Quaternary knot technique: suture knot burial without scleral flap or incision for trans-scleral fixation

Despite the introduction of novel sutureless posterior chamber intraocular lens (IOL) fixation techniques, some conditions still require suture-assisted scleral fixation. If the scleral fixation suture knot is left directly under the conjunctiva, it may become exposed, resulting in an increased risk of endophthalmitis. To avoid this problem, we offer a new alternative, simple, and safe way for burying the end of the suture using knots in this report.

Avaliação dos mecanismos envolvidos na permeabilidade de fármacos antirretrovirais por meio dos modelos ex vivo (células de Franz) e in vitro (PAMPA) / Evaluation of mechanisms involved in the permeability of antiretroviral drugs through ex vivo (Franz cells) and in vitro (PAMPA) models

Para fármacos administrados por via oral, o controle da extensão e da velocidade de absorção depende basicamente de duas importantes etapas: solubilidade do fármaco nos líquidos fisiológicos e sua permeabilidade através das membranas biológicas. Assim, o Sistema de Classificação Biofarmacêutica (SCB) foi proposto como uma ferramenta para o desenvolvimento de novos fármacos, de novas formulações e para auxiliar nos processos de bioisenção. No entanto, outro fator relacionado à biodisponibilidade e que deve ser considerado nos estudos biofarmacêuticos é o metabolismo. Desta forma, o Sistema de Classificação Biofarmacêutica de Distribuição de Fármacos (SCBDF) foi proposto com a finalidade de classificar os fármacos de acordo com suas características de solubilidade e de metabolismo de modo que seja possível avaliar e predizer o comportamento do fármaco in vivo. O metabolismo tem sido amplamente investigado, sobretudo as enzimas do citocromo P450, as quais estão presentes também nos enterócitos. Além disso, o SCBDF oferece um suporte quanto à avaliação dos mecanismos de permeabilidade envolvidos nos processos de absorção, interações fármaco-fármaco e interações fármaco-alimento. Assim, o presente trabalho teve como objetivo elucidar os mecanismos envolvidos na permeabilidade de fármacos antirretrovirais por meio dos modelos ex vivo (câmaras de difusão vertical tipo Franz) e in vitro (PAMPA, MDCK-MDR1 e microssomas) considerando os aspectos relacionados ao metabolismo intestinal e ao efluxo destes fármacos. Dada a importância da utilização de fármacos antirretrovirais na terapia medicamentosa contra a Síndrome da Imunodeficiência Adquirida (SIDA) e que estes medicamentos são normalmente administrados cronicamente, a compreensão dos mecanismos envolvidos na permeabilidade é de suma importância, uma vez que estes não estão totalmente esclarecidos e poucas informações são encontradas na literatura. Além disso, a biodisponibilidade de fármacos como estavudina, lamivudina e zidovudina indica variação na permeabilidade, necessitando de uma investigação científica mais aprofundada dos processos absortivos. Assim, segmentos de jejuno provenientes de ratos machos Wistar foram utilizados para a avaliação da permeabilidade intestinal dos referidos antirretrovirais considerando a avaliação de efluxo pela glicoproteína-P e o metabolismo intestinal pela CYP3A. De maneira complementar, estudos in vitro com o emprego de membranas artificiais paralelas (PAMPA) e culturas celulares de MDCK-MDR1 foram realizados com a finalidade de auxiliar na elucidação dos mecanismos de permeabilidade dos fármacos antirretrovirais. Além disso, a