Conclusions. Susceptibility tests are only recommended internationally for Candida spp. isolated from blood stream or tissue in systemic infections. In every other candidiasis there is only a species identification, while its susceptibility pattern for treatment is reviewed in literature. Therefore, it is important to report that Candida no-albicans isolates from onychomycosis, especially C. guilliermondii and C. parapsilosis, have a reduced susceptibility to some antifungals commonly used for treatment. According to the obtained in vitro results, we recommend performing antifungal susceptibility testing in those cases of onychomycosis caused by Candida spp. no responsive to treatment.

Comparison of the ATB® Fungus 2 with the AFST-EUCAST for in vitro susceptibility testing of Candida spp

The increase of diseases caused by Candida spp., and the treatment failures, has underscored the need for testing the susceptibilities to antifungal agents. The commercial panel ATB® Fungus 2 was compared with the reference testing method of the European Subcommittee on Antifungal Susceptibility Testing of the Committee on Antimicrobial Susceptibility Testing (AFST-EUCAST) for the evaluation of the susceptibility of isolates of Candida spp. to three agents. The percentage of agreement was calculated based on the minimum inhibitory concentrations. There was a high correlation for AMB (100% қ = 1.0 Bhapkar coefficient p = 1.0); while it was lower with azoles (85%, қ = 0.41, p = Bhapkar coefficient 0.02 and 83.0%, қ = 0.15, Bhapkar coefficient p = 0.0006, respectively). The ATB® Fungus 2 and AFST-EUCAST are fully comparable methods for testing the susceptibility to AMB and to lesser extend comparable for ITR and FCA.

El aumento de infecciones por Candida spp. y de las fallas en los tratamientos, suscitan la necesidad de pruebas de susceptibilidad. Se comparó la marca comercial ATB® Fungus 2 con la técnica estándar del Subcomité para las Pruebas de Sensibilidad Antifúngica de la Unión Europea, de la Sociedad de Microbiología Clínica y Enfermedades Infecciosas (AFST-EUCAST) para evaluar la susceptibilidad de aislamientos de Candida spp. a tres antifúngicos. Con base en las concentraciones inhibitorias mínimas se calculó el porcentaje de acuerdo. La concordancia para anfotericina B (AMB) fue alta (100% қ = 1.0, Coeficiente de Bhapkarp = 1.0); para itraconazol (ITR) y fluconazol (FCA) fue inferior (85% қ = 0.41, Coeficiente de Bhapkarp =0.02 y 83.0 %, қ = 0.15, Coeficiente de Bhapkarp = 0.0006, respectivamente). Por lo tanto, ambas técnicas son comparables para la evaluación de la susceptibilidad a AMB; con los azoles el porcentaje de acuerdo es menor.

Candidiasis vulvovaginal en pacientes ambulatorias: Frecuencia y susceptibilidad a los antifungicos / Vulvovaginal candidiasis in outpatients: Frequency and susceptibility to antifungals

El objetivo de este trabajo fue conocer la frecuencia y susceptibilidad a los antifúngicos de las especies de Candida spp aisladas en pacientes con candidiasis vulvovaginal (CVV) provenientes de la clínica El Ávila en el período enero 2011- abril 2012. Se realizó un estudio retrospectivo, de corte transversal y descriptivo de los archivos electrónicos y físicos de las muestras de secreciones vaginales. La evaluación estadística se realizó mediante medidas de tendencia central, para los antifúngicos fluconazol y anfotericina B se calcularon: MG, MODA, CMI50 Y CMI90. De 2273 secreciones vaginales 79 fueron positivas para Candida spp: 69 (87,3%) C. albicans, 5 (6%) C. glabrata, 3 (4%) C. parapsilosis y 2 (3%) C. tropicalis. Todas las cepas de Candida spp aisladas fueron sensibles a voriconazol y anfotericina B. Se detectaron 1 (1,5%) C. albicans resistente a fluconazol; 5 (100%) C glabrata, 1 (1,5%) C.albicans y 1 (1,5%) C. parapsilosis se encontraron en el rango susceptible dosis dependiente (SDD). Se observó 60% de concordancia del examen directo con el cultivo, facilitando el diagnóstico micológico y se evidenció baja sospecha del diagnóstico clínico de CVV en todas las consultas, Se concluye que C. albicans es el agente principal de CVV, Observándose patrones de resistencia a fluconazol.

