Pre-analytical variables evaluation in laboratory tests of patients attended at the Vitória da Conquista Central laboratory, Bahia, Brazil / Avaliação de variáveis pré-analíticas em exames laboratoriais de pacientes atendidos no Laboratório Central de Vitória da Conquista, Bahia, Brasil

ABSTRACT Introduction: Laboratory tests are intended to provide information necessary to clarify diagnoses or specific situations that cannot be elucidated by other means. Laboratory analyses are subject to several interferences. Even healthy individuals could suffer variations in laboratory tests due to biological factors, which may lead to misinterpretation of the results. Objective: Assess the pre-analytical variables in patients' laboratory tests at the Vitória da Conquista Central Laboratory, Bahia, Brazil. Material and method: This is a cross-sectional study with a descriptive approach and the use of a questionnaire as a research instrument. Data were collected through individual interviews, carried out at the laboratory. Results: The sample consisted of 425 patients, with female predominance (76.5%). Regarding patient instructions for laboratory tests, 94.6% had not been given any previous guidance, and 68.5% used some kind of medication, which could produce alterations in the exams. The use of the antihypertensive agents captopril, enalapril, hydrochlorothiazide or propranolol was associated with increased serum urea [odds ratio (OR) = 7.2, confidence interval (CI) = 95%, 1.87-27.58; p = 0.002], and smoking was associated with increased red blood cells count (OR = 3.7, CI = 95%, 0.86-15.75; p = 0.02). Conclusion: The findings indicate that pre-analytical variables remain an important focus for attention to the clinical laboratory. The correct data collection of patients' conditions is critical to support the post-analytical phase with useful information for the production of reliable exams and serve as a useful interpretation to diagnosis.

RESUMEN Introducción: Las pruebas de laboratorio tienen como objetivo proporcionar información necesaria a la aclaración de diagnósticos o situaciones específicas que no se pueden esclarecer por otros modos. Los análisis de laboratorio están sujetos a diversos interferentes. Incluso individuos sanos pueden presentar variaciones en las pruebas derivadas de factores que pueden crear equivocaciones en la interpretación de los resultados. Objetivo: Evaluar la influencia de variables preanalíticas en pruebas de laboratorio de pacientes atendidos en el Laboratório Central de Vitória da Conquista, Bahía, Brasil. Material y método: Estudio transversal con enfoque descriptivo y empleo de cuestionario como herramienta de investigación. Los datos fueron recogidos mediante entrevistas individuales, realizadas en el establecimiento investigado. Resultados: La muestra se compuso por 425 pacientes, con predominio de mujeres (76,5%). En cuanto a instrucciones para realización de las pruebas, el 94,6% de los pacientes no recibieron ningún tipo de orientación previa y el 68,5% utilizaban algún tipo de medicamento que puede producir alteraciones en pruebas. El uso de los antihipertensivos captopril, enalapril, hidroclorotiazida o propranolol estuvo asociado con el aumento de la urea sérica [oportunidad relativa (OR) = 7,2; intervalo de confianza (IC) = 95%, 1,87-27,58; p = 0,002]. El tabaquismo se ha asociado al aumento de eritrocitos (OR = 3,7; IC = 95%, 0,86-15,75; p = 0,02). Conclusión: Los hallazgos clínicos indican que variables preanalíticas son importante causa de atención para el laboratorio clínico. La correcta recogida de datos acerca de las condiciones de los pacientes es esencial para instrumentar la fase postanalítica con información relevante para la realización de pruebas fiables y que sean útiles para el proceso del diagnóstico.

RESUMO Introdução: Os exames laboratoriais têm como objetivo fornecer informações necessárias para o esclarecimento de diagnósticos ou situações específicas não passíveis de serem elucidadas por outros meios. As análises laboratoriais estão sujeitas a diversos interferentes. Mesmo indivíduos saudáveis podem apresentar variações nos exames decorrentes de fatores que podem gerar equívocos na interpretação dos resultados. Objetivos: Avaliar a influência de variáveis pré-analíticas em exames laboratoriais de pacientes atendidos no Laboratório Central do município de Vitória da Conquista, Bahia, Brasil. Material e método: Trata-se de um corte transversal com abordagem descritiva e utilização de questionário como instrumento de pesquisa. Os dados foram coletados por meio de entrevistas individuais, realizadas na instituição pesquisada. Resultados: A amostra foi composta por 425 pacientes, com predomínio de indivíduos do sexo feminino (76,5%). No que se refere a instruções para realização dos exames laboratoriais, 94,6% dos pacientes não receberam nenhum tipo de orientação prévia e 68,5% utilizavam algum tipo de medicamento que pode produzir alterações em exames. O uso dos anti-hipertensivos captopril, enalapril, hidroclorotiazida ou propranolol esteve associado ao aumento da ureia sérica [odds ratio (OR) = 7,2; intervalo de confiança (IC) = 95%, 1,87-27,58; p = 0,002]. O tabagismo associou-se ao aumento de eritrócitos (OR = 3,7; IC = 95%, 0,86-15,75; p = 0,02). Conclusão: Os achados indicam que variáveis pré-analíticas são importante fonte de atenção para o laboratório clínico. A correta coleta de dados acerca das condições dos pacientes é fundamental para instrumentar a fase pós-analítica com informações relevantes para a produção de exames fidedignos e que sejam úteis ao processo do diagnóstico.