avaliação do metabolismo dos referidos fármacos foi realizada com o emprego de microssomas a fim de verificar se tais substâncias são substratos de enzimas da família CYP3A e, assim, verificar o impacto do metabolismo intestinal na absorção. Os resultados de permeabilidade obtidos em PAMPA foram: 0,74±0,11 x 10-6 cm/s para a estavudina, 0,25±0,12 x 10-6 cm/s para a lamivudina e 1,14±0,25 x 10-6 cm/s para a zidovudina. Já no modelo ex vivo com o emprego de câmaras de difusão vertical tipo Franz, os resultados foram: 1,56±0,32 x 10-5 cm/s para a estavudina, 1,26±0,27 x 10-5 cm/s para a lamivudina e 2,54±0,49 x 10-5 cm/s para a zidovudina. Portanto, com base nos resultados obtidos a partir dos dois métodos empregados, sugere-se que 30 outro mecanismo de transporte que não envolva a permeabilidade por difusão transcelular passiva possa estar relacionado à permeabilidade dos fármacos antirretrovirais. Com relação aos estudos de efluxo, os resultados obtidos a partir dos experimentos realizados em câmaras de difusão vertical tipo Franz demonstraram o aumento significativo da permeabilidade dos três antirretrovirais quando o inibidor de P-gp foi empregado, sendo: de 15,6 x 10-6 para 42,5 x 10-6 cm/s para a estavudina, de 12,6 x 10-6 para 37,5 x 10-6 cm/s para a lamivudina e de 25,4 x 10-6 para 56,6 x 10-6 cm/s para a zidovudina. Em culturas celulares MDCK-MDR1, os resultados de permeabilidade foram utilizados para a obtenção das razões entre as direções B→A e A→B. Os valores de Papp na condição inibida para os fármacos estudados apresentaram razão menor do que 1. Já a razão B→A/A→B para cada fármaco nos ensaios sem inibidor apresentou-se igual ou maior que 2, evidenciando a interação fármaco-transportador. Com base nisso, o modelo ex vivo com o emprego de segmentos intestinais em câmaras de difusão vertical tipo Franz apresentou-se adequado na avaliação do mecanismo de efluxo dos fármacos antirretrovirais, o que foi confirmado com os estudos realizados em MDCK-MDR1. Assim, os fármacos antirretrovirais estudados apresentaram interação significativa com a P-gp. Em relação aos estudos de metabolismo realizados em câmaras de difusão vertical tipo Franz, os resultados demonstraram grande variação na permeabilidade dos três antirretrovirais quando o inibidor de CYP3A foi empregado, sendo: de 15,6 x 10-6 para 23,5 x 10-6 cm/s para a estavudina, de 12,6 x 10-6 para 27,3 x 10-6 cm/s para a lamivudina e de 25,4 x 10-6 para 40,5 x 10-6 cm/s para a zidovudina. Já no modelo que emprega microssomas, os resultados de metabolização na ausência e na presença de inibidor de CYP3A foram: de 16,56% para 19,79% para a estavudina, de 14,56% para 15,55% para a lamivudina e de 17,85% para 16,48% para a zidovudina. Com base nisso, sugerese o emprego de microssomas para a determinação de metabolismo, uma vez que o método ex vivo empregado demonstrou grande variação entre os valores obtidos. Desta forma, observou-se que, para cada fármaco, não houve influência significativa no metabolismo pré-sistêmico relacionado às enzimas do complexo CYP3A, o que indica que a absorção oral das referidas substâncias não é limitada por tais enzimas. Portanto, a utilização dos diferentes métodos empregados no desenvolvimento do presente trabalho permitiu compreender os mecanismos envolvidos no transporte dos fármacos antirretrovirais, o que se torna de grande relevância nas etapas de desenvolvimento farmacêutico de novas moléculas e na compreensão de eventos clínicos ainda não esclarecidos atualmente