The purpose of this research was to know the Candida spp frequency and susceptibility to antifungals in patients diagnosed with vulvovaginal candidiasis (VVC) coming from El Ávila clinic during the period between January 2011-April 2012. A retrospective study of a transversal and descriptive cut was conducted for all existing electronic and physical files on vaginal discharse isolates. Statistical evaluation was achieved using central measures. fluconazole and amphotericin B statical calculations considered: MG, MODA, MIC50 and MIC90. Out of 2,273 vaginal discharge isolates, 79 were tested positive for Candida spp: 69 C. albicans (87.3%), 5 C. glabrata, (6%) 3 C. parapsilosis, (4%) and 2 C. tropicalis (3%). All isolated Candida spp strains were sensitive to voriconazole and amphotericin B. 1 C. albicans isolate (1.5%) was found resistant to fluconazole drug; 5 C. glabrata isolates (100%), 1 C. albicans (1.5%) and 1 C. parapsilosis isolate (1.5%) were found within the susceptibility ­ dose dependent range (SDD). susceptible. 60% of concordance was observed between direct testing and cultures, facilitating mycological diagnosis and evidenced low suspicion for clinical diagnosed VVC for all medical appointments registered. It is concluded that C. albicans is the main agent of VVC, Observing resistance patterns to fluconazole.

Sinergismo in vitro entre hidrazonas, ajoeno y posaconazol sobre aislados de Cryptococcus spp / In vitro synergisms among hydrazones, ajoeno and posaconazole against Cryptococcus spp

El objetivo de este trabajo fue estudiar la susceptibilidad in vitro de aislados de Cryptocococus spp con una nueva clase de antifúngicos, hidrazonas esteroidales y comparar su actividad antifúngica en combinación con ajoeno y posaconazol contra aislados de Cryptococcus spp. Se utilizaron tres aislados del género Cryptococcus 42794, 4050 y 44192 y se evaluaron su sensibilidad y efectos sinérgicos con las hidrazonas esteroidales, ajoeno y posaconazol, según el documento M27-A2 del CLSI. Se incluyeron las cepas Candida albicans (ATCC 90028) y Candida parapsilosis (ATCC 22019) como controles. Se observó con las hidrazonas (H1, H2, H3, H4) un efecto plateau a partir de 10 µM (CMI). Sin embargo, con la H4 se obtuvo bajo porcentaje de inhibición del crecimiento. Con el ajoeno, se obtuvieron valores de CMI de 25 y 50 µM. El posaconazol mostró altos valores de inhibición y un valor de CMI de 6 µM para 42794 y 44192 y un CMI de 20 µM para el aislado 4050. Se obtuvieron efectos sinérgicos al combinar posaconazol con ajoeno, ajoeno con hidrazona 3 y posaconazol con hidrazona 3. Los valores de concentración inhibitoria fraccional fueron de 0,24; 0,16 y 0,09 respectivamente, indicando un marcado efecto sinérgico. Se obtuvieron efectos sinérgicos importantes entre el posaconazol con ajoeno, ajoeno con hidrazona 3 y posaconazol con hidrazona 3, lo cual sería muy útil para futuros estudios clínicos.

