Biofilm formation capacity of Salmonella serotypes at different temperature conditions / Capacidade de produção de biofilme por cepas de diferentes sorovares de Salmonella em quatro temperaturas de incubação

Salmonella spp. are one of the most important agents of foodborne disease in several countries, including Brazil. Poultry-derived products are the most common food products, including meat and eggs, involved in outbreaks of human salmonellosis. Salmonella has the capacity to form biofilms on both biotic and abiotic surfaces. The biofilm formation process depends on an interaction among bacterial cells, the attachment surface and environmental conditions. These structures favor bacterial survival in hostile environments, such as slaughterhouses and food processing plants. Biofilms are also a major problem for public health because breakage of these structures can cause the release of pathogenic microorganisms and, consequently, product contamination. The aim of this study was to determine the biofilm production capacity of Salmonella serotypes at four different temperatures of incubation. Salmonella strains belonging to 11 different serotypes, isolated from poultry or from food involved in salmonellosis outbreaks, were selected for this study. Biofilm formation was investigated under different temperature conditions (37°, 28°, 12° and 3°C) using a microtiter plate assay. The tested temperatures are important for the Salmonella life cycle and to the poultry-products process. A total of 92.2% of the analyzed strains were able to produce biofilm on at least one of the tested temperatures. In the testing, 71.6% of the strains produced biofilm at 37°C, 63% at 28°C, 52.3% at 12°C and 39.5% at 3°C, regardless of the serotype. The results indicate that there is a strong influence of temperature on biofilm production, especially for some serotypes, such as S. Enteritidis, S. Hadar and S. Heidelberg. The production of these structures is partially associated with serotype. There were also significant differences within strains of the same serotype, indicating that biofilm production capacity may be strain-dependent.(AU)

Salmonella spp. são um dos mais importantes agentes causadores de doenças transmitidas por alimentos em vários países, inclusive no Brasil. Produtos avícolas e ovos são os principais alimentos envolvidos na transmissão dos sorovares de Salmonella que são responsáveis por surtos de salmonelose em humanos. Salmonella possui a capacidade de formar biofilmes em diversas superfícies. O processo de formação de biofilme depende da interação entre as células bacterianas, a superfície de adesão e as condições do ambiente onde a bactéria se encontra. Estas estruturas favorecem a sobrevivência bacteriana em ambientes hostis, como em matadouros-frigoríficos e em indústrias processadoras de alimentos. Biofilmes são um grande problema em saúde pública, pois a ruptura destas estruturas pode provocar a liberação de microrganismos patogênicos e, consequentemente, a contaminação dos produtos. O objetivo deste estudo foi avaliar a capacidade de produção de biofilme por diferentes sorovares de Salmonella submetidos a quatro temperaturas de incubação. Cepas de Salmonella de 11 sorovares foram selecionadas. A produção de biofilme foi avaliada através do método de incubação em microplacas de poliestireno incubadas a 37°, 28°, 12° e 3°C. Estas temperaturas são importantes durante o ciclo de vida de Salmonella e para o processamento de produtos avícolas. Do total de cepas avaliadas, 92,2% foram capazes de produzir biofilme em pelo menos uma das quatro temperaturas testadas. Neste estudo, 71,6% das cepas produziram biofilme a 37°C, 63% a 28°C, 52,3% a 12°C e 39,5% a 3°C, independentemente do sorovar. Os resultados indicam uma forte influência da temperatura na produção de biofilme, especialmente para os sorovares S. Enteritidis, S. Hadar e S. Heidelberg. A produção de biofilme está parcialmente associada com o sorovar da cepa. Também foi observado que existe variação quanto à produção destas estruturas dentro de um mesmo sorovar, indicando que possivelmente a produção de biofilme é cepa-dependente.(AU)

Frequency, serotyping and antimicrobial resistance pattern of Salmonella from feces and lymph nodes of pigs / Isolamento, sorotipagem e padrões de resistência a antimicrobianos de Salmonella em fezes e linfonodos de suínos