For orally administered drugs, control of the extent and rate of absorption depends on two important steps: solubility of the drug in physiological liquids and their permeability across biological membranes. Thus, the Biopharmaceutics Classification System (BCS) has been proposed as a tool for the development of new drugs, new formulations and aid in the biowaiver processes. However, another factor related to bioavailability that should be considered in biopharmaceutic studies is the metabolism. Thus, the Biopharmaceutics Drug Disposition Classification System (BDDCS) has been proposed for drug classification according to their solubility and metabolism characteristics, so it is possible to evaluate and predict the in vivo behavior of a compound. Metabolism has been extensively investigated, especially cytochrome P450 enzymes, which are also expressed in enterocytes. Besides, BDDCS provides support in evaluating the permeability mechanisms involved in the absorption processes, drug-drug interactions and drug-food interactions. Thus, the present study aimed to evaluate the mechanisms of permeability of antiretroviral drugs through the ex vivo (Franz cells) and in vitro (PAMPA, MDCK-MDR1 and microsomes) models considering aspects related to the intestinal metabolism and efflux of these drugs. Given the importance of the use of antiretroviral drugs in drug therapy against Acquired Immune Deficiency Syndrome (AIDS) and that these drugs are usually administered in a long-term way, understanding the mechanisms involved in the permeability is of a great importance, since they are not totally elucidated and no information is found in the literature. In addition, drugs as stavudine, lamivudine and zidovudine indicate variation in the permeability, which require further scientific investigation of absorptive processes. Thus, jejunum segments from rats were used to evaluate the intestinal permeability of these antiretroviral drugs, considering the evaluation of efflux by P-glycoprotein and intestinal metabolism by CYP3A. In a complementary manner, in vitro studies using parallel artificial membranes (PAMPA) and cell cultures MDCK-MDR1 were performed to aid in the elucidation of the permeability mechanisms of antiretroviral drugs. Also, the evaluation of the metabolism was carried out using microsomes to verify if such substances are substrates of CYP3A, and verify the impact of the intestinal metabolism in the absorption. The permeability results obtained in PAMPA were: 0.74±0.11x10-6 cm/s for stavudine, 0.25±0.12x10-6 cm/s for lamivudine and 1.14±0.25x10-6 cm/s for zidovudine. In ex vivo method using the intestinal segments in Franz cells, the results were: 1.56±0.32x10-5 cm/s for stavudine, 1.26±0.27x10-5 cm/s for lamivudine and 2.54±0.49x10-5 cm/s for zidovudine. Thus, based on the results obtained from these two methods, it is suggested that the antiretroviral drugs present other transport mechanism that is different from transcellular passive diffusion. For efflux studies, results obtained from experiments performed in Franz cells shown the increase of the permeability of the three antiretroviral drugs when the P-gp inhibitor was used: from 15.6x10-6 to 42,5x10-6 cm/s for stavudine, from 12.6x10-6 cm/s to 37.5x10-6 cm/s for lamivudine, and 25.4x10-6 to 56.6x10-6 cm/s for zidovudine. In MDCK-MDR1, the permeability results were used for obtaining ratio values between the directions B→A and A→B. The Papp values obtained with 33 inhibitor shown a ratio less than 1. For ratio B→A/A→B for each drug in experiments without inhibitor, the values obtained was equal or greater than 2, which shows the interaction between drug and transporter. Based on that, the ex vivo model using intestinal segments in Franz cells seems to be adequate for evaluation of efflux mechanism of antiretroviral drugs, which was confirmed by MDCK-MDR1 studies. Thus, the antiretroviral drugs presented interaction with P-gp. For metabolism studies in intestinal segments in Franz cells, a wide range of standard deviation was observed for the three antiretroviral drugs when the CYP3A inhibitor was used: from 15.6x10-6 cm/s to 23.5x10-6 cm/s for stavudine, from 12.6x10-6 cm/s to 27.3x10-6 cm/s for lamivudine, and from 25.4x10-6 cm/s to 40.5x10-6 cm/s for zidovudine. In experiments in microsomes, the results of metabolization in the absence and presence of CYP3A inhibitor were: from 16.56 to 19.79% for stavudine, from 14.56 to 15.55% for lamivudine and from 17.85 to 16.48% for zidovudine. Based on that, it is suggested the use of microsomes for metabolism evaluation, since the ex vivo method presented high variability between the results obtained. For each drug, no significative influence in pre-systemic metabolism related to CYP3A enzymes was observed, which indicates that the oral absorption of the drugs is not limited by these enzymes. The use of different methods in this work allowed to understand the mechanisms involved in the transport of antiretroviral drugs, which is of a great relevance in drug development and in the understanding of clinical events currently not clarified

