Development of a monoclonal antibody against deoxynivalenol for magnetic nanoparticle-based extraction and an enzyme-linked immunosorbent assay

Monoclonal antibody (mAb, NVRQS-DON) against deoxynivalenol (DON) was prepared. DON-Ag coated enzyme linked immunosorbent assay (ELISA) and DON-Ab coated ELISA were prepared by coating the DON-BSA and DON mAb. Quantitative DON calculation ranged from 50 to 4,000 ng/mL for DON-Ab coated ELISA and from 25 to 500 ng/mL for DON-Ag coated ELISA. 50% of inhibitory concentration values of DON, HT-2, 15-acetyl-DON, and nivalenol were 23.44, 22,545, 5,518 and 5,976 ng/mL based on the DON-Ab coated ELISA. Cross-reactivity levels of the mAb to HT-2, 15-acetyl-DON, and nivalenol were 0.1, 0.42, and 0.40%. The intra- and interassay precision coefficient variation (CV) were both <10%. In the mAb-coated ELISA, mean DON recovery rates in animal feed (0 to 1,000 microg/kg) ranged from 68.34 to 95.49% (CV; 4.10 to 13.38%). DON in a buffer solution (250, 500 and 1,000 ng/mL) was isolated using 300 microg of NVRQS-DON and 3 mg of magnetic nanoparticles (MNPs). The mean recovery rates of DON using this mAb-MNP system were 75.2, 96.9, and 88.1% in a buffer solution spiked with DON (250, 500, and 1,000 ng/mL). Conclusively we developed competitive ELISAs for detecting DON in animal feed and created a new tool for DON extraction using mAb-coupled MNPs.

Diagnostic Role of Anti-Saccharomyces cerevisiae and Antineutrophil Cytoplasmic Autoantibodies in Pediatric Inflammatory Bowel Disease / 대한소화기학회지

BACKGROUND/AIMS: Combined measurement of perinuclear antineutrophil cytoplasmic autoantibodies (pANCA) and anti-Saccharomyces cereviseae mannan antibodies (ASCA) has recently been suggested as a valuable diagnostic approach to inflammatory bowel disease (IBD) in the pediatric age group. The aim of this study was to test the accuracy of the assay using pANCA and ASCA in diagnosing pediatric ulcerative colitis (UC) and Crohn's disease (CD). METHODS: Sera were collected from 25 patients with IBD (17 with CD, 8 with UC) and 32 healthy controls. The levels of pANCA and ASCA were determined by using a standard indirect immunofluorescence technique on ethanol-fixed granulocytes and an ELISA assay, respectively. RESULTS: In patients with UC, the sensitivity, specificity, and positive predictive value of the pANCA test were 38%, 88%, and 60%, respectively. Such values were not changed significantly in the case of positive pANCA and negative ASCA. The sensitivity, specificity, and positive predictive value of ASCA test in diagnosing CD were 71%, 88%, and 92%, respectively. The combination of pANCA negative and ASCA positive was not significant. CONCLUSIONS: ASCA and pANCA assays are highly disease specific for CD and UC, respectively. These serological tests can assist clinicians in diagnosing and categorizing patients with IBD and may be useful in making therapeutic decisions.

IgA, IgE e subclasses de IgG anti-Candida albicans no soro e lavado vaginal de pacientes com candidíase vulvovaginal / IgA, IgE and IgG subclasses to Candida albicans in serum and vaginal fluid from patients with vulvovaginal candidiasis

OBJETIVO: Determinar níveis de anticorpos IgA, IgE, IgG e subclasses (IgG1, IgG4) específicos a C. albicans no soro e lavado vaginal de mulheres com ou sem candidíase vulvovaginal para avaliar o papel destes anticorpos na imunopatogênese desta doença. MÉTODOS: Foram selecionadas 30 mulheres com sintomas clínicos de candidíase vulvovaginal (15 com cultura de secreção vaginal positiva para C. albicans, 11 com cultura negativa e quatro com cultura positiva para Candida não-albicans) e 12 mulheres controles assintomáticas (nove com cultura negativa). Amostras de soro e lavado vaginal foram obtidas para a detecção de anticorpos anti-C. albicans por ELISA. RESULTADOS: Pacientes sintomáticas com cultura positiva apresentaram níveis de IgA específicas significativamente maiores no lavado vaginal e menores no soro do que aquelas com cultura negativa. Níveis séricos de IgE específica foram extremamente baixos em relação ao lavado vaginal. Altos níveis de IgG total específica foram encontrados no soro e lavado vaginal em ambos os grupos, independente da presença do fungo. Níveis de IgG1 e IgG4 específicas foram significativamente maiores somente no lavado vaginal de mulheres sintomáticas e cultura positiva, com relação IgG1/IgG4 ligeiramente maior, indicando que a resposta de anticorpos IgG1 possa estar predominantemente envolvida na resolução da infecção fúngica. CONCLUSÕES: Nossos resultados indicam resposta acentuada de IgA, IgG1 e IgG4 anti-C. albicans no lavado vaginal de mulheres sintomáticas com cultura positiva, sugerindo importante papel destes anticorpos na resposta imune local estimulada pela presença do fungo