Salmonellosis is a foodborne disease caused by bacteria of the genus Salmonella, being pigs and pork-products potentially important for its occurrence. In recent decades, some serovars of Salmonella have shown increase of resistance to conventional antimicrobials used in human and animal therapy, with serious risks for public health. The aim of this study was to evaluate feces (n=50), mediastinal (n=50), mesenteric (n=50) and mandibular (n=50) lymph nodes obtained from slaughter houses for Salmonella spp. Positive samples were serotyped and subjected to an in vitro antimicrobial susceptibility test, including the extended-spectrum beta-lactamase (ESBL) production. Salmonella species were identified in 10% (20/200) of total samples. From these, 20% (10/50) were identified in the submandibular lymph nodes, 18% (9/50) in the mesenteric lymph nodes, 2% (1/50) in feces and 0% (0/50) in the mediastinal lymph nodes. The serotypes found were Salonella Typhimurium (55%), S. enterica subsp. enterica 4,5,12: i: - (35%), S. Brandenburg and S. Derby with 5% (5% each). All strains showed resistance to at least one antimicrobial; 90% were resistant to four or more antimicrobials, and 15% were multidrug-resistant. Resistance to ciprofloxacin, tetracycline and nalidixic acid was particularly prevalent amongst the tested serovars. Here, we highlighted the impact of pigs in the epidemiological chain of salmonellosis in domestic animals and humans, as well as the high antimicrobial resistance rates of Salmonella strains, reinforcing the necessity for responsible use of antimicrobials for animals as an emergent One Health issue, and to keep these drugs for human therapy approaches.(AU)

Nas últimas décadas, o aumento de cepas circulante de Salmonella concomitantemente a resistência microbiana tem despertado a preocupação dos órgãos de Saúde Pública. Deste modo, o objetivo do presente trabalho foi pesquisar a presença de Salmonella a partir de fezes (n=50), linfonodos mediastinos (n=50), mesentéricos (n=50) e submandibular (n=50) oriundos de um abatedouro suíno. As cepas isoladas foram sorotipadas e testadas quanto a resistência antimicrobiana. A presença de Salmonella isolada foram em 10% (20/200) do total de amostras, sendo 20% dos linfonodos submandibulares, 18% dos linfonodos mesentéricos e 2% das fezes. Os sorotipos encontrados foram S. Typhimurium (55%), S. enterica subsp. enterica 4,5,12: i: - (35%), S. Brandenburg (5%) e S. Derby (5%). Todas a cepas apresentaram resistência a pelo menos um antimicrobiano testado, sendo 90% resistente pelo menos quatro antimicrobianos. Destes, 15% foram classificadas como multidrogas resistentes. Os antimicrobianos mais resistentes entre os sorovares isolados foram a ciprofloxacina, tetraciclina e o ácido nalidixico. A presença de cepas de Salmonella resistente a antimicrobianos na espécie suína tem gerado um grande impacto epidemiológico entre homem e animal, reforçando cada vez mais a necessidade do uso adequado de drogas principalmente relacionado com o tema "One Health".(AU)

Anti- Leptospira spp. antibodies in several animal species on the same farm / Anticorpos anti-Leptospira spp. em diversas espécies animais em uma propriedade rural

Leptospirosis is a zoonotic disease that occurs worldwide, affecting pets and livestock that can be a source of infection for humans, considered therefore an important disease in public health. Thus, an investigation was made into the occurrence of anti-Leptospira agglutinins in several animal species on a farm located in the municipality of Uberlândia, state of Minas Gerais, Brazil. A total of 172 blood serum samples were collected from five species: cattle, dogs, goats, horses and sheep. The diagnosis was performed by means of the microscopic agglutination test (MAT), using a collection of 12 live antigens. Of the 172 animals evaluated, 62 (36%) were seroreactive, and the most frequent serovars in each species were: Hardjo (54.54%), Icterohaemorrhagiae (27.27%), and Autumnalis (18.18%) in cattle; Icterohaemorrhagiae (37.5%), Autumnalis (31%), Canicola (18.7%) and Hardjo (12.5%) in dogs; Grippotyphosa (75%) and Hardjo (25%) in goats; Icterohaemorrhagiae (50%), Grippotyphosa (37.5%) and Hardjo (12.5%) in horses, and Hardjo (34.78%); Grippotyphosa (26.08%); Bratislava (17.39%), Autumnalis (17.39%) and Icterohaemorrhagiae (4.4%) in sheep. It is believed that the occurrence of anti-Leptospira agglutinins can be traced back to a source of infection that is common to these species, or that the agent was probably transmitted between them because they live in close proximity to each other.