Cultivos celulares de Choibá Dipteryx oleifera Benth / Cell cultures of Choiba Dipteryx oleifera Benth

Choibá (Dipteryx oleifera Benth) es un árbol de la familia Fabaceae (Papilionoideae), con una distribución geográfica reportada desde Nicaragua hasta Colombia a una altura de hasta 1000 msnm. Crece en bosque húmedo, muy húmedo o premontano húmedo. Esta especie es considerada vulnerable debido a la sobreexplotación de su madera, ya que es un árbol altamente apetecido por esta y por sus frutos. Su almendra almacena una buena cantidad de aceites con potencial para la industria alimentaria, lo que podría resultar en una nueva fuente alimenticia, por lo cual el cultivo in vitro de vegetales con el propósito de producir compuestos de interés, marca un punto de partida para reducir el uso del suelo y lograr componentes bioactivos bajo condiciones controladas. En este trabajo, como una primera etapa experimental, se evaluó el crecimiento celular en suspensiones, a partir de callo inducido en explantes de cotiledón; se ensayaron 6 tratamientos diferentes, la mitad de estos con MS como medio basal y la otra mitad con B5, cada uno de los dos grupos con un control y la combinación hormonal de 2.5 mg/L de 2,4-D y 1 mg/L de BAP o kinetina, suplementado con adenina, biotina, glutamina y ácido pantoténico y 30 g/L de sacarosa, bajo completa oscuridad. Se encontró que dos tratamientos con MS en combinación con 2.5 mg/L de 2,4-D y 1 mg/L de kinetina o BAP fueron los mejores.

Choibá (Dipteryx olifera) is a tree of the Fabaceae family, with a geographical distribution reported from Nicaragua to Colombia, nearly 1.000 msnm in a tropical rain forest. This species is a highly desired tree for its timber and fruits, the kernel store a lot of important oils for the food industry, resulting in a new possible food source, so we are making in vitro cultivation of vegetables with the purpose of producing compounds of interest and that mark a starting point on the reduction of land use and it achieves bioactive components under controlled conditions. In this work, as a first experimental step was evaluated the tissue cell growth in suspension, using fragments of cotyledon and testing 6 different treatments, the half of those with MS as basal medium and the other half with B5, each of the two groups with one control and hormone combination of 2.5 mg/L 2,4-D and 1 mg/L BAP or kinetin, supplemented with adenine, biotin, pantothenic acid and glutamine and 30 g l sucrose under complete darkness. It was found that two treatments with MS in combination with 2.5 mg/L 2,4-D and 1 mg/L kinetin or BAP were the best.

Intravital observation technology of dorsal microcirculatory chamber and its application / 生物医学工程学杂志

Observation of microcirculation plays an important role on the basic research and clinical diagnosis. However, an observation as such on the anesthetized patient will cause stress reaction, thus it will affect normal physiological state and interfere experimental results. At present, a method adopting dorsal microcirculatory chamber (DMC) to do in vivo observation in an unanesthetized state can eliminate the influence of anesthesia. Based on the research reports and practical applications of this method abroad, we summarize, in here, the configuration, function, observation techniques; the application of DMC; and the research states of microcirculation observation.

Clonamiento y expresión heterologa en saccharomyces cerevisiae de la acuaporina 2 de trypoanosoma cruzy (TcAQP2) / Cloning and heterologous expression in saccharomyces cerevisiae of the aquaporin 2 of trypanosoma cruzi (TcAQ2)

