N-acetylaspartylglutamate acetoxymethyl triester (NAAG.AM) as a tool for loading the neuropeptides NAAG and succinimidyl-NAAG into intact cells: effect on [3H]-dopamine exocytosis

Although N-acetylaspartylglutamate (NAAG) is one of the neuropeptides found in highest concentrations in the mammalian central nervous system, its functional role in neuronal signaling has not been definitively established. In some neuronal populations, NAAG is concentrated in nerve terminals and thus, it may play a role in the cytoplasmic events underlying neurotransmitter exocytosis. In the present study we have validated the use of the synthetic derivative NAAG-acetoxymethyl triester (NAAG.AM) as a tool to increase the intracellular levels of the peptide and assessed the ability of NAAG to regulate [3H]-dopamine ([3H]-DA) secretion in PC12 cells. Enzymatic degradation of NAAG.AM by nonspecific brain esterases resulted in the progressive formation of NAAG and succinimidyl-NAAG (Asu-NAAG). However, only 8 percent of NAAG.AM was converted to NAAG. Significant amounts of NAAG (1 nmol/mg protein) were demonstrable in cultures of the neuroblastoma cell line N2A following incubation with NAAG.AM for 2 h, with the concentration of (Asu)-NAAG being at least 100-fold higher. The pheochromocytoma cell line PC12 was used to assess the influence of loaded NAAG derivatives on [3H]-DA exocytosis. Incubation with 0.1-1 mM NAAG.AM did not affect the basal efflux or total content of [3H]-DA. However, it induced a dose-dependent decrease of [3H]-DA secretion in response to 56 mM KCI depolarization reaching an inhibition of 49 percent with 1 mM NAAG.AM. In contrast, NAAG.AM did not affect secretion induced by the calcium ionophore A23187 (100 microM). The present study validates the use of NAAG.AM as a tool to load NAAG derivatives into intact cells and provides preliminary evidence for an intracellular role of the peptide.

Posibilidades de utilizar dipéptidos parentales en nutrición clínica

En los últimos años se han estudiado a fondo los efectos de los péptidos intravenosos. Las soluciones de dipéptidos son un medio para suministrar determinados aminoácidos que podrían ser inidispensables en ciertas condiciones clínicas. En particular, podría ser díficil administrar aminoácidos tales como la cistina, la glutamina y la tirosina en su forma libre, mientras que su disponiblidad aumenta considerablemente cuando se suministran en forma de dipéptidos. Losestudios en animales y en seres humanos han demostrado que los dipéptidos parentales son eliminados rápidamente del plasma e influyen favorablemente sobre el balance del nitrógeno tanto en individuos sanos como en pacientes catábolicos.(RESUMEN TRUNCADO A 2.500 CARACTERES)

Revisión: Dipéptidos en nutrición parental: de la ciencia básica a las aplicaciones clínicas

Los dipéptidos intravenosos parecen ser un medio muy prometedor para suministrar aminoácidos que de otra manera sería difícil administrar a través de infusiones de nutrientes. Ya se han hecho estudios experimentales y en seres humanos para analizar las propiedades fisicoquimicas y el metabolismo de muchos dipéptidos. Se ha descubierto que estos agentes, al igual que los aminoácidos libres aplicados por via intravenosa, pueden ahorrar nitrógeno y mantener los mismos niveles de proteína sérica. Otro beneficio es la posibilidad de administrar ciertos aminóacidos relativamente inestables o de mala solubilidad en las soluciones acuosas. En esta revisión se describen estos distintos aspectos de los dipéptidos intravenosos