A leptospirose é uma zoonose de ampla distribuição mundial, que acomete animais de estimação e produção, os quais podem ser fonte de infecção para a espécie humana, considerada, portanto uma relevante doença em saúde pública. Desta forma, objetivou-se investigar a ocorrência de aglutininas anti-Leptospira em diversas espécies animais em uma propriedade rural localizada no Município de Uberlândia-MG. Foram colhidas 172 amostras de soro sanguíneo provenientes de cinco espécies animais: bovinos, caninos, caprinos, equinos e ovinos. Estabeleceu-se o diagnóstico pela técnica de Soroaglutinação Microscópica (SAM) com uma coleção de 12 antígenos vivos. Dos 172 animais avaliados, 62 (36%) foram reagentes, as sorovariedades mais frequentes em cada espécie foram: Hardjo (54,54%), Icterohaemorrhagiae (27,27%), e Autumnalis (18,18%) nos bovinos; Icterohaemorrhagiae (37,5%), Autumnalis (31%), Canicola (18,7%) e Hardjo (12,5%) e nos caninos; Grippothyphosa (75%) e Hardjo (25%) nos caprinos; Icterohaemorrhagiae (50%), Grippothyphosa (37,5%) e Hardjo (12,5%) nos equinos e Hardjo (34,78%); Grippothyphosa (26,08%); Bratislava (17,39%), Autumnalis (17,39%) e Icterohaemorrhagiae (4.4%) nos ovinos. Acredita-se que a ocorrência de aglutininas anti-Leptospira possa estar relacionada com uma fonte de infecção comum para as espécies, ou ainda que a transmissão do agente tenha ocorrido entre espécies animais, provavelmente devido à convivência habitacional próxima.

Número mais provável miniaturizado e microbiologia convencional para isolamento de Salmonella spp. em abatedouros de frangos de corte / Miniaturized most probable number and conventional microbiology for isolation of Salmonella spp. in poultry slaughterhouses

Os produtos de origem avícola podem ser importantes veículos de transmissão de Salmonella spp. para humanos e, dentre os vários parâmetros que determinam a qualidade de um alimento, destacam-se os que definem suas características microbiológicas. Objetivou-se detectar e quantificar Salmonella spp. na tecnologia de abate de frangos de corte por microbiologia convencional (MC) e número mais provável miniaturizado (mNMP). As coletas foram realizadas em duas visitas a três abatedouros sob Inspeção Federal e em seis pontos de coleta em triplicata, definidos como: recepção das aves (swabs de cloaca e esponjas de gaiolas de transporte antes e após a higienização) e carcaças (após pré resfriamento em chiller, após o gotejamento e antes da embalagem primária e congeladas a -12oC por 24 horas), totalizando 108 amostras...

Poultry products can be important modes of transmission of Salmonella spp. to humans and, among several parameters used to determine food quality, microbiological characteristics play an essential role. The aim of this study was to determine and quantify Salmonella spp. at broiler slaughtering facilities. This was done by conventional microbiology and by the miniaturized most probable number (mMPN) methods. Three federally-inspected slaughterhouses were visited, where samples were collected in triplicate from six sites: reception of live birds (cloacal swabs and sponge samples from transport cages before and after sanitation) and carcass processing (after pre-chiller, after dripping, and before primary packaging and refrigeration at -12oC for 24h), totaling 108 samples...

Avaliação do controle de leptospirose por vacinação em bovinos de propriedade leiteira no estado do Piauí / Evaluation of leptospirosis control through vaccination in a cattle dairy farm in the state of Piauí

Neste estudo foram colhidos soros de 255 vacas e 2 touros no período de 2004 a 2009, em intervalos de seis meses, em uma fazenda de gado leiteiro no município de Buriti dos Lopes, Piauí. Pela técnica de soroaglutinação microscópica (SAM), os sorovares de leptospiras encontrados foram Hardjobovis, Hardjoprajitno (Norma), Hardjoprajitno (OMS). Para o controle da leptospirose, foi testada uma vacina contendo os mesmos sorovares encontrados infectando o rebanho. Os resultados mostraram que em bovinos leiteiros na bacia de Parnaíba, no Piauí, ocorre leptospirose, com predominância do sorovar Hardjobovis. A utilização de uma vacina contendo as sorovariedades mais prevalentes no rebanho, aplicada semestralmente ao longo de cinco anos, foi importante para a redução dos títulos de anticorpos, além de reduzir os problemas reprodutivos no rebanho.(AU)

