Evaluación de las técnicas de capacitación espermática y su efecto en la fragmentación del ADN / Assesment of sperm capacitation techniques and their effect on DNA fragmentation

Objetivo: evaluar el efecto de las técnicas de capacitación espermática en la fragmentación del ADN. Materiales y métodos: estudio experimental en el cual se describió el efecto de las técnicas de capacitación espermática swim up y gradientes de densidad de Isolate en la fragmentación del ADN. Se utilizaron las muestras de 41 pacientes remitidos a espermograma a la Unidad de Fertilidad del Tolima (Unifertil). Requisitos: 1) abstinencia sexual de 3 a 5 días, 2) no haber consumido medicamentos como antibióticos o antiparasitarios, 3) obtención de la muestra por masturbación, y 4) no presentar procesos virales o febriles. Después de realizar la primera evaluación de las muestras dentro de una hora posterior a su obtención se incluyeron aquellas que habían sido recolectadas completamente, que tenían una concentración mínima de 2 millones de espermatozoides/ml, y que no tenían contaminación con sangre. Se evaluaron la concentración, la movilidad, la morfología y la fragmentación del ADN de los espermatozoides, midiendo la longitud de los cometas resultantes del ensayo. Para el análisis estadístico se utilizaron análisis de varianza (ANOVA) y el coeficiente de correlación de Pearson, teniendo un valor de p < 0,05 como significativo estadísticamente. Resultados: la media de edad de los pacientes fue 35,1 ± 7,9 años. Se encontró que las técnicas de capacitación espermática, tanto swim up como gradientes de densidad de Isolate, disminuyen la fragmentación del ADN de los espermatozoides (p < 0,0001). No se encontraron diferencias significativas en cuanto a la fragmentación del ADN entre las dos técnicas de capacitación estudiadas. No se observaron correlaciones significativas entre los niveles de fragmentación del ADN espermático y los diferentes parámetros del espermograma (concentración, movilidad y morfología) (p = 0,9061). El ensayo cometa detectó diferencias en el grado de la fragmentación del ADN de los espermatozoides entre las muestras frescas y capacitadas. Conclusión: la capacitación espermática tanto por swim up como por gradientes de densidad de isolate tiene un efecto positivo al disminuir la fragmentación del ADN de los espermatozoides.

Objective: This study was aimed at evaluating the effect of sperm capacitation techniques on DNA fragmentation. Materials and methods: This was an experimental study which observed and described the effect of two sperm capacitation techniques on DNA fragmentation (i.e. swim up and isolate density gradients). Samples from 41 patients were used; these were sent for spermogram analysis at the Tolima Fertility Unit (Unifertil), taking the following requirements into account: sexual abstinence for 3 to 5 days, not having taken drugs such as antibiotics or antiparasitics, samples obtained by masturbation and not presenting viral or febrile processes. The first evaluation of the samples was made one hour after they had been obtained; those which had been collected completely, which had a minimum 2 million spermatozoid/ml concentration and which were not contaminated by blood were included. Concentration, mobility, morphology and DNA spermatic fragmentation were evaluated by measuring comet length in the comet assay in fresh samples. Analysis of variance (ANOVA) and Pearson’s correlation coefficient were used for statistical analysis (p < 0.05 being statistically significant). Results: It was found that sperm capacitation techniques reduced spermatozoid DNA fragmentation (p < 0.0001). No significant differences were found between the two different capacitation techniques studied regarding DNA fragmentation. No significant correlation was observed between sperm DNA fragmentation levels and spermogram parameters (concentrations, mobility and morphology) (p = 0.9061). The comet assay detected differences regarding the degree of spermatozoid DNA fragmentation between fresh and capacitated samples. Conclusion: Both swim up and isolate density gradient sperm capacitation had a positive effect by reducing spermatozoid DNA fragmentation.

Separación de poblaciones de glóbulos rojos senescentes por gradientes preformados de Percoll / Separation of populations of senescent red blood cells by Percoll performed gradients

Los mecanismos que determinan la senescencia de los eritrocitos han sido extensamente estudiados, sin embargo, no se han logrado conclusiones definitivas debido a la ausencia de una técnica que permita el aislamiento de grupos etáreos bien definidos. Los métodos más comúnmente empleados se basan en el aumento de densidad de los eritrocitos durante el envejecimiento. En este trabajo desarrollamos una técnica para la separación de glóbulos rojos de distintas edades empleando gradientes preformados de Percoll, un polímero sintético con propiedades fisicoquímicas adecuadas para trabajar con células vivas. En las suspensiones eritrocitarias obtenidas se realizaron determinaciones hematológicas, actividades de enzimas antioxidantes y el ensayo de eritrofagocitosis. Los valores de los parámetros hematológicos evaluados fueron significativamente mayores en las suspensiones de glóbulos rojos jóvenes. Las actividades enzimáticas mostraron una disminución de la capacidad antioxidante en las poblaciones de eritrocitos senescentes. Este proceso favorecería la interacción de los hematíes envejecidos con las células fagocíticas, demostrada median­te el ensayo de eritrofagocitosis. Los resultados obtenidos indican que el método de gradientes de Percoll permite una adecuada separación de las suspensiones eritrocitarias de distintas edades, con una eficiencia comparable a la observada en la técnica de centrifugación diferencial considerada de referencia.

The mechanisms that determine the senescence of the erythrocytes have been extensively studied; however. definitive conclusions have not been achieved mainly because of the lack of a technique that allows the isolation of well-defined etarian groups. The methods most commonly used for separating erythrocytes from different ages are based on the increase in density that these cells present during their aging. In the present work we have developed a technique for obtaining red blood cells from different ages using Percoll preformed gradients, a synthetic polymer with adequate physic-chemic properties to work with lives cells. In the erythrocytes suspensions we have made hematological determinations. activities of antioxidants enzymes and the essay of erythrophagocytosis. The values of the hematological parameters were significantly higher in the suspensions of young red blood cells. In the measurements of the enzymatic activity we observed a decrease of the antioxidant capacity in the populations of senescent erythrocytes. This process would promote the interaction between the old erythrocytes and the phagocyte cells, demonstrated by the erythrophagocytosis essay. The results obtained indicate that the method Percoll density gradients allows an appropriate separation of the erythrocytes suspensions of different ages with a comparable efficiency to that observed in the technique differential centrifugation, considered as reference.