Trypanosoma cruzi es el agente causal de la Enfermedad de Chagas, una entidad endémica no controlada y en crecimiento en Latinoamérica. El parásito, durante su ciclo de vida, se ve sometido a cambios bruscos en la osmolaridad. Tales situaciones de estrés osmótico ameritan sistemas fisiológicos que le permitan a estas células adaptarse y sovrevivir a la nueva situación. En distintos organismos, no de los elementos primordiales que intervienen en osmorregulación son las acuaporinas, proteínas de membrana pertenecientes a la familia MIP ("major intrinsec protein"), que permiten el paso selectivo de agua (acuaparinas clásicas) y otras moléculas no cargadas (acuagliceroporinas) a través de membranas biológicas, en función de gradientes osmóticos. En el genoma de T. cruzi existen cinco genes que presentan similitud con proteínas de la familia MIP. Una de estás ya ha sido caracterizada, TcAQP1 (Trypanosoma cruzi, acuaporina 1), un canal permeable solo al agua. En este artículo de investigación se inició el estudio de un segundo gen con similitud a acuaporina, al cual hemos denominado TcAQP2. El gen TcAQP2 codifica para una proteína de 276 aminoácios. Por medio de herramientas de bioinformática se realizó la predicción de las estructura de dicha proteína; posee características que permiten ubicarla dentro de la familia MIP. Se realizó el clonamiento y secuenciación de la TcAQP2, detectándose diez mutaciones silentes. Este hecho sugiere que se trata de mutaciones propias de la cepa de T. cruzi CL Brener utilizada en el desarrollo experimental de este trabajo. Posteriormente se realizó el subclonamiento de TcAQP2 en el plásmido de expresión en el modelo de levadura pYES.2 y se transformó en las células de saccharomyces cerevisiae. La expresión funcional de la TcAQP2 en dichas células, muestra evidencias de que está proteína interviene en osmorregulación cuando las células son expuestas a choques hiper-osmóticos e hipo-osmóticos...

Trypanosoma cruzi, the etiological agent of changes disease, es prevalent throughout Latin America. During its life cycle, the parasite undergoes extreme fluctuations in osmolarity, consequentrly physiological systems are required to assure its survival. In many organisms one of the more important systems involved in osmoregulation are aquaporins. These proteins are members of the major intrinsic protein family (MIP). Aquaporins can be divided in two groups according to its permeablity: the first one is only permeable to water (orthodox aquiaporins and the second one is permeable to water, glycerol, and other small, uncharged molecules (aquaglyceroporins). In the T cruzi genome there are 5 genes that encode proteins similar to aquaporins. One of these genes (Trypanosoma cruzi aquaporin 1, TcAQp1) has been already characerized as a channel that is only permeable to water. It was also demonstrated that TcAQP1 is involved in parasite osmoregulation. In this work, we started to investigate other gene with aquaporin similarity, which we named Trypanosoma cruzi aquaporin 2 (TcAQP2). The gene TcAQP2 encodes a protein of 276 aminoacids. The protein has six putative transmembrane domains and the two signature motifs asparagine-proline-alanine (NPA), which is the classical conserve motif in the MIP family proteins. Cloning and sequencing of the TcAQP2 gene allowed the detection of ten silent mutations in all clones analyzed, as compare to the sequence reported in data bank of the parasite, suggesting that they belong to the CL Brener strain used in this study. In order to analyze the TcAQP2 function, subcloning in the plasmid for heterologous expression in yeast (pYES.2) of this gene was performed. After transformation and functional expression alf TcAQP2 in Saccharomyces cerevisiae, cells were exposed to osmotic stress. The results indicate that this protein is involved in osmoregulation, and suggest that TcAQP2 participate as a channer for water and/or glycerol in...

Difusão transdentinária e citotoxicidade de sistemas adesivos autocondicionantes / Transdentinal diffusion and cytotoxicity of self-etching adhesive systems

Este estudo avaliou a difusão transdentinária e a toxicidade de sistemas adesivos autocondicionantes de diferentes valores de pH sobre células odontoblastóides MDPC-23. Sessenta discos de dentina (0,4 mm de espessura) foram obtidos de terceiros molares humanos hígidos e divididos em 6 grupos após a mensuração de sua condutância hidráulica pelo Flodec. Os discos foram montados em câmaras pulpares in vitro, onde 30.000 células foram plantadas no seu lado pulpar (área dentina exposta 0,28 cm2) e mantidas em cultura por 48 h. Após este período, os sistemas adesivos Clearfil SE Bond, Clearfil Protect Bond, Adper Prompt e Xeno III foram aplicados no lado oclusal dos discos. O sistema adesivo Single Bond foi usado como controle positivo e a solução tampão fosfato como controle negativo. A citotoxicidade foi avaliada após 24 horas pelo teste MTT e a morfologia celular por MEV. A difusão transdentinária foi qualificada por CG/EM. Os valores de MTT para os sistemas autocondicionantes, analisados pelos testes de Kruskall-Wallis e Mann-Whitney, foram estatisticamente diferentes do grupo controle negativo. Houve redução da viabilidade celular de 47,8%; 46,5%; 42,1% e 28,0% para o Clearfil SE Bond, Xeno III, Clearfil Protect Bond e Adper Prompt L-Pop, respectivamente. A redução da viabilidade celular foi inferior ao Single Bond (53,1%) para todos os sistemas. A análise por CG/MS identificou o HEMA como principal componente químico difundido pela dentina. Foi possível concluir que todos os sistemas adesivos autocondicionantes avaliados apresentaram difusão transdentinária resultando em redução do metabolismo celular, a qual não foi relacionada a sua capacidade de dissolução da smear layer e desmineralização da dentina subjancente.