For this study, we collected sera from 255 cows and 2 bulls in the period from 2004 to 2009, with six-month intervals, a dairy cattle farm in the municipality of Buriti dos Lopes, in the state of Piauí. By the microscopic agglutination test (MAT), we found the following serovars of leptospira: Hardjobovis, Hardjoprajitno (Norma), Hardjoprajitno (WHO). For the control of leptospirosis, a vaccine containing the same serovars that were found infecting the herd was tested. The results showed that in dairy cattle in the basin of Parnaiba, state of Piauí, leptospirosis occurs with a predominance of serovar Hardjobovis. The use of a vaccine containing the most prevalent serovars in the herd applied every six months during the course of five years was important to reduce antibody titers and reproductive problems in cattle.(AU)

Atividade antimicrobiana do óleo essencial de rizomas de açafrão (Curcuma longa L. ) e gengibre (Zingiber officinale Roscoe) frente a salmonelas entéricas isoladas de frango resfriado / Antimicrobial activity of essential oil from Curcuma longa and Zingiber officinale rhizomes against enteric Salmonella isolated from chicken

Objetivou-se com este trabalho identificar, quantificar os constituintes, e avaliar a atividade antibacteriana dos óleos essenciais extraídos de rizomas de açafrão (Curcuma longa L.) e gengibre (Zingiber officinale Roscoe) cultivados nas condições de Manaus/AM frente a 14 salmonelas entéricas isoladas de frango resfriado. A extração dos óleos essenciais foi realizada utilizando-se aparelho tipo Clevenger e a composição determinada por Cromatografia Gasosa acoplada a Espectrometria de Massas (CG-MS). A atividade antibacteriana foi realizada com o emprego de técnica de microdiluição em caldo. O óleo essencial de gengibre se mostrou expressivamente mais eficiente do que o óleo de açafrão, tanto em termos de ação bacteriostática (concentração inibitória mínima de 2500 a 5000 µg.mL-1) quanto bactericida (concentração bactericida mínima de 5000 a 10000 µg.mL-1) observando-se variação apenas em duas as amostras em termos de resistência a ação bactericida deste óleo. Assim, o óleo essencial de gengibre, representa uma alternativa para o controle de Salmonella enterica, entretanto, demais estudos abordando o sinergismo com alimentos são indicados.

The objective of this work was to identify, quantify constituents and evaluate the antibacterial activity of essential oils from rhizomes of turmeric (Curcuma longa L.) and ginger (Zingiber officinale Roscoe) grown under conditions of Manaus/AM front of enteric salmonella isolated from chilled poultry. The extraction of essential oils was performed using the Clevenger type apparatus and composition determined by Gas Chromatography coupled to Mass Spectrometry (GC-MS). The antibacterial activity was performed with the use of microdilution broth. The essential oil of ginger proved significantly more efficient than tumeric oil, both in terms of bacteriostatic action (minimum inhibitory concentration 2500-5000 mg µg mL-1) and bactericidal (minimum bactericidal concentration 5000-10000 mg µg mL-1) observing changes in only two samples in terms of resistance to bactericidal activity of this oil. Thus, the essential oil of ginger, is an alternative for the control of Salmonella enterica, however, other studies addressing the synergism with food are indicated.

Anticorpos revelados pelo teste de inibição do crescimento de leptospiras in vitro (TICL) contra os sorovares Canicola, Icterohaemorrhagiae e Copenhageni em cães adultos revacinados anualmente com vacina comercial contendo bacterinas dos sorovares Canicola, Icterohaemorrhagiae, Grippotyphosa e Pomona / Antibody revealed by growth inhibition test the of leptospires in vitro (GIT) against serovars Canicola, Icterohaemorrhagiae and Copenhageni in adult dogs revaccinated annually with commercial vaccine containing serovars Canicola, Icterohaemorrhagiae, Grippotyphosa and Pomona bacterins