Variables pre-analíticas que afectan las concentraciones de homocisteína: aplicación para biobancos con fines de investigación / Pre-analytical variables that affect homocysteine concentrations: applications for research biobanks

Objetivo: El presente estudio evaluó el impacto de variables pre-analíticas sobre las concentraciones séricas de la homocisteína y su posible aplicación en biobancos con fines de investigación. Metodología: En diez adultos voluntarios auto declarados sanos, se tomaron muestras de sangre periférica bajo diferentes condiciones de ayuno, posición de toma de la muestra (supino versus sentada) y diferentes intervalos de tiempo entre la toma y la separación definitiva de componentes. Todas las alícuotas fueron almacenadas a - 800C en el biobanco hasta el momento de ser procesadas. La medición de homocisteína se hizo por duplicado en Immulite® 2000. Se realizó análisis de concordancia por medio de coeficiente de Lin (σ) y MANOVA. Resultados: La medición de homocisteína es altamente reproducible (σ=0.908, IC95% 0.861 a 0.955), sin que el ayuno o el tiempo de centrifugación de la muestra afecte su concentración. Sin embargo, la posición al momento de la toma de muestra, implica una reducción media de 14.2% (IC95% 8.4% a 20.0%) en la concentración de homocisteína en posición decúbito supino versus la toma en posición sentado. Conclusión: La homocisteína es un biomarcador estable, sin que su valor se vea alterado por variables pre-analíticas como los tiempos entre toma de muestra, centrifugación y separación de componentes (almacenamiento temporal a 4°C hasta 24 horas). Sin embargo, la postura del participante al momento de la toma de muestra produce una variabilidad significativa. Estos hallazgos reiteran el papel de un biobanco en la estandarización de los procesos de toma, manipulación, almacenamiento y gestión con criterios de excelencia. [Serrano NC, Páez MC, Bautista PK, Díaz-Martínez LA, Guío E. Variables pre-analíticas que afectan las concentraciones de homocisteína: Aplicación para biobancos con fines de investigación.

Objective: This study evaluated the impact of pre-analytical variables on serum concentrations of homocysteine, and its possible applications in biobanks for research purposes. Methods: Peripheral blood samples from ten self-reported healthy volunteers were obtained under different conditions of fasting and body position (supine and sitting). Blood samples were temporarily stored for different time intervals between its collection and its centrifugation. All aliquots were stored at -80ºC in our biobank until processing. Duplicate Homocysteine measurements were performed in Immulite® 2000. A concordance analysis was performed using Lin coefficient (σ) and MANOVA. Results: The measurement of homocysteine is highly reproducible (σ = 0.908, 95% CI 0861-0955) and fasting or time before centrifugation does not affect its concentration. However, we found an average reduction of 14.2% (95% CI 8.4% to 20.0%) for the Hcy levels in samples obtained when the subjects were in supine position as compared to the levels in sitting position. Conclusion: Homocysteine levels are stable, when the blood samples remain without centrifugation, up to 24 hours at 4ºC. However, body position of the participant at the time of sampling can affect Hcy levels. These findings highlight the role of biobanks in standardizing, handling and storing biological samples with excellence criteria. [Serrano NC, Páez MC, Bautista PK, Díaz-Martínez LA, Guío E. Pre-analytical variables that affect homocysteine concentrations: Applications for research biobanks.

Variables pre-analíticas que afectan la cuantificación sérica de Proteína-C-Reactiva e IL-6 en primigestantes preeclámpticas y controles sanos / Pre-analytical variables involving the quantification of serum C-reactive protein and IL-6 in preeclamptic primiparas and healthy control