Calogênese do híbrido Theobroma grandiflorum x T. obovatum (Sterculiaceae) / Calogenesis of Theobroma grandiflorum x. T. obovatum hibrid (Sterculiaceae)

O declínio da cacauicultura na amazônia tem sido causado pela doença vassoura-de-bruxa (Crinipellis perniciosa). Um híbrido interespecífico do mesmo gênero (Theobroma grandiflorum x T. obovatum) tem demonstrando resistência a esta doença. Avaliou-se a calogênese deste híbrido com a finalidade de sua propagação massiva. Os explantes usados (tegumento, cotilédone e embrião) foram postos para desenvolver em condições estéreis em meio de cultura LPm mais água de coco (50 ml/l), glucose (20 g/l), 2,4 - D (2 mg/l), Thidiazuron - TDZ nas concentrações de 0, 5 e 10 æg/l, carvão ativado (2 g/l) em gelrite (2 g/l) a um pH de 5,8. Cada concentração de TDZ x tipo de tecido foi considerado um tratamento. As culturas foram mantidas no escuro, à temperatura de 22 ± 2 °C. Os tecidos não mostraram diferenças significativas quanto a proporção do explante recoberto por calos (p= 0,14) embora notou-se que nos cotilédones tenha sido maior. A dosagem de TDZ nitidamente não influenciou no recobrimento de calos (p= 0,94). Quanto a freqüência, os tecidos mostraram diferentes capacidades de desenvolver calos (p= 0,02) sem mostrar-se influenciados pela dosagem de TDZ (p = 0,66). Os explantes de cotilédones foram os que formaram calos em maior freqüência. Houve uma leve tendência de que quanto menor a dosagem de TDZ maior a freqüência de calos obtidos. Não foi constatada interação entre tipo de calo/frasco x dosagem de TDZ (p = 0,32).

Decline of cocoa plantations in Amazonia has been attributed to Witches-broom-disease (Crinipellis perniciosa). An interspecific hybrid (Theobroma grandiflorum x T. obovatum) has demonstrated resistance to this disease. Calogenesis of this hybrid was evaluated, in preparation for its mass propagation. The explants used (tegument, cotyledons and embryos) were developed in sterile conditions in LPm media plus coconut milk (50 ml/l), glucose (20 g/l), 2,4 - D (2 mg/l), Thidiazuron - TDZ at concentrations of 0, 5 e 10 æg/l, and activated charcoal (2 g/l) in gelrite (2 g/l) at pH 5.8. Each concentration of TDZ x kind of explant was considered a treatment and were kept in the dark at a temperature of 22 ± 2 °C. Explants did not show significant differences in the proportion of callus recovery (p= 0,14) although cotyledons did have the highest value. TDZ level did not influence callus recovery (p= 0,94). Different explants resulted in different frequencies of callus development (p= 0,023) but were not been influenced by the doses of TDZ (p = 0,66). Cotyledon explants displayed the highest values for frequency of callus development. There was also a slight trend that lower levels of TDZ resulted in higher frequencies of callus development. There was no interaction between kind of callus/flasks x doses of TDZ (p = 0,32).