Na atualidade, o sorovar Copenhageni é o representante do sorogrupo Icterohaemorrhagiae, mantido por roedores sinantrópicos, que tem prevalecido nos cães e seres humanos das grandes metrópoles brasileiras. A despeito de alguns autores sugerirem a existência de proteção cruzada entre sorovares incluídos em um mesmo sorogrupo esta condição ainda não foi suficientemente esclarecida para os sorovares Icterohaemorrhagiae e Copenhageni. No presente trabalho cães adultos com dois a seis anos de idade primo-vacinados com três doses intervaladas de 30 dias a partir dos 60 dias de idade e revacinados anualmente com vacina anti-leptospirose polivalente contendo os sorovares Canicola, Icterohaemorrhagiae, Grippotyphosa e Pomona foram revacinados com a mesma vacina e aos 30 dias da revacinação foram submetidos aos testes de soroaglutinação microscópica (SAM) e de inibição do crescimento de leptospiras in vitro (TICL), para avaliação comparativa dos níveis de anticorpos produzidos para os sorovares Canicola, Icterohaemorrhagiae e Copenhageni. Os resultados obtidos indicaram que a imunidade conferida pela vacina para o sorovar Icterohaemorrhagiae é mais duradoura que a observada para o sorovar Canicola, já que títulos de anticorpos neutralizantes >1,0 log10 foram observados antes do reforço vacinal não havendo substancial aumento após a revacinação. Quanto ao sorovar Canicola, a revacinação resultou em considerável aumento do título de anticorpos neutralizantes quando comparado ao momento anterior a revacinação (p=0,001). A análise dos valores encontrados após a revacinação demonstrou claramente que cães revacinados com bacterina produzida com o sorovar Icterohaermorrhagiae não apresentam aumento do título de anticorpos inibidores do crescimento contra o sorovar Copenhageni, em nível suficiente para inibir o crescimento de leptospiras. Apesar disso, os títulos de anticorpos inibidores de crescimento anti-Copenhageni encontrados antes e após a revacinação demonstraram que, pelo menos certo grau de proteção contra a infecção por esse sorovar pode ser esperado para os cães vacinados com bacterinas do sorovar Icterohaemorrhagiae, não sendo, no entanto, uma proteção cruzada completa.

Currently, the serovar Copenhageni is the representative of serogroup Icterohaemorrhagiae maintained in synanthropic rodents found most frequently in dogs and humans in metropolitan areas of Brazil. Despite some authors have suggested the existence of cross-protection between serovars included in the same serogroup, this condition has not yet been sufficiently clarified for serovars Icterohaemorrhagiae and Copenhageni. In the present work, 2 to 6-year-old dogs, vaccinated at 60, 90 and 120 days of age and thereafter, revaccinated annually with commercial vaccine containing Canicola, Icterohaemorrhagiae, Grippotyphosa and Pomona bacterins were evaluated as to the immune status against leptospirosis before and 30 days after revaccination. Mycroscopic agglutination test (MAT) and in vitro growth inhibition test (GIT) were performed to search for agglutinating anti-Leptospira antibodies and neutralizing anti-Leptospira antibodies, respectively for serovars Canicola and Icterohaemorrhagiae, and additionally, for serovar Copenhageni, not included in the vaccine. The results showed that the immunity conferred by the vaccine to serovar Icterohaemorrhagiae is more lasting than that observed for serovar Canicola, since neutralizing antibody titers >1.0 log10 were observed before the booster vaccination with no substantial increase after revaccination. As for the serovar Canicola, revaccination resulted in a considerable increase in neutralizing antibody titer when compared to the one observed previously to the revaccination (p=0.001). The analysis of the data obtained by GIT allowed us to conclude that dogs given vaccine containing Icterohaemorrhagiae bacterin did not produce neutralizing antibodies against serovar Copenhageni enough to inhibit leptopiral growth at the same level as occurred for the homologous serovar. Despite this, the GIT titer found for serovar Copenhageni before and after revaccination showed that at least, some level of protection could be expected for dogs vaccinated with serovar Icterohaemorrhagiae bacterin, not a complete cross protection.

Anticorpos anti-Leptospira spp. em animais selvagens do zoológico municipal de Ribeirão Preto, Estado de São Paulo, Brasil / Anti-Leptospira spp. antibodies in wild animals from Ribeirão Preto city zoo in São Paulo State, Brazil