Candidiasis esofágica en pacientes con sida. Estudio clínico y microbiológico

Se estudiaron 18 pacientes con sida, que presentaban síntomas gastrointestinales altos o lesiones en la cavidad oral sugestivos de candidiasis. Se obtuvieron datos clínicos, muestras de la cavidad oral, biopsias y cepillado esofágico, así como suero de todos los pacientes. El síntoma que principalmente se observó en la candidiasis esofágica fue la disfagia; la candidiasis oral se comportó de forma asintomática. Candida albicans fue la especie que más se aisló con predominio del serotipo A. Se analizaron por la técnica de electroforesis en gel de poliacrilamida los perfiles proteicos de las 12 cepas pertenecientes a esta especie, se observó identidad de sus patrones de peso molecular, lo que sugiere que sea la misma cepa la que se halla en la cavidad oral y en el esófago. Se evaluó la respuesta de anticuerpos anti-C. albicans, no resultó útil la inmunodifusión doble para el diagnóstico de candidiasis esofágica.

18 AIDS patients who presented high gastrointestinal symptoms or lesions in the oral cavity suggestive of candidiasis were studied. Clinical data, specimen of the oral cavity, biopsies and esophageal brushing, as well as serum from all patients were obtained. Dysphagia was the main symptom observed in the esophageal candidiasis. Candida albicans was the most isolated species with a predominance of serotype A. The protein profiles of 12 strains belonging to this species were analyzed by the polyacrylamide gel electrophoresis, and it was found that their molecular weight patterns were identical, which indicates that the same strain is in the oral cavity and in the esophagus. The response of the anti-C. albicans antibodies was evaluated. The double immunodiffussion was not useful for the diagnosis of esophageal candidiasis.

Granulomatous reaction in the hamster cheek pouch induced by killed Paracoccidioides brasiliensis

We have studied the role of Paracoccidioides brasiliensis viability in the morphology of paracoccidioidomycotic granulomas in the hamster cheek pouch, an immunologically privileged site. Naive (N=75) and previous senstized (N=50) two-month old male hamsters (Mesocricetus aurathus) were inoculated into the pouch with 5 x 10**5 live or heat-or formalim-killed fungi. Previously sensitized animals presented a positive foot pad tst and immunodiffusion demonstrable antibodies (titer 1/32), at the time of sacrifice, naive animals were always negative for those immunological tests. The histological resultas showed that, like viable P. brasilensis, killed fungi evoke typical epithelioid granulomas in 100 per cent of animal, even in the absence of immunodiffusion or footpad test detectable immune response. The granulomas elicited by killed fungi were devoid of giant cells or a mononuclear cell halo, suggfesting that live proliferating fungi or their products may be involved in these events

Candida antibodies in amniotic fluid.

Amniotic fluid samples were tested for specific immunoglobulins against Candida albicans by indirect immunofluorescence. Nineteen of the 23 samples tested contained specific IgA while specific IgG antibodies were detected in only seven samples (P less than 0.01). None of the samples contained specific anticandidal IgM (P less than 0.001). These 23 samples and a further 30 amniotic fluid samples were tested for Candida mannan antigen by latex agglutination. Mannan was not detected in any of the samples tested. It is concluded that anticandidal IgA in amniotic fluid is naturally occurring.

Diagnosis of systemic candidosis by immunodiffusion test with locally prepared antigen.

Locally-made C. albicans, C. tropicalis, C. krusei antigens and antisera were made and compared with reference C. albicans and C. krusei antigens and antisera from the Center for Disease Control (CDC), Atlanta, Georgia, U.S.A., and the Provincial Laboratory of Public Health, University of Alberta, Edmonton, Alberta, Canada, respectively. The local antigens and antisera showed 3 precipitin bands when reacted with locally-made and reference antisera. When tested with human sera from 171 normal persons (aged 17-24 years), 30 Candida vaginitis, 30 Candida balanitis, 30 mucocutaneous candidosis, 30 pityriasis versicolor and 10 aspergillosis patients revealed no precipitin band. When tested with cryptococcosis, 2 out of 6 sera showed a precipitin band but only at 1:1 dilution. Four candidosis sera offered by CDC showed precipitin bands at dilutions up to 1:4. Three Thai candidosis sera also showed precipitin bands at dilutions up to 1:2. Therefore, we judged the baseline titer for Thai population to be 1:2.