Caged Pancreatic Islet for IDDM

The goals of this research are to improve the functionality (insulin secretion rate and pattern) and to expand the life-span of immunoprotected pancreatic islets. The low functionality (less than 15% of the insulin release rate of native islets in pancreas) required a large number of islets within the implant, which causes complications in surgery and discomfort for patients. The limited life-span of the islets in a biohybrid artificial pancreas (BAP) may require frequent cell reseeding and cause further supply problems in islet transplantation. Improved islet functionality and prolonged life-span will minimize the volume of the BAP by reducing the number of islets needed for diabetic patients to achieve normoglycaemia and reduce problems associated with islet supply. It is hypothesized in this research that 1) by mimicking facilitated oxygen transport in avascular tissues, the immunoprotected islets release a higher amount of insulin, recover their intrinsic biphasic release pattern, and prolong their life-span, and 2) insulinotropic agents further promote insulin secretion from islets. Based on these hypotheses, a new BAP system will be designed which contains the water-soluble polymeric conjugates of oxygen carriers (or oxygen binding vehicles) and islet stimulants of sulfonylurea compounds and glucagon-like insulinotropic peptide-1 with entrapped islets in the BAP. The research examines their effects on islet viability, the amount of insulin secretion, the insulin release profile, and the life-span of immunoprotected pancreatic islets. Especially, the combined synergy effects of both hypotheses will be emphasized. The successful results in improving functionality and life- span of islets entrapped in an immunoprotected membrane can be applied in the delivery of microencapsulated therapeutic cells and to the miniaturization of a BAP. In addition, the approaches proposed in this research will provide a potential solution to the shortage problem of human cell or tissue sources.

ESBL producing Nosocomial Enterobacteria isolated from clinical specimens detected by double disc diffusion method

To identify extended spectrum betalactamases [ESBL] producing organisms of Enterobacteriacae family from clinical specimens. Simple descriptive study Setting: The study was carried out in Microbiology Department of Army Medical College, Rawalpindi from 1 Jan 02 to 31 Dec 02 on clinical samples received from admitted patients in Military hospital, Rawalpindi Samples consisting of urine, blood, high vaginal swabs, catheter tips, fluids including CSF, sputum, chest tube, [HVS] and IV canula central vascular line specimens received for routine culture from outpatient as well as indoor cases of Rawalpindi/Islamabad. The samples were inoculated on Blood agar and Mac Conkeys agar [chocolate agar was also used for sputum and CSF]. Urine samples were cultured on CLED agar. The samples were incubated at 37C under aerobic conditions. The organisms were identified by standard techniques. Confirmation to the species level was done by API 20 E and API NE where required. Sensitivity testing was carried out by Modified Kirby Bauer disc diffusion method on Mueller Hinton agar incubated at 37°C in ambient air for 24 hrs. ESBL producing strains were identified by double disc diffusion method test according to Jarlier et al [1988]. Clavulanate was applied as the inhibitor of beta lactamases [AMO/CLAY disc].The results were tabulated as frequencies. 1. Forty seven percent of clinical isolates yielded ESBL producing enterobacteria. 2. Enterobacter cloacae, Klebsiella oxytoca, Proteus mirabilis and Klebsiella pneuumoniae were the most frequent ESBL producing bacteria. These bacteria were frequently recovered in fluids, drainage tubes/ catheter tips and canulas

Obtencion de zinniol producido por Altenaria tagatica / Obtaining of zinniol produced by Tagatica Altenaria

Altenaria Tagetica es el agente causal del "tizon temprano" en plantas de cempazuchilti (tagetes erecta). Este hongo produce compuestos fitotoxicos der los cuales se ha determinado como elde mayor produccion al zinniol.En el presente estudio se describe la deteccion y purificacion de este metabolito contenido en el filtrado de cultivo de A. tagetica cuando es cultivado y multiplicado en el medio casamino enriquesido con infusion de las hojas de cempazuchitl en condiciones estacionarias y contenido en la resina DIAION HP-20 incubado bajo las mismas condiciones

Aplicación de un método alternativo al conteo en cámara de Neubauer para determinar la concentración de Trichomonas vaginalis / Application of an alternative method to counting in Neubauer chamber to determine Trichomonas vaginalis concentrations