The aim of this study was to assess the in vitro susceptibility to novel antifungal compounds, the steroidal hydrazones, and to compare their antifungal activity and synergistic effects with other compounds, such as ajoeno and posaconazole on Cryptocococus spp isolates. Three Cryptococcus strains were used for this study (42794, 4050 and 44192) and their antifungal sensitivity and synergistic effects with ajoeno and posaconazole were evaluated according to the CLSI protocol number M27-A2. Candida albicans (ATCC 90028) and Candida parapsilosis (ATCC 22019) were used as controls. A plateau effect with hydrazones (H1, H2, H3, H4) was observed after 10 µM (CMI). However, with H4 only a mild inhibition on the growth was obtained. Combining hydrazone and ajoeno, CMI values between 25 and 50 µM were obtained. The highest inhibitions values were obtained with posaconazole and a CMI value of 6 µM for the strains 42794 and 44192, and a CMI value of 20 µM for the strain 4050. Synergy was observed combining posaconazole with ajoeno, ajoeno with hydrazone 3 and posaconazole with hydrazone 3. Fractional inhibitory concentrations were 0.24, 0.16 and 0.09 respectively, which might indicate a synergistic effect. Important synergistic effects were obtained with posaconazole and ajoeno, ajoeno and hydrazone 3 and posaconazole with hydrazone 3, which would be very useful for clinical trials in the future.

Susceptibilidad in vitro a anidulafungina en 100 cepas de especies de Candida aisladas previo a la introducción de esta equinocandina en Chile / In vitro andulafungin susceptibility of 100 of Candida strains obtained previously to the introduction of this echinocandin in Chile

Fungi, particularly yeasts, have become important opportunistic pathogens that can be resistant to antifungal agents or develop resistance. To address this problem, new molecules such as echinocandins, have been developed. Susceptibility to anidulafungin was studied in yeasts isolated previous to the introduction of this drug in Chile. One hundred strains of different yeast species isolated from invasive fungal infections during 2007 and 2008 were studied. Susceptibility testing of anidulafungin was performed by broth microdilution according to CLSI. All strains were susceptible to anidulafungin. MIC50 and MIC90 were 0.125 µg/mL and 1 µg/mL, respectively. Compared to other yeasts, C. parapsilosis showed a slight increase in the MICs for anidulafungin (MIC50, 1 µg/mL, MIC90, 2 µg/mL), but remained within the susceptible range. Both, fluconazole resistant (8) and dose dependant susceptible strains (16) were susceptible to anidulafungin. In vitro, this echinocandin appears to be an effective therapeutic alternative.

Los hongos, especialmente las levaduras, se han transformado en importantes patógenos oportunistas y algunos de ellos tienen o desarrollan resistencia a los antifúngicos. Para enfrentar esta problemática se han desarrollado nuevas moléculas, como las equinocandinas. Este trabajo evaluó la susceptibilidad in vitro a anidula-fungina en levaduras obtenidas previo a la incorporación de este antifúngico en Chile. Para ello, se seleccionaron 100 cepas de diversas especies aisladas de enfermedad fúngica invasora durante los años 2007 y 2008 en Chile, a las cuales se les midió la susceptibilidad in vitro por micro-dilución en caldo para anidulafungina según CLSI. Todas las cepas fueron sensibles a anidulafungina con CIM50 y CIM90 de 0,125 µg/mL y 1 µg/mL, respectivamente. Se detectó un ligero aumento de las CIM en C. parapsilosis respecto a las otras levaduras (CIM50 de 1 µg/mL y CIM90 de 2 µg/mL) considerándose estos valores en el rango de sensibilidad. La correlación de la susceptibilidad frente a fluconazol evidenció que cepas resistentes (n: 8) y sensibles dosis dependientes (n: 16) fueron sensibles a anidulafungina. Esta equinocandina aparece, in vitro, como una alternativa terapeutica efectiva frente a las levaduras aisladas en nuestros pacientes.

Evaluación mediante tres técnicas de susceptibilidad a fluconazol en especies de Candida aisladas en pacientes con infecciones invasoras: Bogotá - Colombia / Fluconazole susceptibility of invasive Candida sp isolates as determined by three methods: Bogotá - Colombia

The frequency of invasive mycosis caused by Candida sp has increased significantly in immuno-compromised patients and in those under medical/surgical treatment; along with it, the use of azoles has fostered resistance. Objective: To compare in vitro susceptibility techniques, susceptibility to fluconazol was determined by the M27-A2 method of CLSI (Clinical Laboratory Standard Institute), the disk diffusion technique in 90 invasive Candida sp isolated species (49 C albicans, 30 C. tropicalis, 5 C parapsilosis, 4 C . guilliermondii and 2 C. lusitaniae) and the E-test in 16 isolated. Results: Over 90 percent of strains were susceptible to fluconazol. A straight correlation between disk-diffusion technique and the E-test was observed regarding the reference method (0.944 and 0.938, respectively). Conclusión: In our institution the use of fluconazol for invasive candidiasis is recommended, as well as the routine use of the disk-diffusion or E-test techniques in high complex hospitals in Colombia.