Reaçäo de microimunodifusäo em gel de ágar no diagnóstico sorológico da paracoccidioidomicose / Microimmunodiffusion reaction in agar gel in the sorological diagnosis of paracoccidioidomycosis

Utilizou-se técnica de microimunodifusiao dupla em gel de ágar para a medida quali e quantitativa de anticorpos ciruclantes anti-P. brailiensis, comparando-se os resultados com o macrométodo. Todos os 103 soros de pacientes portadores de paracoccidioidomicose foram positivos no micrométodo contra 87% de positividade no macrométodo. Os 83 soros de paciente sem parcocccidioidomicose foram negativos em ambas as reaçöes. Os títulos dos soros positivos tenderam a ser mais elevados no micrométodo, que forneceu bandas e precipitaçäo mais nítidas e fáceis de serem lidas. O micrométodo é de realizaçäo simples. Utiliza pequena quantidade de material e possibilita o teste simultâneo de 102 soros. Acreditamos que ele poderá substitutir o macrométodo, especialmente em laboratórios de grande rotina sorológica

Aspergillus fumigatus fungus ball in hospitalized patients with chronic pulmonary disease: usefulness of double immunodiffusion test as a screening procedure

Trezentos e cinquenta pacientes sintomáticos respiratórios admitidos no Hospial Raphael de Paula Souza, sem diagnóstico etiológico definitivo, foram triados pela técnica de imunodifusäo dupla (IDD) para aspergilose. Quando a IDD foi positiva, informaçöes adicionais como histórico e exames radiológicos foram requisitados e, quando possível, espécimes clínicos foram processados para exames micológicos e histopatológicos. Linhas de precipitaçäo específicas para o antígeno de A. fumigatus foram encontradas em 29(8,3%) dos 350 soros de pacientes testados. Dezenove (65,5% dos 29 pacientes cm sorologia positiva foram reconhecidos como tendo boa fúngica pelos achados radiológicos em dois ou por ambos em oito pacientes. Este estudo prospectivo de dois anos mostrou que aspergilose pulmonar é um problema considerável entre pacientes admitidos em um hospital para sintomáticos respiratórios, especialmente aqueles com cavidades pulmonares ou bronquiectasias

Anticuerpos contra Aspergillus fumigatus en asmáticos atópicos / Antibody against Aspergillus fumigatus in atopic asthamtics

La observación de pruebas cutáneas inmediatas positivas a los extractos de Aspergillus fumigatus (Af.) en pacientes asmáticos atópicos libres de aspergiliosis broncopulmonar alérgica instó a estudiar más profundamente la dinámica inmunológica de estos pacientes en relación al antígeno mencionado. De cien asmáticos extrínsecos habitantes de Buenos Aires y sus alrededores con una IgE-PRIST basal promedio de 485,1 KU/L, 26 de ellos evidenciaron una prueba cutánea positiva a dicho alergeno preparado según técnicas convencionales. El RAST-IgE-anti-Af. fue positivo en 21 de esos 26 asmáticos. Por otro lado, las técnicas de inmunoprecipitación fueron negativas para los asmáticos y los controles; en estos últimos el RAST también fue negativo. Se destaca la importancia de la ausencia de precipitinas anti-Af. y la proclividad a practicar inmunoterapia con hongos anemófilos que incluyen al Af. en los atópicos portadores de alergia respiratoria. Se propone un seguimiento con técnicas específicas de inmunoprecipitación para detectar un efecto indeseable de dicha terapia con consecuencias imprevisibles

Criptococosis subaguda experimental en ratas Wistar

Se presentan los resultados obtenidos con la inoculación intracardíaca de 2x10**5 o 3x10**5 células de Cryptocococcus neofarmans en ratas Wistar. Se produjo una enfermedad subaguada y uniformemente mortal con compromiso de los pulmones, cerebro y timo en todos los casos. En menor proporción hubo ataque del hígado, bazo, pericardio y diafragma. El lapso de sobrevida y la rapidez con que la infección se diseminó hacia los órganos abdominales fueron influidos por la cantidad de Cryptococcus inoculados. La respuesta inmunitaria fue semejante a la observada en la enfermedad humana, con baja frecuencia de anticuerpos circulantes y elevado índice de antigenemias positivas. Las pruebas de hipersensibilidad retardada fueron positivos en el 78% y todos los órganos, menos el cerebro, mostraron una reacción inflamatoria productiva, con formación de granulomas de células epitelioides y gigantes que exhibieron una definida tendencia a bloquear la infección. Por el contrario, en el cerebro, la respuesta inflamatoria fue escasa, se produjeron lesiones seudoquísticas de crecimiento sostenido que condujeron finalmente a la muerte

Relación entre los resultados de las precipitinas para Candida y algunos parametros clinicos / Relation between of the precipitins results to Candida and some clinical parameters

Se procesaron 268 sueros para detectar la presencia de anticuerpos y antígenos de Candida por inmunodifusión en gel de agar o contrainmunoelectroforesis. Cuarenta y dos sueros dieron resultados positivos: 37 para anticuerpos, 4 para antígeno y 1 para ambos. Fueron comparados los datos clínicos de los pacientes que tuvieron resultados positivos, con los correspondientes al total de los enfermos cuyos sueros fueron analizados. La significación estadística de las diferencias encontradas, fue determinada por el método de X2. Pudo observarse un aumento significativo de la incidencia de resultados positivos en pacientes de edad avanzada (71-80 años), en los materiales procedentes de hospitales oncológicos, de servicios de cirugía o de terapia intensiva. También fue elevada la frecuencia de resultados positivos en pacientes diabéticos, con neumopatías y con tumores sólidos. Por el contrario, la incidencia de serologías positivas fue significativamente más baja en los sueros procedentes de hospitales pediátricos, en niños de 4 a 10 años, en los portadores de leucemias y en los pacientes inmunosuprimidos