Se demostró que existe relación entre la concentración celular y la lectura de los parásitos en un lector de ELISA. Se determinó que la absorbancia tiene valores significativos en las longitudes de onda del rango visible y se escogió la longitud de onda mínima posible (450 nm) para garantizar un máximo de sensibilidad. Pudo comprobarse que ocurre un aumento significativo de la absorbancia (p<0,001) después de llenada la placa, que se estabiliza en el intervalo de 40 min hasta 4 h. Al aplicar 100, 150, 200 ó 300 µL por pozo de las diferentes concentraciones de células se demostró que el volumen óptimo era de 150 µL, se obtuvo un r2 = 0,9986, y resultaron altamente significativos el coeficiente de correlación (p<0,001) y la pendiente (p<0,001). En el intervalo de 5 x 104 a 1,5 x 107 células/mL se obtuvo un coeficiente de variación medio de 1,75 porciento (0,25-3,17 porciento). En estas condiciones el límite de cuantificación fue de 5,14 x 104 células/mL. Por último se demostró que hubo significación de la correlación entre el conteo en cámara de Neubauer y la densidad óptica

Estudio de la regeneración de nervio periférico a través de cámaras permeables de silicona con poros de 10 y 60 micras / A study of peripheral nerve regeneration in permeable silicone chambers with 10 and 60 micrometer pores

Se entubó el nervio ciático de ratas, luego de un corte transverso, utilizando una cámara de silicona de 14 mm de largo que tenía dos ventanas de 8mm de largo cubiertas con malla de 10 o 60 µm. Después de 6 meses, los animales se perfundieron con una mezcla de glutaraldehído y paraformaldehído, y se evaluó el aspecto microscópico de los nervios regenerados en dos niveles dentro de la cámara (3 mm y nivel medio) y 5 mm distal a ésta. Se contó el número de fibras mielínicas presentes en cada nivel y tratamiento, y se realizó una comparación entre ellos. Se encontro una importante desorganización del endoneurio a nivel medio de la cámara. Distalmente, los conteos de fibras mielínicas fueron muy bajos. No se observaron diferencias significativas entre los grupos con mallas de 10 y 60 µm. En conclusión, la presencia de poros de 10 o 60 µm no impide la entrada masiva de fibroblastos a la cámara, llevando a una marcada desorganización del nervio regenerado

Cell envelope components of Yersinia pestis grown in intraperitoneal diffusion chambers

The electrophoretic profiles binding of penicillin binding proteins (PBPs) and outer membrane proteins (OMPs) of Yersinia pestis EV 76 were determined following in vivo growth in diffusion chambers implanted in the peritoneal cavity of mice. In contrast to Y. pestis grown under in vitro conditions which activate the low calcium response (LCR) regulon there was no significant qualitative or quantitative change of the PBP profile of Y. pestis cells during growth in diffusion chambers for up to 72 h following implatation in mice. Three OMPs, with molecular weight of 100, 60 and 58 kDa, were expressed in Y. pestis cells grown for 24 h, but not at 48 h or at 72 h, in diffusion chambers. These results indicate that growth of Y. pestis in intraperitoneal diffusion chambers activates genes which might be relevant to the growth in the mammal host.

Efecto de la permeabilidad en la regeneración del nervio ciático entubado de rata / Effect of the permeability on tubed rat sciatic nerve regeneration

Se seccionaron nervios ciáticos de rata adulta y se introdujeron en cámaras de regeneración dejando un espacio de 10mm entre las extremidades del nervio. En las paredes de estas cámaras, se practicaron 2 o 9 agujeros de 4mm. En otro grupo de animales, no se practicó ningún agujero en las cámaras. Una, dos y cuatro semanas después de la cirugía, se perfundieron los animales y se evaluó la histología de los regenerados. Adicionalmente, a las cuatro semanas se contó el número de fibras mielínicas y se midió el área de los regenerados. Se observa una aceleración del proceso de regeneración que depende del número de agujeros practicados. El número de fibras mielínicas y el área del regenerado también se incrementan con el número de agujeros