Introducción: La Preeclampsia está asociada con un incremento de la respuesta inflamatoria; dos moléculas asociadas a este proceso son la PCR e IL-6. En la detección de los niveles séricos de estas moléculas, existen factores preanalíticos que pueden modificar su concentración. El presente estudio, busca establecer si existe variabilidad en niveles de IL-6 y PCR según los tiempos de separación y temperatura de almacenamiento, en muestras de primigestantes preeclampticas y controles sanos. Metodología: Se extrajo sangre periférica, usando dos tubos (A y B) de 7 ml, sin anticoagulante. El tubo A se refrigeró a 4°C por siete días, al termino se centrifugó y almaceno a -70°C. El tubo B fue centrifugado inmediatamente y fraccionado, la primera fracción (B1) se almacenó a -70°C (tubo de referencia), mientras que las demás se refrigeraron a 4°C y se congelaron a -70°C al cabo de 15 días, uno, dos y tres meses. Finalmente se cuantificaron los niveles séricos de IL-6 y PCR. Resultados: Se cuantificaron 75 muestras para PCR y 58 para IL-6. Se encontraron diferencias en las concentraciones de PCR dadas por la demora en la centrifugación tras siete días de almacenamiento a 4 °C. En cuanto a la IL6, no se observaron diferencias significativas. Conclusión: Las concentraciones de PCR e IL-6, pueden variar por la exposición a variables preanalíticas. En este estudio corroboramos que los niveles séricos de PCR se alteran significativamente si la muestra es refrigerada sin centrifugarse; para las demás variables analizadas no se evidenció cambio en la cuantificación. Salud UIS 2012; 44 (3): 25-30.

Introduction: Preeclampsia is associated with an increase in the inflammatory response; two molecules associated with this process are the CRP and IL-6. In the detection of serum levels of these molecules, there are preanalytical factors that can modify its concentration. This study seeks to establish whether there is variability in levels of IL-6 and CRP according to the times of separation and storage temperature on samples of preeclamptic primiparas and healthy controls. Methods: Peripheral blood was drawn using two tubes (A and B) of 7 ml without anticoagulant. Tube A was cooled to 4 °C for 7 days, at the end was centrifuged and stored at -70 °C. Tube B was centrifuged immediately and fractionated, the first fraction (B1) was stored at -70 ° C (reference tube), while others were refrigerated at 4 ° C and frozen at -70 ° C after 15 days, one, two and three months. Finally, we quantified the serum levels of IL-6 and CRP. Results: 75 samples were quantified for CRP and 58 for IL-6. Differences in CRP concentrations found given by the delay of centrifugation after 7 days of storage at 4 °C. With regarding to IL 6, there were no significant differences. Conclusion: CRP and IL-6, may vary by exposure to preanalytical variables. In this study corroborate that serum CRP levels are significantly altered if the sample is centrifuged without be chilled; for the other variables analyzed showed no change in the quantification. Salud UIS 2012; 44 (3): 25-30.

Influencia de las variables preanalíticas en la determinación de proteína S / Influence of preanalytical variables in S protein determination

La proteína S (PS) regula el sistema de coagulación mostrando actividad de cofactor de la Proteína C activada (PCa) con la cual forma un complejo equimolecular. En presencia de iones calcio este complejo inactiva por proteólisis los factores V y VIII activados por trombina. La proteína S plasmática circula 40% libre (fracción que presenta actividad de cofactor de la PCa) y 60% unida al C4-BP (proteína ligante de la fracción C4 del complemento). El objetivo fue comparar el dosaje de PS realizado por método coagulable e inmunoturbidimétrico e investigar cómo las variables preanalíticas afectan los niveles de PS determinados. Se obtuvieron los siguientes resultados: método coagulable: CV intra ensayo: (n=20): 4%, CV interensayo (n=20, 3 días): 3,4%. Método inmunoturbidimétrico: CV intraensayo (n=20): 3,7%.CV Inter. ensayo (n=20,3 días): 4,5%. Existe buena correlación (R2=0,94) entre ambos métodos, cuando la calibración por el método coagulable se realiza en la misma corrida analítica que las muestras. Cuando se realizó el estudio de Bland y Altman los dos métodos mostraron ser comparables en todos los niveles de PS estudiados. No se observaron diferencias significativas entre las muestras determinadas frescas y conservadas a -20 y -80 °C descongeladas solo una vez.

Protein S has an essential anticoagulant function acting as activated Protein C cofactor and forming an equimolecular complex with it. In the presence of calcium this complex regulates the coagulation process inactivating thrombin activated factors V and VIII by proteolysis. In plasma there are two different forms: a) free Protein S which acts as the cofactor of activated protein C (representing about 40% of total Protein S) and b) C4-BP(C4 binding protein) bound protein S which exhibits no activity as cofactor of activated Protein C (representing about 60% of total PS). The objetive was to compare the PS dosage determination by two methods: immunoturbidimetric and clotting, and to investigate how pre-analytical variables affect the results. The following results were obtained: Clotting method: CV intra assay: (n=20): 4%, CV interassay (n=20, 3 days): 3.4%; immunoturbidimetric method CV intra assay (n=20): 3.7%: CV inter assay (n=20.3 days): 4.5%. There is a good correlation (R2 = 0.94) between both methods; when the clotting method is calibrated in batch with the samples. There is significant difference between fresh and frozen ( -20 °C and -80 °C) samples when the latter have been desfrozen only once.