Metabolitos del efavirenz como probable causa de falsos-positivos en test inmunológico para benzodiacepinas en orina / False-positive immunoassay results for urine benzodiacepines probably caused by efavirenz metabolites

En el tratamiento del síndrome de inmunodeficiencia adquirida (SIDA) una de las drogas antirretrovirales usadas es el efavirenz (EFV). Existe una asociación entre el consumo de drogas de abuso y la probabilidad de adquirir el SIDA, razón por la cual se solicita su investigación en orina. Como método de screening para detectar el consumo de estas drogas se utilizan habitualmente los ensayos inmunológicos. Una característica especial de estos métodos son las reacciones cruzadas que pueden presentarse con sustancias estructuralmente relacionadas dando origen a resultados falsos positivos.Al analizar 18 muestras de orina de pacientes con SIDA, se observó un 78% de resultados falsos positivos para benzodiacepinas (BZD) cuando fueron analizados mediante el ensayo inmunológico Triage® (Ascend Multi Immune Assay). El estudio confirmatorio por cromatografía gaseosa acoplada a espectrometría de masa (GC-MS) reveló la ausencia de BZD en todos los casos y el 100% de los resultados falsos positivos observados correspondieron a las muestras de los pacientes tratados con EFV. Con el propósito de dilucidar el origen de esta reacción cruzada fueron aislados el EFV y sus metabolitos de las muestras de orina, mediante extracción en fase sólida (SPE) y cromatografía en capa delgada de alta resolución (HPTLC), e identificados por cromatografía gaseosa- espectrometría de masa (GC-MS y GC-MS/MS/MS).Los resultados obtenidos en este estudio indicarían que los metabolitos del EFV (8-OH-EFV y/o 7-OH-EFV) y no el EFV podrían ser los responsables de la reacción cruzada observada en el ensayo inmunológico.

Efavirenz (EFV) is an antiretroviraldrug used in the acquired immunodeficiency syndrome (AIDS) treatment. Immunoassay techniques have been widely used for abuse drug screening test. The presence of structurally related substances in urine samples can interfere by cross reactionscausing false positive results. High percentage of false positive results (78%) for benzodiazepines (BDZ) had been established for 18 urine samples assayed by immunoassay test Triage® (Ascend Multi Immune Assay). Gas chromatography-mass spectrometry(GC-MS) evaluation was negative for BDZ for all cases. One hundred percent (100%) of the positive results came from patients treated with EFV. With the aim to determine the cause of this cross- reaction, EFV and its metabolites were isolated by solid phase extraction(SPE) and high performance thin-layer chromatography (HPTLC) and then, identified by gas chromatography mass spectrometry (GC-MS and GC-MS/MS/MS). GC-MS/MS/MS analysis showed that EFV metabolites (8-OH-EFV and/or 7-OH-EFV) could probably be responsible for the cross reaction observed in the immunologic assays.

Screening of benzodizepines and their metabolites in urine / 法医学杂志

OBJECTIVE@#Screen seventeen benzodizepines and their metabolitesin urine by GC/ECD and GC/MS.@*METHODS@#They were GC (GC/ECD, GC/MS) assay of benzodizepines and GC (GC/ECD, GC/MS) assay of benzophenones of acid-hydrolytic products of 1,4-benzodizepines.@*RESULTS@#The methods were simple and sensitive. The recoverys were 60% to 90% of most benzodizepines, linear calibration curves were 20 ng/ml-200 ng/ml (r > 0.99), and detection limits were 0.5 ng/ml-10 ng/ml.@*CONCLUSION@#They methods were evaluated with human urine samples.

Deteminación de 1,4-benzodiazepinas en orina por cromatografía líquida de alta eficacia / Determination of 1,4-benzodiazepines in urine by high performance liquid chromatography

Se describe un método de determinación de 1,4-benzodiazepinas en orina por cromatografía líquida de alta eficacia, luego de la hidrólisis ácida a sus correspondientes benzofenonas. En el presente trabajo se logró optimizar el rendimiento en benzofenonas variando las condiciones de hidrólisis y empleando diferentes pH y solventes de extracción. La separación de las benzofenonas se llevó a cabo con una columna de fase reversa de octadecilsilano, en condiciones isocráticas y detección UV a 254 nm. La sensibilidad del método es de 250 ng de benzodiazepina por ml de orina