A leptospirose acomete todos os animais domésticos, selvagens e os seres humanos. Alguns estudos sorológicos realizados têm demonstrado o envolvimento de espécies selvagens na epidemiologia da doença. Uma vez que populações cativas de animais selvagens são pouco estudadas, principalmente no Brasil, o presente estudo teve como objetivo a detecção de anticorpos anti-Leptospira spp. em animais selvagens de cativeiro e de vida livre do Zoológico Municipal de Ribeirão Preto, estado de São Paulo, Brasil. Durante o período de março a outubro de 2006 foram colhidas 403 amostras de sangue das quais 388 animais (110 répteis, 143 aves, 110 mamíferos e 25 peixes) e 15 amostras de funcionários do zoológico Dentre as 388 amostras de animais, 339 eram animais cativos e 49 eram animais de vida livre capturados pelo uso de armadilhas. Os soros sanguíneos foram analisados por meio da prova de Soroaglutinação Microscópica (SAM) utilizando-se antígenos de 22 sorovares de leptospiras patogênicas e dois sorovares de leptospiras não patogênicas. Foram reagentes para leptospirose 103 (103/388 = 26,5%) amostras, sendo 92 (92/339 = 27,1%) amostras de animais cativos e 11 (11/49 = 22,4%) de animais de vida livre. As 15 amostras de soro humanas foram negativas. Os títulos sorológicos nas amostras reagentes variaram de 40 a 5.120 com predominância dos títulos 40 e 80 e os sorovares Patoc, Andamana, Canicola, Icterohaemorrhagiae e Panama foram os mais frequentes.

Leptospirosis may affect all domestic and wild animals as well as human beings. Some serological studies have shown the involvement of wild species in the epidemiology of the disease. Once captive wild animals are not much studied, especially in Brazil, the present study aimed to detect anti- Leptospira spp. antibodies in animals from Ribeirão Preto city zoo, in São Paulo state, Brazil. Blood samples were collected from captive birds, fish, reptiles and mammals, sinanthropics and free-living animals and also from employees between March and October, 2006. Four hundred and three blood samples were obtained, 388 animals’ samples (110 reptiles, 143 birds, 110 mammals and 25 fish) and 15 humans’. The sera were analysed by Microscopic Agglutination Test using 22 serovars from pathological leptospiras and two from non-pathological serovars. Among the animal samples, 339 were from captive animals, and 49 from free-living ones, captured with traps inside the zoo. One hundred and three (103/388 = 26.5%) samples reacted to leptospirosis, ninety-two (92/339 = 27.1%) samples were from captive animals and eleven (11/49 = 22.4%) from freeliving ones. All humans’ samples were negative. Serological titles varied from 40 to 5.120, with predominance of titles between 40 and 80 and the most frequent serovars were Patoc, Andamana, Canicola, Icterohaemorrhagiae and Panama.

Pesquisa de sorovares de leptospiras em rebanho bovino leiteiro no estado do Piauí, Brasil / Survey of leptospira serovars in a dairy cattle herd in Piauí state, Brazil

Este trabalho teve como objetivo relatar a pesquisa de sorovares de leptospiras em animais de uma fazenda localizada no Município de Buriti dos Lopes, integrante da Bacia Leiteira de Parnaíba, Piauí, Brasil. Foram colhidas amostras de sangue de 18 vacas da raça Girolando que abortaram no período de julho de 2004 a abril de 2005. As amostras foram submetidas ao teste de soroaglutinação microscópica (SAM) utilizando-se antígenos vivos de 23 sorovares de leptospiras patogênicas. 83,33% (15/18) das amostras apresentaram aglutininas anti-leptospira, sendo 53,33% de sorovar Hardjoprajitno (8/15), 6,67% para Hardjobovis (1/15), Wolffi (1/15) e Shermani (1/15) e quatro (4/15) co-agluitinações. A amostra do reprodutor apresentou aglutininas antileptospira para o sorovar Hardjobovis com titulação 1:400 o que sugere que este animal teve participação na disseminação da infecção no rebanho.

This study aimed to report the leptospira serovar varieties in animals from a farm located in the county of Buriti dos Lopes, within the so-called "milk basin" of Parnaíba, state of Piauí, Brazil. Samples of blood were collected from 18 Girolando cows who aborted between July 2004 and April 2005, and a sample was taken from a breeder bull. The samples were subjected to the microscopic agglutination test (SAM), using live antigens of 23 pathogenic leptospira serovars. Serum samples were screened in the dilution of 1:100. Data analysis revealed that 83.33% (15/18) of the samples showed anti-leptospira agglutinins, of which 53.33% were for the Hardjoprajitno serovar (8/15), 6.67% each for Hardjobovis (1/15), Wolffi (1/15) and Shermani (1/15), along with 4 (4/15) coagglutinations. The breeder-bull sample showed anti-leptospira agglutinins for serovar Hardjobovis with titration of 1:400, suggesting that this animal had participated in the spread of the infection in the herd.