Extracellular expression in Bacillus subtilis of a thermostable Geobacillus stearothermophilus lipase

BACKGROUND The extracellular expression of enzymes in a secretion host such as Bacillus subtilis is a useful strategy in reducing the cost of downstream processing of industrial enzymes. Here, we present the first report of the successful extracellular expression in Bacillus subtilis WB800 of Geobacillus stearothermophilus lipase (T1.2RQ), a novel industriallydesirable thermostable lipolytic enzyme which has an excellent hydrolytic and transesterification activity. Signal peptides of a-amylase, extracellular protease, and lipase A, as well as two different promoters, were used in the secretion and expression of lipase T1.2RQ. RESULTS Lipase activity assay using p-nitrophenyl laurate showed that all three signal peptides directed the secretion of lipase T1.2RQ into the extracellular medium. The signal peptide of lipase A, resulted in the highest extracellular yield of 5.6 U/ml, which corresponds to a 6-fold increase over the parent Bacillus subtilis WB800 strain. SDS-PAGE and zymogram analysis confirmed that lipase T1.2RQ was correctly processed and secreted in its original size of 44 kDa. A comparison of the expression levels of lipase T1.2RQ in rich medium and minimal media showed that the enzyme was better expressed in rich media, with up to an 8-fold higher yield over minimal media. An attempt to further increase the lipase expression level by promoter optimization showed that, contrary to expectation, the optimized promoter exhibited similar expression levels as the original one, suggesting the need for the optimization of downstream factors. CONCLUSIONS The successful extracellular secretion of lipase T1.2RQ in Bacillus subtilis represents a remarkable feat in the industrial-scale production of this enzyme

Bacillus cereus e Geobacillus stearothermophilus em leite ultra alta temperatura (UAT) / Bacillus cereus and Geobacillus steartothermophilusin ultra high temperature (UHT) milk

O objetivo deste trabalho foi avaliar a presença de B. cereus e G. stearothermophilus em 100 amostras de leite UAT (integral e desnatado). O isolamento dos esporos e das células vegetativas seguiu metodologias oficiais, com pequenas modificações. B. cereus foi isolada de 7% amostras de leite UHT, de 6 diferentes marcas. As contagens máximas de células vegetativas e esporos de B. cer eus foram de 3,54 Log UFC/mL e 3,93 Log esporos/mL, respectivamente. A presença dos genes codificadores de enterotoxina não hemolítica (NHE) foi observada em 33% dos isolados e da hemolisina (HBL ) em 100% dos isolados. O gene hblA foi encontrado em 91,6 % dos isolados, porém nenhum isolado apresentou os 3 genes do complexo HBL. G. stearothermophilus foi identificada em 22,8% (34/149) dos isolados de esporo altamente resistente ao calor (HRRS), representando 18% das amostras de leite UAT e as contagens de esporos variaram de < 1Log a 3,40 Log esporos/mL.

Verificación biológica de los ciclos de esterilización / Biologic verification of the sterilization cycles

En 55 meses se realizaron 2,920 pruebas con IB en 91 consultorios dentales de la República Mexicana. El 71.4 por ciento (n=2,084) de los ciclos de esterilización fue en vapor de agua a presión, el 9.4 por ciento (n=274) vapor químico a presión, y el 19.2 por ciento (n=562) en calor seco. El 67.6 por ciento (n=1974) de las pruebas se realizó en forma semanal, el 16.9 por ciento (n=493) quincenal y el 15.5 por ciento (n=453) mensual. Se detectaron fallas en 7.6 por ciento (n=223) de todos los ciclos de esterilización. El 7.5 por ciento (n=156) en vapor de agua a presión, el 7.7 por ciento (n=21) en vapor químico a presión y el 8.2 por ciento (n=46) de los ciclos de calor seco. Todos los métodos de esterilización empleados fallaron con frecuencias similares (X = 0.307, P mayor 0.8)

Análisis de algunos indicadores biológicos disponibles comercialmente en México / Analysis of some biological markers available in Mexico

El objetivo de esta investigación fue comparar, mediante las pruebas descriptas en la farmacopea de los Estados Unidos Mexicanos, diversos indicadores biológicos (IB) contra las cepas de Bacillus subtilis 9372 y B. stearothermophilus 7953 del catálogo de la ATCC. Se observó que las cepas ATCC y los IB provenientes de fabricantes extranjeros cumplen con las características morfológicas, bioquímicas y de cultivo estipuladas por la FEUM. De hecho, los fabricantes extranjeros establecen que sus productos están elaborados con las cepas ATCC. Por el contrario, algunos IB de fabricación nacional no son elaborados con las cepas ATCC. El aislado de B. subtilis, para verificar la esterilización por calor seco, se comporta como la cepa ATCC-9372, mientras que los indicadores para vapor a presión, supuestamente B. stearothermophilus, se comportan como B. subtilis sin pigmento. El fabricante de IB deberá documentar la veracidad de sus afirmaciones y proporcionar información que permita al usuario la selección de productos adecuados. Las instrucciones de uso deberán ser precisas

Produçäo e controle de qualidade de indicadores biológicos para esterilizaçäo a vapor / Production and quality control of biological indicator for steam sterilization

O desenvolvimento de Indicador Biológico para a esterilizaçäo a vapor, a partir de esporos do Bacillus stearothermophilus, sob a forma de frasco-ampola, contendo meio de cultura e indicador de pH, é descrito de forma detalhada, bem como os testes de controle de qualidade, principalmente, os de resistência térmica, visando a qualificaçäo do produto dentro dos padröes internacionais. O uso do Indicador Biológico é fundamental para garantir a qualidade de produtos e serviços que dependem do processo de esterilizaçäo. A sua produçäo ao nível de laboratórios clínicos e industriais é viável, devido à facilidade de sua metodologia e por requerer materiais, equipamentos e técnicas simplificadas de microbiologia

Investigación de inhibidores microbianos en productos cárnicos / Microbial inhibitors survey in meat products

El uso de productos químicos para prevenir o retardar la descomposición de alimentos perecederos es muy frecuente. Dentro de estos compuestos se encuentran los antibióticos cuyo uso como conservadores se debe en gran parte a su efectiva terapéutica en el tratamiento de enfermedades bacterianas. Los antibióticos pueden ser agregados al alimento procesado, o bien ser residuos de medicamentos utilizados en el tratamiento de animales enfermos o adionarse como promotores del crecimiento. Desde el punto de vista microbiótico, los principales problemas que se derivan de la presencia de los residuos de antibióticos en alimentos son: enmascarar malas práctica higiénicas, producir alergias en los consumidores, afectar la flora normal del alimento e interferir en la elaboración de productos fermentados. El objetivo de este trabajo fue investigar la frecuencia de estos compuestos en productos cárnicos, el método consistió en determinar el efecto del inhibidor por difusión en placa sobre el crecimiento de esporas de Bacillu stearothermophilus var. calidolactis (ATCC 10149). Se analizaron 301 muestras y se encontró el 31.5% de ellas positivas. El promedio del diámetro del halo de inhibición fue de 8.6 mm