La frecuencia de micosis invasoras causadas por Candida sp en pacientes inmunocomprometidos o con tratamientos médico-quirúrgicos ha aumentado y con ello, el uso de azoles, facilitando la aparición de resistencia. Objetivo: Comparar tres métodos de detección de susceptibilidad in vitro a fluconazol: el método de referencia M27-A2 del CLSI (Clinical Laboratory Standard Institute), técnica de difusión en disco a 90 aislados obtenidos en procesos infecciosos invasores (49 C. albicans; 30 C. tropicalis; 5 C. parapsilosis; 4 C. guilliermondii y 2 C. lusitaniaé) y la epsilometría (E-test®) en 16 aislados. Resultados: La susceptibilidad fue mayor a 90 por ciento. Se encontró un buen porcentaje de concordancia entre las técnicas de difusión de disco y E-test® con respecto al método de referencia (0,944 y 0,938, respectivamente). Conclusión: En nuestra institución se considera de elección fluconazol para tratar infecciones micóticas invasoras y recomendamos las técnica de difusión en disco o E-test® para determinar la susceptibilidad en la rutina en hospitales de alta complejidad en Colombia.

Actualización en pruebas de susceptibilidad antifúngica / An update on antifungal susceptibility testing

Due to increasing of invasive fungal infections and emergeney of antifungal drugs resistant fungi, standardized methods of antifungal susceptibility testing (AST) have been developed. The Clinical Laboratory Standards Instutute (CLSI) and the European for Committee Antimicrobial Susceptibility Testing (EUCAST) have guidelines for susceptibility of yeasts by broth microdilution (M27-A2 and E. Dis. 7.1 documents, respectively). Both are equivalent, although they present methodological and interpretative breakpoints differences. In addition, the CLSI have the M38-A (for filamentous fungi) and M44-A (disk diffusion) documents, whereas EUCAST is developing a document for Aspergillus spp. Furthermore, commercial methods are available that display good correlation with the methods of reference such as E-test®, Sensititre® and Vitek2®. The interpretation of the results must be careful because the determination of the minimum inhibitory concentration (CIM) is difficult for fungi, there are host factors involved and not always there is a correlation between MIC and clinical outeome. Due to these methods are laborious and require trained personnel, to ask for AST to a reference laboratory is recommendable.

Debido al aumento en las infecciones fúngicas invasores y a la emergencia de hongos resistentes a los antifúngicos, ha sido necesario desarrollar métodos estandarizados de susceptibilidad antifúngica. El Clinical Laboratory Standards Instutute (CLSI) y el European Committee for Antimicrobial Susceptibility Testing (EUCAST) han elaborado guías para susceptibilidad de levaduras por microdilución en caldo (documentos M27-A2 y E. Dis. 7.1, respectivamente). Ambos son equivalentes, aunque presentan diferencias metodológicas y en sus puntos de corte. El CLSI ha desarrollado los documentos M38-A (hongos filamentosos) y M44-A (difusión en disco), mientras que EUCAST trabaja en un documento para Aspergillus sp. Por otra parte, existen métodos comerciales que presentan buena correlación con los métodos de referencia como E-test®, Sensititre® y Vitek2®. La interpretación de los resultados debe ser cuidadosa pues la determinación de la concentración inhibitoria mínima (CIM) es muy dificultosa para hongos, hay factores del hospedero involucrados y no siempre hay una correlación entre la CIM y la respuesta a tratamiento. Como estas técnicas, en general, son laboriosas y requieren de personal entrenado, es recomendable derivar los estudios de susceptibilidad a un laboratorio de referencia.